薄层色谱扫描和气相色谱-质谱法快速检测血中2,4-滴丁酯

汪霞 辽阳疾病预防控制中心 （辽宁 辽阳 111000）

薄层色谱扫描和气相色谱-质谱法快速检测血中2,4-滴丁酯

汪霞 辽阳疾病预防控制中心 （辽宁 辽阳 111000）

目的：探讨应用薄层色谱扫描（TLCS）和气相色谱-质谱（GC-MS）定性定量快速检测血中2,4-滴丁酯的实验应用。方法：提取准备好的样品，分别点于CF254板上，展开、扫描，根据光谱图计算比移值；在样品中加入邻苯二甲酸二异丁酯后进行提取，应用GC-MS分析定性，在离子模式下进行定量检测。结果：TLCS分析，血中2,4-滴丁酯不同展开剂的比移值（Rf）分别为0.76和0.28薄层扫描最大的吸收波长分别为226nm和278nm。经过GC-MS的定性分析，血中的2,4-滴丁酯56，177和269分别为特征性片段，离子模式下的定量检测线性范围结果为0.20～100.0 μg/ml最低检出限为0.1μg/ml（S/N=3）。结论：应用薄层色谱扫描（TLCS）和气相色谱-质谱（GC-MS）定性定量快速检测血中2,4-滴丁酯效果较好，可以满足临床的的快速检验诊断需求。

2,4-滴丁酯 薄层色谱 气相色谱-质谱 快速检测

2,4-滴丁酯是一种苯氧羧酸除草剂，如误服会导致消化系统、神经系统等一系列中毒的症状，常见中毒临床表现有嗜睡、肌无力、纤维颤动等，较严重的会出现昏迷、抽搐以及大小便失禁、呼吸衰竭等状况[1]。近些年关于该检测研究应用蔬菜水果的农药残留很多[2]，一般应用气相色谱法、气相色谱-质谱法以及高效液相色谱法，本文初次应用2,4-滴丁酯薄层色谱扫描定性定量检测，现报告如下。

1.实验仪器与方法

1.1 仪器和试剂

美国Finnigan公司生产的GC-MS分析仪，扫描仪选择的是日本岛津的波长为CS-930的扫描仪，CF254硅胶薄板是由青岛海洋化工厂生产，生产批号为8352001，2,4-滴丁酯检测使用配比标准溶液为配套的国家统一指标公司生产，分析纯分别为邻苯二甲酸二异丁酯内标和正己烷。

1.2 仪器的条件

1.2.1 气相色谱条件

色谱柱是DB-5MS（30 m×0.25×0.25 mm×0.25 μm）毛细管柱；载气为高纯氦气，流速1.0 Fμg/m；l柱温：起始温度100˚C（1 min30˚C/min200˚C（1 min）-10˚C/min-280˚C（3 min）；进样口温度250˚C；传输线温度250˚C。

1.2.2 质谱条件

EI电离源，电子能量70 eV，离子源温度250˚C。扫描起始时间4 min扫描范围50～650 amu。调谐方式为自动调谐，倍增电压1073 V，发射电流100μA。

1.2.3 薄层色谱条件

光密度扫描范围：200～370mm，扫描方式：nomal扫描结合difference扫描，反射广谱方式，SX=3。

1.3 血样的分析与处理

1.3.1 血液处理

取全血1ml加内标邻苯二甲酸二异丁酯100μL，PH=6的缓冲液准备1ml，三氯甲烷5ml，充分摇匀震荡，将混匀液体置入转速为3000的离心机内离心5min，弃去上清液，对血液分别提取两次，同时将有机相合并，于70˚C的水浴氮经气流吹干，剩余的血液残渣加入100μl正己烷定容，充分混匀备检。

1.3.2 薄层色谱分析

表1. 不同的萃取溶剂对2,4-滴丁酯的提取率分析

硅胶薄板选择GF254，标准液为2,4-滴丁酯，剂量为1μl，然后用试管从定容液中提取15μl备用，上行展开应用环己烷-丙酮（4:1）和环己烷-氯仿（5:1），样品在紫外灯下通过荧光显色行斑点定位，将检测的色谱条件设定稳定后，开始扫描，标准液作为扫描的参考，与结果比照。

1.3.3 气相色谱-质谱分析

提取定容好的待检测液1μl，进样待检测，将离子色谱条件设定好，标准液作为参考对照，进样扫描，将扫描得出的结果同样品的提取特征结合，行离子检测，最后定性结果观察指标为总离子流和各个组别的保留时间。

2.结果

2.1 比移值

本次实验的展开剂为环己烷-丙酮和环己烷-氯仿，此时实验板的2,4-滴丁酯的薄层分析比移值（Rf）为0.76和0.28。使用邻苯二甲酸二异丁酯为内标物在2,4-滴丁酯的薄层分析得出的离子特征片段为56、177、269，分离的效果很好。根据配好的2,4-滴丁酯标准液算出，其浓度在0.20～100.0 μg/ml范围内时，检测效率最高，结果最准确，其线性关系最为良好。

2.2 提取溶剂和PH之间的关系

不同的缓冲溶液调整不同的PH值，溶剂萃取选择乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷，每种重复3次萃取，记录选择的溶剂跟PH值。根据实验的结果得出，当三氯甲烷萃取时，PH值为6的萃取效果是最好的。不同溶剂的萃取结果见表1。

3.讨论

本次实验应用的三种萃取剂使得2,4-滴丁酯提取率可以达到较高的程度[3]，当使用三氯甲烷提取时，PH为6的时候效果最好，可以达到最大的吸收率，乙醚萃取效果次之，因为杂志分离效果不如三氯甲烷，乙酸乙酯回收率最低[4]。从本次实验可以得出三氯甲烷是很好的提取溶剂。本文使用的提取方法所得到的结果已经满足了生物检测中心中关于中药毒物的检测要求，需要注意的是三氯甲烷的伤害性较大，需要注意室内通风和自我防护[5]。

实验中应用的环己烷-丙酮和环己烷-氯仿展开剂可以很好的分离2,4-滴丁酯，计算得出的比移值可以得出定性结果，但薄层色谱的分析灵敏度不高，对体外检测尚可适用，而体内检测常应用气相色谱-质谱联用法[6]。这里关于2,4-滴丁酯检测的应用在以往的文献中未见[7]，本实验依据萃取剂的属性和相溶原理设计的实验方案为首次实践，从结果来看，取得了较好的分离定性、定量检测结果，和预期相比有较好的效果。该种方法和传统的气质联法相比灵敏度更高一些，且受杂质的干扰程度较小，而且保留的时间能够结合特征性离子丰度来准确的定性和定量，提高检测效率和精准度。

[1] 李鹏, 贾雪峰, 韩胜, 等. 薄层色谱扫描和气相色谱-质谱法快速检测血中2,4-滴丁酯[J]. 中国卫生检验杂志, 2008,18(2):204-207.

[2] 罗敏, 霍永昌, 魏献春, 等. 五种蛇胆的薄层色谱扫描指纹图谱研究[J]. 中药材, 2002,25(1):16-18.

[3] 黄修柱, 季颖. 2,4-滴丁酯原药及其杂质GC-MS分析研究[J]. 农药科学与管理, 2005,26(8):3-7.

[4] 赵琳, 张晓波, 任红波, 等. 在线GPC-气相色谱-质谱联用测定玉米中莠去津、乙草胺和2,4-滴丁酯残留[J]. 农药科学与管理, 2013, 34(5):35-39.

[5] 吴亚静. 一起涉嫌2,4-滴丁酯投毒案件的GC/MS分析[J]. 河北公安警察职业学院学报, 2015,15(4):35-36.

[6] 李元星. 色谱-离子阱质谱联用分析食品及化妆品中的酞酸酯和防腐剂[D]. 湖南师范大学, 2006.

[7] Zou P, Wang L, Yang Z G, et al. Rapid and simultaneous determination of ten off-favor compounds in water by headspace solid phase microextraction and gas chromatography-mass spectrometry[J]. Journal of Central South University, 2016,23(1):59-67.

1006-6586(2017)06-0025-02

D919.2

A