细胞蜡块及免疫组化在肺腺癌癌性胸水诊断中的应用

廖志东，朱文标，郑少秋，谢寿城

(1.梅州市中医医院病理科，广东梅州514071；2.中山大学附属梅州市人民医院病理科，广东梅州514031)

细胞蜡块及免疫组化在肺腺癌癌性胸水诊断中的应用

廖志东1，朱文标2，郑少秋2，谢寿城2

(1.梅州市中医医院病理科，广东梅州514071；2.中山大学附属梅州市人民医院病理科，广东梅州514031)

目的研究胸水沉渣包埋制成细胞蜡块联合免疫组化检测对肺腺癌癌性胸水与非癌性胸水的诊断及鉴别诊断价值。方法选取梅州市人民医院2015年1～12月经组织病理确诊的肺原发腺癌伴有胸水的患者57例及炎症性胸水患者36例，采用胸水沉渣包埋制成细胞蜡块，并行甲状腺转录因子1(TTF1)、癌胚抗原(CEA)、天门冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、间皮细胞(MC)、钙结合蛋白(CR)、肾母细胞瘤1(WT1)等6种免疫标记的免疫组化检测。结果癌性胸水细胞蜡块中肿瘤细胞TTF1、CEA、NapsinA、MC、CR、WT1的阳性表达率依次为89.47%、78.94%、92.98%、17.54%、19.30%及7.54%；炎症性胸水细胞蜡块中间皮细胞TTF1、CEA、NapsinA、MC、CR、WT1的阳性表达率依次为8.33%、13.89%、22.22%、80.56%、97.22%及52.78%。癌性胸水中肿瘤细胞与炎症性胸水中的间皮细胞的免疫组化表达率比较差异均有显著统计学意义(P˂0.01)。结论胸水沉渣包埋制成细胞蜡块联合免疫组化检测对肺腺癌癌性胸水的肿瘤细胞与炎症性胸水中不典型间皮细胞的鉴别诊断有重要临床意义。

肺腺癌；胸水；细胞蜡块；免疫组化

胸腔积液是一种常见的多种临床疾病的肺部临床表征。胸腔积液良性与恶性的鉴别诊断是临床病理常见的难点之一[1]，不典型增生间皮细胞与对肺腺癌细胞形态上有时非常相似，细胞学涂片难以区别，主观性强，特别是低年资医师，容易误诊[1-2]。本文通过联合免疫组化染色方法及胸水沉渣包埋方法对两者进行鉴别诊断，提高对肺腺癌癌性胸水的诊断准确性，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 胸水标本收集梅州市人民医院2015年1～12月经临床综合检查已确诊病例肺原发腺癌患者伴胸水57例及肺炎患者伴胸水36例；57例肺原发腺癌患者胸水标本中男性34例，女性23例，年龄20～90岁，平均(63±19.53)岁；36例肺炎患者胸水标本中男性20例，女性16例，年龄18～88岁，平均(61±16.20)岁；两组患者的性别和年龄比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 方法采用细胞沉渣包埋联合免疫组化染色进行检测。

1.2.1 沉渣包埋取胸水50 mL放置于试管，2500 r/min，离心10 min，用吸管吸出上清液丢弃，取沉渣加4%中性福尔马林固定24 h，用滤纸将沉渣包好，常规脱水，石蜡包埋，常规切片，HE染色制片，观察细胞形态。

1.2.2 免疫组化采用SP法检测，检测试剂盒均购于福州迈新生物公司，步骤按试剂盒说明书进行，所选择CEA、TTF1、NapsinA、MC、CR、WT1鼠抗单克隆抗体及试剂盒均来自福州迈新生物公司。所有抗体均在同一张切片上设置了阳性对照及阴性对照。

1.3 结果判定CEA、NapsinA、CR阳性表达定位于细胞质，棕黄色，颗粒状；TTF1、WT1阳性表达定位于细胞核，棕黄色；MC阳性表达定位于细胞膜，棕黄色。

1.4 统计学方法应用SPSS13.0软件处理数据，计数资料行χ2检验，以P˂0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细胞形态学沉渣包埋与常规细胞学涂片相比较，沉渣包埋切片中细胞更加丰富，所有的细胞都在同一平面上，与组织学切片相似，结构清晰，堆聚成团状或环状，无常规涂片的细胞重叠性，结构清晰，无常规涂片细胞立体感，见图1。

2.2 免疫组化免疫组化显示肺腺癌胸水沉渣中癌细胞表达情况：CEA阳性率为89.47%、TTF1为78.94%、NapsinA为92.98%、MC为17.54%、CR为19.30%、WT1为7.54%；炎症性胸水沉渣增生间皮细胞表达情况：CEA阳性率为8.33%、TTF1为13.89%、NapsinA为22.22%、MC为80.56%、CR为97.22%、WT1为52.78%。癌性胸水中肿瘤细胞与炎症性胸水中的间皮细胞的免疫组化表达率比较差异均有显著统计学意义(P˂ 0.01)，见表1。肺原发腺癌胸水沉渣包埋免疫组化结果与肺腺癌组织学免疫组化表达结果相一致。不典型增生的间皮细胞胸水沉渣包埋免疫组化结果与胸膜活检间皮细胞免疫组化表达结果相一致，见图2。

图1 胸水细胞蜡块切片HE染色(×200)

图2 胸水细胞蜡块免疫组化表达(×200)注：A：TTF1；B：CEA；C：NapsinA；D：MC；E：CR；F：WT1；红色箭头示癌细胞，黑色箭头示间皮细胞。

表1 肺腺癌性胸水与炎症伴间皮细胞不典型增生性胸水免疫组化结果

3 讨论

在胸腔积液中，肿瘤细胞学检查肺腺癌与反应性不典型增生胸膜间皮细胞在细胞形态上非常相似[3]，需要有较特异性的指标来协助诊断，减少诊断医师的主观意识。常规细胞学涂片检查具有方便简洁的特点，但是，由于涂片技术及人为因素，造成细胞涂片厚薄不一，细胞重叠，结构欠清晰，细胞变性及血性背景遮掩肿瘤细胞等特点，给诊断医师带来干扰和困惑[4]。我们采用胸水沉渣包埋方法，可以排除上述各种原因带来的不便，同时还可以联合免疫组化应用得到客观的特异性强的明确的诊断依据而减少了人为主观因素。

肺腺癌细胞与反应性不典型增生胸膜间皮细胞的诊断不仅仅是依据细胞学形态，还需要结合应用免疫组化检查才能更好地做出正确的诊断[5-7]。肺腺癌与反应性不典型增生胸膜间皮细胞，细胞学形态相近，均可以排列形成管状、片状、团块状、腺腔样，细胞核大，可有异型性，胞浆丰富，染色质深染等，光镜下很难鉴别。细胞沉渣包埋石蜡切片能够较好地区别两者，联合免疫组化一般可以明确诊断及判断来源。同时，与涂片相比较，沉渣包埋石蜡块可长期保存，可行免疫组化、特殊染色及基因分析，对于晚期肺癌患者，可以代替组织学标本，临床应该广泛[5-8]。

免疫组化肺腺癌组选用TTF-1、NapsinA和CEA单克隆抗体，TTF-1是分子量为38～40 kDa的核蛋白，在成人组织中主要分布在内胚层分化的甲状腺滤泡细胞，间脑局部和呼吸道上皮中，在肺小细胞癌及肺原发型腺癌中高表达。结果显示：本组TTF-1在肺腺癌中阳性率为89.47%，不典型增生间皮细胞中阳性率为8.33%，表明TTF-1可作为诊断肺腺癌与不典型增生间皮细胞相鉴别的特异性指标。NapsinA是一种胃酶样天冬氨酸蛋白酶，分子量接近38 kDa的单链蛋白，该蛋白在人类肺和肾组织中高表达，在部分TTF-1阴性的低分化肺腺癌中亦有表达。本组57例肺腺癌阳性率为92.98%，不典型增生间皮细胞中阳性率为22.22%。CEA是一种在胎儿肠道产生的癌胚抗原，在成人结肠正常黏膜上皮及其他组织中表达率极低，在胃肠道腺癌和肺腺癌中有较高表达，本组例肺腺癌阳性率为78.94%，不典型增生间皮细胞中阳性率为13.89%。不典型增生胸膜间皮细胞组选用了间皮细胞相对特异的抗体MC、CR和WT1，MC主要表达于间皮细胞，腺上皮一般不表达，而且腺上皮若表达侧在胞浆上，不是间皮细胞的细胞膜位置。在本组中不典型增生的间皮细胞阳性率为80.56%，腺癌中阳性率为17.54%。Wieczorek等[9]研究显示，MC在反应性间皮细胞中具有较高的敏感性和特异性，是间皮细胞较好的一个指标，是鉴别腺癌细胞及间皮细胞的较好标记物。CR是一种细胞内结合蛋白，属于激动蛋白C超家族，表达于正常和肿瘤性间皮细胞中，在本组中间皮细胞的阳性率为97.22%，腺癌中阳性率为19.30%。因此，MC和CR结合使用能较好的鉴别胸水中的不典型增生间皮细胞与腺癌细胞。WT1是一种抑癌基因，和肾母细胞瘤等肿瘤的发生有关，在间皮细胞、卵巢浆液性肿瘤中表达。在本组不典型增生间皮细胞中的阳性率为52.78%，在腺癌中的阳性率为7.54%，因此，它在间皮细胞增生与肺腺癌的鉴别诊断中具有一定意义。总之，CEA、TTF1、NapsinA、MC、CR、WT1等一组免疫组化抗体，对反应性不典型增生胸膜间皮细胞与肺腺癌的诊断与鉴别诊断有重要意义。

综上所述，常规涂片中未能明确诊断的胸水，沉渣包埋切片联合免疫组化检查能够提供良好的形态学诊断及特异性标记物，对反应性不典型增生胸膜间皮细胞与肺腺癌的诊断与鉴别诊断具有重大意义。胸水沉渣包埋制成细胞蜡块技术明显提高了恶性胸腔积液的诊断率，这是一个简单实用的技术，实用性强，基层医院都可以开展，值得推广。

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Application of paraffin imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry for in the diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion.

LIAO Zhi-dong1,ZHU Wen-biao2,ZHENG Shao-qiu2,XIE Shou-cheng2.
1.Department of Pathology,Meizhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Meizhou 514071, Guangdong,CHINA;2.Department of Pathology,Meizhou People's Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University,Meizhou 514031,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the value of paraffin imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry for diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion.MethodsFrom Jan.2015 to Dec.2015,57 patients clinically confirmed as lung adenocarcinoma with pleural effusion and 36 patients of pneumonia with pleural effusion were selected from Meizhou People’s Hospital.The paraffin imbedded cell blocks technology was applied,and immunohistochemistry was used to detect thyroid transcription factor 1(TTF1),carcino-embryonic antigen(CEA),aspartie proteinase A(NapsinA),mesothelial cells(MC),calretinin(CR),and Wilms Tumor Protein(WT1).ResultsThe positive rates were 89.47%for TTF1,78.94%for CEA,92.98%for NapsinA,17.54%for MC,19.30%for CR,and 7.54%for WT1 in lung adenocarcinoma with pleural effusion,as compared with 8.33%for TTF1,13.89%for CEA, 22.22%for NapsinA,80.56%for MC,97.22%for CR,and 52.78%for WT1 in pneumonia with pleural effusion(all P˂ 0.01).ConclusionParaflln imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry has significant value in the differential diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion and pneumonia with pleural effusion．

Lung adenocarcinoma;Pleural effusion;Paraffin imbedded cell blocks;Immunohistochemistry

R734.2

A

1003—6350（2017）11—1773—03

2016-12-21)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.11.018

廖志东。E-mail：hony96@163.com