扶正培本方对CIK细胞免疫治疗的影响

欧阳郴生，李时光，杨振江，古宏晖，刘心亮，陈 钟，汪桃利，李 琦

（广州中医药大学深圳临床医学院，广东深圳518033）

扶正培本方对CIK细胞免疫治疗的影响

欧阳郴生，李时光，杨振江，古宏晖，刘心亮，陈 钟，汪桃利，李 琦

（广州中医药大学深圳临床医学院，广东深圳518033）

Eeffect of Fuzheng Peiben decoction on CIK cell immunotherapy

目的：癌症是全球发病和死亡的主要原因，已逐步成为我国居民的主要慢性疾病之一，对个人与社会均造成巨大负担。肿瘤治疗除了常规手术、放化疗之外，免疫治疗（CIK）逐渐成为肿瘤治疗的新手段之一。探讨扶正培本方联合CIK治疗能否产生协同增效的作用。方法：纳入病人44例随机分为CIK组（对照组，n=22）和扶正培本方联合CIK组（治疗组，n=22），抽血观察患者外周血淋巴细胞亚群，NK细胞和T辅助细胞分型（Th1，Th2，Th17及Treg）的变化。结果：淋巴细胞亚群分析显示，对照组及治疗组中对淋巴细胞，NK细胞均无显著性差异，但中药联合CIK治疗后，患者CD4+CD25+Foxp3+Treg显著降低（P＜0.05）。结论：扶正培本方联合CIK可能有助于减轻免疫抑制，活化免疫反应。

CIK；扶正培本方；肿瘤；Treg

根据世界卫生组织发布的《世界肿瘤报告2014》，癌症已成为全球导致死亡的主要疾病之一，2012年约有1 400万人被诊断患有癌症和820万例癌症病人死亡［1］。其中22%的癌症新发病例及27%的癌症死亡病例均发生在中国，据统计，我国2011年全国恶性肿瘤发病率为250.28/ 10万（约300万人），死亡率为156.84/10万（约195万人），随着恶性肿瘤发病率和死亡率的逐步升高，癌症严重威胁着我国居民的生活质量及健康［2］。

《内经》有云“正气存内，邪不可干，邪之所凑，其气必虚”。中医学认为恶性肿瘤的发生、发展与“正气”的强弱关系密切，正气即抵御外邪之机体的免疫机能。现代医学针对恶性肿瘤的治疗手段发展迅速、种类繁多，已经由传统的手术、放疗、化疗治疗发展至靶向治疗、免疫治疗、疫苗等。手术及放化疗治疗副作用大，中晚期恶性肿瘤患者难以耐受，细胞免疫治疗（cytokine-induced killer cells，CIK）逐渐引起临床重视，并成为研究的热点［3-4］，研究发现其能够提高患者的免疫力，改善机体内环境，清除微小残留病灶，延长恶性肿瘤患者的生存时间，但也发现中晚期肿瘤患者的机体状态差，免疫低下，较难从CIK治疗中获益［3］。中医学认为“肾为先天之本，脾为后天之本”，脾、肾是人体一身正气之根本，扶正培本是我们对晚期肿瘤患者常用的治疗方法，培补脾肾有助于扶助正气，是提高患者免疫机能的重要方法，也是中医治疗肿瘤的主要原则之一。本研究旨在探索扶正培本方对CIK治疗是否有协同增效作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在深圳市中医院经知情同意后招募中晚期癌症患者44例，随机分为治疗组（扶正培本方加CIK组）22例，对照组（单纯CIK治疗组）22例。其中男26例（治疗组14例，对照组12例），女18例（治疗组8例，对照组10例），年龄在35岁～70岁之间，治疗组和对照组患者性别、年龄、病理分型及临床分期比较差异无统计学意义（P＞0.1），具有可比性。

1.2 纳入标准

经过细胞学或病理组织明确诊断，符合恶性肿瘤诊断的患者；放化疗结束1个月以上或未经放化疗治疗；KPS评分≥60分；年龄35～70岁；预计生存期超过3个月；血常规及肝、肾功能正常，心电图检查无明显异常；患者自愿并能够遵守所有治疗要求，通过本院伦理委员会批准，签署参加该项治疗的书面知情同意书。

1.3 CIK细胞培养方法

抽取中晚期恶性肿瘤患者的肝素抗凝外周血75 mL，分离单个核细胞，把这些细胞加入到含有IFN-γ，小鼠抗人CD3单抗的IL-2和IL-1α等培养因子进一步培养。培养14~18 d后，离心收集CIK细胞，对细胞进行无菌、细胞活力、肿瘤杀伤等检测合格后回输患者。给予患者细胞静脉输注，每次输注细胞数量约1×109个，总体200 mL，采用培养液回输，每次1袋（200 mL），连输2 d为1个疗程。

1.4 干 预

对照组：单纯CIK免疫治疗。治疗组：在对照组的基础上给予扶正培本方（组方：党参20 g，白术10 g，山萸肉10 g，菟丝子10 g等）口服，并于CIK免疫治疗前3 d开始服用。200 mL/次，2次/d，水煎服，真空包装，每日1剂，分袋，每袋200 mL，分早晚服用。

1.5 观察指标

检测淋巴细胞亚群（T淋巴细胞亚群、NK细胞），Th1、Th2、Th17、CD4+CD25+Foxp3+Treg。

1.6 统计学方法

统计学分析将利用SPSS16.0软件分析，治疗组、对照组两组比较采用Independent Sample T检验。数据均以均数±标准差（±s）表示。

2 结 果

本研究共纳入病人44例，完成治疗44例，未出现脱落例数。淋巴细胞亚群分析显示，对照组及治疗组中CD3+，CD3+CD8+，CD3+CD4+，CD4+/CD8+，CD3+CD4+CD8+，NK细胞和B细胞治疗前后组内及组间比较差异均无统计学意义（表1）。我们进一步研究T细胞亚群在两组之间的差异，结果显示中药联合CIK治疗后，CD4+CD25+Foxp3+Treg显著降低（见图1），显示免疫抑制减少，但数据显示两组对Th1，Th2及Th17影响差别无统计学意义（表2）。结果显示扶正培本方可能有助于减轻免疫抑制，活化免疫反应。

图1

3 讨 论

近年来，国内外现代医学对晚期恶性肿瘤的治疗展开日新月异的研究，而中医学认为健脾补肾，扶正益气，固本培元是晚期恶性肿瘤的治疗大法。本研究旨在观察应用扶正培本法中药能否对CIK免疫治疗起到协同增效，增强机体生物免疫调节的作用，从而提高肿瘤抑制疗效、提高生活质量及降低肿瘤转移率，这一问题值得我们进一步探索。

本次研究尝试运用随机对照的临床试验，运用随机对照临床观察客观评价扶正培本方联合CIK免疫治疗晚期肿瘤的疗效，并为中医药结合CIK免疫治疗恶性肿瘤提供经验。研究发现扶正培本方联合CIK能显著减少调节性T细胞（Treg）的数量，减轻免疫抑制。研究发现调节性T细胞增强而加重肿瘤患者免疫抑制，可能是导致免疫调节功能下降的重要因素，大部分肿瘤患者外周血存在Treg细胞升高的现象［4］。毛丽伟等［5］发现CIK可显著降低胃癌合并腹水患者外周血Treg细胞比例，下调Foxp3 mRNA基因表达，降低Treg细胞的免疫抑制效应，有利于诱导抗肿瘤免疫效应。本研究发现扶正培本方联合CIK治疗能降低Treg

表1 淋巴细胞亚群分析 （±s）

表1 淋巴细胞亚群分析 （±s）

组别 例数 CD3+CD3+CD8+CD3+CD4+CD4+/CD8+CD3+CD4+CD8+NK cell CD19+/CD45+对照组 22 72.55±1.99 27.14±1.27 41.05±2.00 1.59±0.11 0.45±0.14 10.82±1.35 11.41±1.32治疗组 22 72.09±2.02 26.73±1.33 40.18±2.02 1.58±0.11 0.32±0.12 10.27±1.74 11.59±1.25 P值 0.873 0.825 0.763 0.961 0.471 0.805 0.921

表2 辅助性T细胞 （±s）

表2 辅助性T细胞 （±s）

组别 例数 Th17 Th2 Th1 Th1/Th2 CD4+CD4+CD25+对照组 22 2.91±0.80 1.65±0.31 8.86±1.96 5.62±1.21 7.42±1.18 0.91±0.14治疗组 22 2.21±0.45 2.22±0.75 9.02±2.32 6.81±2.08 5.80±0.72 0.70±0.09 P值 0.454 0.484 0.957 0.623 0.252 0.207

细胞的表达，提高免疫力，减少肿瘤的免疫逃逸。扶正培本方由党参、白术、山萸肉、菟丝子、山药、当归等组成，研究发现其中不少中药能显著增加免疫机能，如党参能够明显阻断小鼠因环磷酰胺和钴放射引起的免疫抑制，调节机体的免疫状态［6-7］。研究发现党参、白术、当归、黄芪等组成的复方亦均有效改善免疫功能，降低免疫耐受［8-9］。课题组研究数据显示：扶正培本方对CIK治疗能够起到协同增效，提高免疫功能，降低免疫逃逸，可能抑制或延缓恶性肿瘤的进展。

本研究存在不足，首先由于样本量小，未能发现其他指标存在显著性差异。其次，长期随访疗效仍在收集观察中。这些不足尚待将来进一步探究。总之，扶正培本联合CIK治疗能下调CD4+CD25+Foxp3的表达，显著增强肿瘤患者的免疫力，进而杀伤肿瘤细胞，其确切疗效需要进一步的大型随机对照研究进行验证。

［1］International Agency for Research on Cancer.World cancer report 2014［M］.Geneva：WHO，2014.

［2］陈万青.中国2010年恶性肿瘤发病与死亡［J］.中国肿瘤，2014（1）：1-10.

［3］郑振东.自体CIK细胞治疗对不同阶段肿瘤患者免疫功能的影响［J］.临床肿瘤学杂志，2014，19（6）：498-502.

［4］Tosolini M.Clinical impact of different classes of infiltrating T cytotoxic and helper cells（Th1，Th2，Treg，Th17）in patients with colorectal cancer ［J］.Cancer Res，2011，71（4）：1 263-1 271.

［5］毛丽伟.DC-CIK对胃癌合并腹水患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞增殖及功能的影响［J］.现代肿瘤医学，2016，24（12）：33.

［6］秦韬.硒化党参多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响［C］.中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会，2015.

［7］张晓君.党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响［C］.中药新药与临床药理二十周年刊庆祝大会暨世中联中药药理专业委员会学术年会，2011.

［8］闫琳，梅景良，黄一帆.加味玉屏风散对实验性免疫抑制黄鳝非特异性免疫功能的影响［C］.中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集，2009.

［9］苗明三，方晓艳.当归补血汤粗多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响［J］.中药药理与临床，2003，19（6）：8-9.

（编辑：翟春涛）

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深圳市科技计划项目（JCYJ20150401163841057）85/2

欧阳郴生，主任医师，E-mail：ouyangchensheng@126.com