电针不同腧穴对急慢性结肠炎大鼠髓过氧化物酶（MPO）含量的影响

薛美婷，闫丽萍，韩国伟，卢 庭，谢保弟

（山西中医学院，山西太原030024）

电针不同腧穴对急慢性结肠炎大鼠髓过氧化物酶（MPO）含量的影响

薛美婷，闫丽萍，韩国伟，卢 庭，谢保弟

（山西中医学院，山西太原030024）

●“实验”虽然是现代科学研究常用的方法，然在我国却自古有之。古代学者王冲说“等类众多，行事比肩，略举较著，以定实验也”，颜之推说“昔在江南，不信有千 人帐，及来河北，不信有二万斛船，皆实验也”，大凡此义均与现代科学意义上的experiment相通。照此，传统中医药学并非只是经验之学，而更充满实验的思想和方法。实验中医药学，将现代实验科学的方法和传统中医药学的实验方法融合起来，开拓现代实验生物学、医学和药物科学的新领域。

目的：观察电针不同腧穴对急、慢性结肠炎模型大鼠结肠组织中髓过氧化物酶（MPO）含量的影响。方法：急性实验取60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、大肠俞组、天枢组、足三里组、上巨虚组，每组10只，雌雄各半，用6%冰醋酸灌肠造模，造模后治疗3 d，麻醉取病变结肠组织，用ELISA法测定MPO含量。慢性实验SD大鼠分组同急性实验，用免疫学加局部刺激法造模，治疗3 d后各组处死一半检测MPO含量，其余继续治疗7 d后取材测定MPO含量。结果：急性实验中，与空白组比较，模型组MPO含量升高（P＜0.01）；与模型组比较，腧穴组MPO含量均下降（P＜0.01）；天枢组较其他腧穴组MPO含量下降（P＜0.05）。慢性实验治疗3 d后，天枢和上巨虚两组较大肠俞和足三里两组MPO含量下降（P＜0.05）；治疗10 d后，天枢组较其他腧穴组MPO含量下降（P＜0.01）。结论：电针大肠俞、天枢、足三里、上巨虚均可降低急慢性结肠炎大鼠结肠组织中MPO含量，其中天枢组效果较佳。

结肠炎；大鼠；髓过氧化物酶；MPO

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 急性结肠炎实验：清洁级SD大鼠60只，体质量（190±10）g，雌雄各半，许可证号：SCXK-（京）2014-0013。慢性结肠炎实验：清洁级SD大鼠120只，体质量（190±10）g，雌雄各半，许可证号：SCXK-（军）2012-0004。均购自北京海淀兴旺实验动物养殖场。

1.1.2 试剂与仪器 冰乙酸（天津市光复科技发展有限公司）、髓过氧化物酶ELISA检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），完全弗氏佐剂（美国sigma公司）；一次性使用无菌针灸针、华佗牌SDZ-Ⅱ电针治疗仪（苏州医疗用品有限公司）、低速冷冻离心机（湘仪离心机仪器有限公司）、匀浆机（型号：02-0510，美国）、超低温冰箱（中科美菱低温科技有限责任公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 电针不同腧穴对急性结肠炎模型大鼠髓过氧化物酶（MPO）的影响 60只SD大鼠适应性饲养1 w后，随机分为空白组、模型组、大肠俞组、天枢组、足三里组、上巨虚组，每组10只。参考文献［1］用6%冰醋酸灌肠造模，造模前24 h大鼠禁食不禁水，用直径为2 mm的聚氯乙烯管插入大鼠肛门内8 cm，除空白组注入生理盐水1 mL外，其他组均注入6%冰醋酸1 mL，准确定时15 s后，用5 mL生理盐水冲洗。

空白组不作干预；模型组除不针刺外，余处理同其他各腧穴组；其余各组造模后即刻捆绑固定，电针双侧对应穴位。穴位定位参照文献［2］，大肠俞：腰部第4腰椎棘突下，旁开5 mm；天枢：脐中旁开5 mm［3］；足三里：膝关节后外侧，在腓骨小头下5 mm；上巨虚：足三里向下5 mm。电针选用疏密波，以电针局部微微颤动为度，1次/d，30 min/次，共3次。大鼠于第3次电针治疗后24 h腹腔注入10%水合氯醛溶液麻醉，低温取病变结肠组织，冰生理盐水冲洗后滤纸吸干，液氮罐中放一段时间后取出，保存于-80℃超低温冰箱备用。用ELISA试剂盒检测MPO的含量。

1.2.2 电针不同腧穴对慢性结肠炎模型大鼠髓过氧化物酶（MPO）的影响 分组同1.2.1。造模采用免疫学加局部刺激制备慢性结肠炎大鼠模型，参照徐叔云等主编的《药理实验方法学》［4］及文献［5-6］。取家兔新鲜结肠黏膜层，加适量生理盐水制成黏膜匀浆，冷冻24 h，溶冻后以3 000 r/min离心30 min，取上清液测定蛋白质含量，使用时与完全弗氏佐剂等量混匀。首次于足跖内注射抗原3 mg，并于第10天、第17天、第24天、第31天分别在足跖、背部、腹股沟、腹腔内注射抗原6 mg（末次注射不加完全弗氏佐剂）。禁食24 h，用10%的水合氯醛麻醉后，用1%福尔马林1.5 mL灌肠，留置1 h后用生理盐水冲洗。再用抗原液8 mg灌肠，留置2 h后生理盐水冲洗。治疗次数由3次改为10次，余同1.2.1。大鼠治疗3 d后各组处死一半，剩余大鼠继续治疗7 d后处死，余同1.2.1。

1.3 统计学方法

2 结 果

急性结肠炎实验中：与空白组比较，模型组MPO含量升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，腧穴组MPO含量均下降，差异有统计学意义（P＜0.01）；天枢组较其他腧穴组MPO含量下降（P＜0.05）。结果见表1。

表1 急性结肠炎大鼠结肠组织MPO含量比较 （±s）

表1 急性结肠炎大鼠结肠组织MPO含量比较 （±s）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与天枢组比较，3）P＜0.05

组别 n MPO（U/g）空白组 10 3.34±0.15模型组 10 6.36±0.201）大肠俞组 10 5.42±0.262）3）天枢组 10 5.19±0.152）足三里组 10 5.55±0.282）3）上巨虚组 10 5.40±0.152）3）

慢性结肠炎实验中：治疗3 d后，与空白组比较，模型组MPO含量升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，腧穴组MPO含量均下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；天枢组较大肠俞、足三里两组MPO含量下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；上巨虚组较大肠俞、足三里两组MPO含量下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。结果见表2。

表2 慢性结肠炎大鼠治疗3 d结肠组织MPO含量比较 （±s）

表2 慢性结肠炎大鼠治疗3 d结肠组织MPO含量比较 （±s）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05；与天枢组比较，3）P＜0.05；与上巨虚组比较，4）P＜0.05

组别 n MPO（U/g）空白组 10 2.78±0.17模型组 10 5.21±0.191）大肠俞组 10 4.56±0.122）3）4）天枢组 10 4.34±0.142）足三里组 10 4.57±0.172）3）4）上巨虚组 10 4.38±0.072）

治疗10 d后，与空白组比较，模型组MPO含量升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，腧穴组MPO含量均下降，差异有统计学意义（P＜0.01）；天枢组较其他腧穴组MPO含量显著下降（P＜0.01）。结果见表3。

表3 慢性结肠炎大鼠治疗10 d结肠组织中MPO含量比较（±s）

表3 慢性结肠炎大鼠治疗10 d结肠组织中MPO含量比较（±s）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与天枢组比较，3）P＜0.01

组别 n MPO（U/g）空白组 10 2.83±0.24模型组 10 5.27±0.261）大肠俞组 10 4.47±0.152）3）天枢组 10 3.94±0.222）足三里组 10 4.44±0.132）3）上巨虚组 10 4.27±0.132）3）

3 讨 论

结肠炎属于肠道炎症病变，从中医学角度辨证，多责于大肠、脾胃的功能失常。大量临床和实验研究表明，针刺穴位能有效改善结肠炎的肠黏膜损伤。本实验电针大肠俞、天枢、足三里、上巨虚4个穴位治疗结肠炎，大肠俞是大肠经的背俞穴，早期实验发现俞募配穴、合募配穴对大肠腑病均有一定治疗作用，其中以合募配穴效应较佳［7］。天枢是大肠经的募穴，实验表明艾灸天枢和足三里均能改善大鼠溃疡性结肠炎损伤，天枢治疗效果更好［8］。足三里为胃经合穴，也是其下合穴，是胃经经气合于脏腑的部位，针刺足三里等穴位能够很好地改善溃疡性结肠炎病变［9］。上巨虚是大肠经下合穴，动物实验显示，电针消化系统的下合穴能降低溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜溃疡及炎症评分，电针上巨虚在此方面的疗效较足三里等穴位佳，且存在一定的特异性［10］。结肠炎大多属于气滞血瘀，血败肉腐，产生溃疡。气行血自行，血行脓自化，大肠俞是大肠经的背俞穴，天枢穴是大肠经的募穴，都有调畅气血的作用。足三里和上巨虚分别是胃经、大肠经下合穴，下合治内腑，通过针刺足三里或者上巨虚能够刺激胃肠蠕动，调节肠道微循环，改善结肠炎症损伤。

MPO是主要存在于中性粒细胞嗜天青颗粒中的一种酶，是判定中性粒细胞在组织中浸润程度的一种可靠指标，也是常用的评价肠道炎症程度的指标［11］。测定MPO含量可有效地评价结肠炎的病理改变情况和炎症严重程度。本实验结果表明，在急性结肠炎和慢性结肠炎模型大鼠结肠组织中MPO含量均明显升高。电针4个不同穴位治疗，MPO含量均有降低，表明针刺大肠俞、天枢、足三里、上巨虚均可有效改善结肠炎症。在急慢性结肠炎实验中，与其他治疗组比较，天枢组的治疗效果更佳，可能与穴位的相对特异性有关。

［1］祁超，闫丽萍，燕平，等.电针腧穴“肠病方”对UC模型大鼠IL-6及NF-кВp65的影响［J］.山西中医学院学报，2013，14（4）：2-4.

［2］李忠仁.实验针灸学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：425-430.

［3］王海军，冀来喜.关于大鼠神阙穴的定位［J］.针刺研究，2007，32（4）：312.

［4］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2001：1 335.

［5］陈治水，张志清，聂志伟，等.溃疡性结肠炎动物模型与健脾灵复健作用的研究［J］.中西医结合杂志，1990，10（8）：488-490.

［6］刘万里，沈洪，单兆伟，等.肠安胶囊修复溃疡性结肠炎大鼠结肠损伤研究［J］.天津中医学院学报，2003，22（4）：7-9.

［7］陈楚淘，严杰，田浩梅，等.电针天枢配大肠俞、天枢配上巨虚对溃疡性结肠炎模型大鼠血清NO、MDA影响的比较研究［J］.中医药导报，2008，14（12）：1-3.

［8］葛维.艾灸天枢和足三里对UC大鼠结肠组织中MMP-1和TIMP-1表达的影响［D］.沈阳：辽宁中医药大学，2014.

［9］孙东.针灸治疗溃疡性结肠炎疗效观察［J］.中外医疗，2012（31）：114-115.

［10］易细芹.电针大肠下合穴上巨虚等对UC模型大鼠TNF-α及NF-κB的影响［D］.长沙：湖南中医药大学，2015.

［11］双源，闫丽萍，燕平，等.电针腧穴“肠病方”对肠黏膜损伤大鼠MPO和IL-10表达的影响［J］.山西中医学院学报，2013，14（3）：4-6.

（编辑：梁葆朱）

Effect of electroacupuncture at different acupoints on the content of myeloperoxidase（MPO）of acute and chronic colitis model rats

Xue Meiting，Yan Liping，Han Guowei，Lu Ting，Xie Baodi （Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To observe the effects of electroacupuncture at different acupoints on MPO content in colon tissue of rats of acute and chronic colitis.Methods：Acute experiment：60 SD rats were randomly divided into blank group，model group，Dachangshu group，Tianshu group，Zusanli group and Shangjuxu group，and there were 5 males and 5 females in each group.Models were prepared by 6%acetic acid enema.3 days after treatment，colon tissue was taken and MPO activity was measured by ELISA.Chronic experiment：rat grouping method was same with acute experiment.Models were prepared by immunology plus local stimulation.3 days after treatment，half of rats in each group were executed and their MPO contents were detected.10 days after treatment，the rest of the rats were executed and their MPO contents were detected.Results：In the acute experiment，compared with blank group，MPO content in model group was increased（P＜0.01）；compared with model group，MPO content in all acupoint treatment groups was decreased（P＜0.01）；compared with other groups，MPO content in Tianshu group was decreased（P＜0.05）.In chronic experiment，3 day after treatment，MPO content in Tianshu and Shangjuxu groups was lower than that in Dachangshu and Zusanli groups（P＜0.05）；10 days after treatment，MPO content in Tianshu group was decreased compared with all other groups（P＜0.01）.Conclusions：Electroacupuncturing at Dachangshu，Tianshu，Zusanli and Shangjuxu can reduce MPO content in colon tissue of acute and chronic colitis rats，in which the effect of Tianshu group is best.

colitis；rat；myeloperoxidase；MPO

R285.5

A

1671-0258（2017）02-0015-03

山西省自然科学基金项目（2014011044-5）

薛美婷，在读硕士，E-mail：897842268@qq.com

闫丽萍，副教授，硕士研究生导师，E-mail：15034400862@163.com同特定穴，观察电针不同特定穴对急慢性结肠炎大鼠结肠组织MPO的影响，进而初步探讨针刺治疗结肠炎的机理，为临床治疗不同类型结肠炎提供一定的实验室依据。

结肠炎临床多表现为腹痛、腹泻，发病率在我国呈上升趋势。结肠炎有急性与慢性两种类型，无论是急性还是慢性结肠炎，多与脾胃、大肠功能失调有关。大量文献表明针灸对于肠道炎症有很好的疗效，本文以急性与慢性结肠炎模型大鼠为研究对象，电针大肠俞、天枢、足三里、上巨虚4个不