托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐的HPLC法测定研究

王益华，来丽丽

（浙江中医药大学，浙江杭州310053）

托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐的HPLC法测定研究

王益华，来丽丽

（浙江中医药大学，浙江杭州310053）

目的：建立托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐限度的测定方法，以有效控制药品的质量。方法：采用高效液相色谱法测定托吡酯原料中氨基磺酸盐和硫酸盐，Hamilton PRP-X100 Column色谱柱（250 mm×2.1 mm，5 μm），以4-羟基苯甲酸缓冲液-甲醇（80∶20）为流动相等度洗脱，流速0.2 mL/min。结果：氨基磺酸盐浓度在5.1～50.7 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，硫酸盐浓度在5.0～50.3 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，主药与氨基磺酸盐和硫酸盐能达到较好的基线分离。结论：本方法灵敏度高，专属性强，准确可靠，可用于药品质量控制。

高效液相色谱法；托吡酯；氨基磺酸盐；硫酸盐

托吡酯化学名为2，3：4，5-双-0-（1-甲基亚乙基）-β-D吡喃果糖氨基磺酸酯，分子式为C12H21NO8S，为广谱抗癫痫新药原料，对各类癫痫发作均有效。其中原发性利继发性全身强直-阵挛发作及单纯或复杂部分发作效果尤其明显，对肌阵挛、婴儿痉挛也有效。本文采用高效液相色谱法测定托吡酯原料中的氨基磺酸盐和硫酸盐，方法灵敏度高，专属性强，准确可靠，为质量控制提供了依据。

1 仪器与试剂

Waters2695-432高效液相色谱仪（电导检测器），托吡酯对照品（批号A64008003），氨基磺酸对照品（批号T20071019），硫酸盐对照品（批号20080103），托吡酯原料（批号20121106）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［1-2］

Hamilton PRP-X100 Column色谱柱（250 mm× 2.1 mm，5 μm），4-羟基苯甲酸缓冲液∶甲醇=80∶20为流动相等度洗脱，电导检测器温度40℃，流速0.2 mL/min，柱温40℃，进样量20 μL。

2.2 系统适用性

标准溶液（Std）：准确称取20.5 mg氨基磺酸和36.5 mg硫酸钾到200 mL容量瓶中，用流动相溶解和稀释到刻度，混匀，即得标准储备液。精密移取5.0 mL上述标准储备液至20 mL容量瓶中，用流动相溶解和稀释到刻度，混匀（氨基磺酸盐和硫酸盐浓度同为0.025 mg/mL）。样品溶液（Spl）：称量约200 mg托吡酯API至20 mL容量瓶中，精密称定，加入约15 mL流动相，超声溶解，用流动相稀释溶解至刻度，混匀。Spike溶液：精密移取标准储备液1.0 mL至10 mL容量瓶中，用样品溶液稀释定容至刻度，混匀。

按上述色谱条件进样20 μL测定，结果见图1、图2。标准溶液中，理论板数按氨基磺酸盐和硫酸盐峰计不低于1 000，拖尾因子（T）不大于2.0，符合要求。

图1 样品溶液HPLC图

图2 标准溶液HPLC图

2.3 线性关系考察［3］

线性储备溶液：称量20.5 mg氨基磺酸和36.5 mg硫酸钾到200 mL容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，混匀（氨基磺酸盐和硫酸盐浓度同为0.1 mg/mL）。

按照下表用流动相进一步稀释线性储备溶液，得到线性测试溶液，每份线性测试溶液各进样1次。结果见图3。

图3 线性溶液HPLC图

以峰面积（Y）对浓度（X）作线性回归。线性方程分别为：Y氨基磺酸=54 479X-76.513（r=0.999 8），Y硫酸盐=300 000X-91 659（r=1.0）。线性范围分别为氨基磺酸盐5.1～50.7 μg/mL，硫酸盐5.0～50.3 μg/mL。

2.4 定量限

取线性项下的最低浓度作为定量限，连续进样6针，记录峰面积，氨基磺酸盐、硫酸盐的RSD分别为7.3%、6.1%。

2.5 精密度试验［4］

称量约200 mg托吡酯原料药至20 mL容量瓶中，精密称定，加入线性储备液2.0 mL，加入约15 mL流动相，超声溶解，用流动相稀释溶解至刻度，混匀。用0.45 μm的滤膜过滤，弃去2 mL初滤液。将以上经过滤膜过滤的溶液作为供试品溶液，精密吸取以上同一份供试品溶液20 μL，平行进样6次，按“2.1”项下的色谱条件下测定峰面积，氨基磺酸盐峰面积的RSD为3.8%，硫酸盐峰面积的RSD为1.2%。以上表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

称量约200 mg托吡酯原料药至20 mL容量瓶中，精密称定，加入线性储备液2.0 mL，加入约15 mL流动相，超声溶解，用流动相稀释溶解至刻度，混匀。用0.45 μm的滤膜过滤，弃去2 mL初滤液。将以上经过滤膜过滤的溶液作为供试品溶液，精密吸取以上同一份供试品溶液20 μL，按“2.1”色谱条件分析，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h进样，测定氨基磺酸盐峰面积的RSD 为2.6%，硫酸盐峰面积的RSD为1.9%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批托吡酯原料（批号20121106）6份，按照“2.5”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件分析，测定，计算其含量。测定氨基磺酸盐峰面积的RSD为1.8%，硫酸盐峰面积的RSD为1.2%。

2.8 加样回收率试验

取同一批托吡酯原料（批号20121106）6份，按照“2.5”供试品溶液制备操作，精密加入已知浓度的托吡酯对照品溶液，按“2.1”色谱条件分析，计算回收率，结果氨基磺酸盐回收率为101.5%，氨基磺酸盐的RSD为1.7%，硫酸盐回收率为97.8%，硫酸盐的RSD为1.1%。

3 讨 论

经分析检测，氨基磺酸盐和硫酸盐主峰峰面积相对浓度的线性方程的决定系数R2均大于0.999，方法精密度及准确度项下氨基磺酸盐和硫酸盐的平均回收率均在90%~110%范围内，结果均达到预期要求。

本实验通过对原料进行系统适用性、线性、QL（定量限）、精密度、稳定性、重复性、加样回收率等项目的评估分析，结果都能达到预期要求，方法稳定可靠，可采用HPLC法测定托吡酯原料中的氨基磺酸盐和硫酸盐，并用于托吡酯原料质量控制。

但基于本方法所用电导检测器的仪器特性，在常规分析中，氨基磺酸盐主峰存在系统基线影响的风险，建议增加Spike溶液进样，对氨基磺酸盐主峰加以控制。

［1］张凤妹，王建.HPLC-电喷雾检测器测定硫酸阿米卡星中卡那霉素和硫酸盐的含量［J］.中国抗生素杂志，2015，40（5）：354-358.

［2］沈漪，潘颖，陈桂良.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定硫酸阿米卡星［J］.药物分析杂志，2004，24（6）：633.

［3］王珏，茅小招，莫卫民.高效液相色谱分析O-甲基异脲硫酸盐含量［J］.化工生产与技术，2011，18（3）：59-61.

［4］陈妙兰，蔡佳梓，李燕华.高效液相色谱法定量测定环己基氨基磺酸钠中氨基磺酸残留量的方法验证［J］.生命科学仪器，2013，11（3）：48-50.

（编辑：梁葆朱）

Determination of sulfamate and sulfate in topiramate by HPLC

Wang Yihua，Lai Lili
（Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310053）

Objective：To establish a method of testing limit of sulfamate and sulfate in topiramate raw material so as to control the quality of drugs.Method：Hamilton PRP-X100 column（250 mm×2.1 mm，5 μm）was taken and 4-hydroxybenzoic acid buffer solution-methanol（80∶20）as mobile phase.The flow rate was set at 0.2 mL/min.Resurt：The linear relationship between the concentration of sulfamate and the peak area was good in the range of 5.1～50.7 μg/mL.The linear relationship between the concentration of sulfate and the peak area was good in the range of 5.0～50.3 μg/mL.Conclusion：This method is high sensitivity，strong specificity，accurate and reliable，and can be used for quality control of drug.

HPLC；topiramate；sulfamate；sulfate

R284.2

A

1671-0258（2017）02-0028-03

王益华，研究生，E-mail：425407553@qq.com

来丽丽，硕士，助理研究员，E-mail：lailili85@163.com