荷斯坦青年牛黄体直径对移植受胎率的影响
2017-05-24薛森武刘贤侠王建梅李学新杨永军江发云
薛森武,刘贤侠，王 忠，王建梅，李学新，杨永军，江发云
(1.石河子大学动物科技学院，石河子 832003；2.新疆第八师142团双锵牧业有限责任公司，石河子 832029；3.新疆第八师142团畜牧中心，石河子 832029)
荷斯坦青年牛黄体直径对移植受胎率的影响
薛森武1,刘贤侠1，王 忠2，王建梅1，李学新2，杨永军3，江发云2
(1.石河子大学动物科技学院，石河子 832003；2.新疆第八师142团双锵牧业有限责任公司，石河子 832029；3.新疆第八师142团畜牧中心，石河子 832029)
【目的】为了获得更多的纯种和牛，【方法】采用临床观察、直肠检查和B超检查筛选出114头荷斯坦牛作为受体牛，采用CIDR埋栓做同期发情，在发情后第7天用B型超声仪对受体牛黄体直径进行测量，对符合条件的受体牛进行胚胎移植，将不同黄体直径(corpus lutum diameter,CLD)分为3个组，分别为1≤CLD≤1.5、1.5
荷斯坦青年牛；黄体直径；移植受胎率
孕酮是维持妊娠所必须的激素[1]，黄体分泌的孕酮是母体建立和维持妊娠所必需的物质，是决定子宫生理状态的主要甾类激素之一[2]。受体牛卵巢上黄体质量的判定是提高受胎率的重要因素之一[3]。蔡周山等[3]用直肠检查法对卵巢上黄体进行检查并划分等级，结果显示，A级黄体与B级黄体的受胎率差异不显著。吴眩等[4]用直肠检查法对受体牛进行检查，结果表明，不同黄体位置对受胎率影响差异不显著。李庭芳[5]对塔城市奶牛胚胎移植时，用直肠检查法对受体牛的黄体进行检查，黄体发育达到移植要求(1cm以上)进行移植。毕江华 等[6]用直肠检查法，选择黄体发育良好的受体牛进行胚胎移植。王建军等[7]在对安格斯牛胚胎移植时用直肠检查卵巢的发育情况及卵巢上黄体大小，判定黄体的位置并进行分级，将质量好的胚胎移植给黄体质量好的牛[8]。韩志强等[9]于2012年用便携式兽用线阵探头超声仪与直肠检查受体牛发情后第7d黄体结果对比,结果表明：应用B超检测合格黄体，胚胎移植受胎率是92.3%，直肠检查组是57.3%。差异显著。黄体质量的好坏直接关系到受体牛移植受胎率的高低,许多研究结果证明质量好的黄体对受体牛的移植受胎率有影响，但是大都通过直肠检查法对受体牛卵巢上的黄体进行检查，国内通过B超对受体牛卵巢上的黄体进行检查研究胚胎移植受胎率的报道较少，而不同大小黄体直径再分组研究对移植受胎率的影响未见报道。本研究的目的是通过B型超声仪对受体牛黄体直径进行测量，并分组统计分析不同大小黄体直径对移植受胎率的影响。
1 材料方法
1.1 供试奶牛
在新疆第八师142团双锵牧业有限责任公司奶牛场，该场无结核病和布病。选择供移植的受体牛全部为荷斯坦青年牛，体高128 cm以上，体重350 kg以上，经直肠检查和B超检查选取性周期正常、无生殖器官疾病，年龄14～16月龄。移植胚胎是引进的日本黑和牛A级65枚胚胎。
1.2 仪器和药品
仪器：HS-101V型便携式兽用线阵B超仪，配备3.5/5.0MHz线阵探头，日本HONDA电子有限公司生产(HONDA ELECTRONICS CO.,LTD)。通过USB借口用U盘转存图像于电脑。
器械：胚胎移植枪、细管剪、塑料外套，均由日本FHK公司生产。解冻杯由艾格威公司生产。
药品：CIDR(CUE-MATE)，新西兰生产；维生素ADE注射液，苏州市苏牧动物药业有限公司生产，批号：20151012；氯前列醇钠注射液，苏州市苏牧动物药业有限公司生产，批号：20151105。
1.3 方法
1.3.1 受体牛选择 根据新疆维吾尔自治区地方标准牛胚胎移植技术操作规程[10]和家畜胚胎移植技术培训讲义[11]的标准选取受体牛，受体牛全部舍饲。主要饲喂苜蓿干草、玉米青贮和精料补充料。
1.3.2 同期发情 维生素ADE注射液每头牛肌肉注射10 mL，阴道清洗消毒后放置栓CIDR，第一次处理当天记为0 d，在埋栓第9 d撤栓同时受体牛注射氯前列醇钠注射液4 mL(0.4 mg)/头，观察爬跨结合涂蜡笔判断是否发情。
1.3.3 黄体直径的检查 ①准确记录发情时间，具体到当天的小时分钟，发情当天记为0 d，在发情后第7 d，准确到小时分钟。②临床应用B超检查黄体直径大小，具体方法如下：
将奶牛驱赶至保定通道里。将B超探头置于装有医用超声耦合剂的避孕套内。戴上长臂手套抹石蜡油于长臂手套的手指前端，将直肠内的粪便掏干净，找到两侧卵巢并判断黄体的位置。将超声探头送入直肠，用拇指、食指和中指触摸到卵巢，将卵巢进行固定，然后协调配合用手把卵巢固定探头之下，缓缓的移动探头或转动卵巢，对卵巢进行不同切面扫查。当显示出黄体的最大直径切面图像后，按下冻结键。用B超仪内置电子标尺对黄体的直径测量，并保存典型图像，备用[12]。
1.3.4 移植 对黄体直径≥1 cm以上的青年牛进行有黄体侧子宫角胚胎移植，用解冻杯35℃、15 s解冻胚胎，所有移植过程均为一人操作。
1.3.5 移植牛受胎判定标准 移植当天记为0 d，移植后24 d(相当于牛发情配种后第30 d)用便携式B超进行子宫探查，观察到子宫扩张，有胎水和胎儿的断面图像，则判断为怀孕受胎。子宫不扩张，没有怀孕的图像特征，则为不受胎。
1.4 统计分析
用Excel进行数据整理，用SPSS13.0软件进行单因素方差分析。P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著。
2 结果与分析
2.1 黄体直径对受胎率的影响
产科学教材[1]中提到牛的黄体形状大致呈圆形，有一部分突出于卵巢表面，与卵巢本身有明显的界限。排卵后3～5 d其直径1 cm,质地柔软，10 d发育至最大，可达2～2.5.。本研究借鉴前人研究进行分组[7,12]，黄体直径分为三个组，分别为1≤CLD≤1.5、1.5
表1 黄体大小与移植受胎率的关系
注：CLD为黄体直径。
图1 有腔黄体，A-D的CLD分别是 35 mm、31 mm 、22 mm、20 mm
2.2 受体牛发情后第7天的黄体声像图
荷斯坦青年牛在发情后第7天黄体声像图：有腔黄体声图像特征是黄体组织回声均匀呈现中等强度的回声，与卵巢基质界限明显，轮廓清晰。黄体直径不同，部分牛黄体有腔并且类似轮胎状态或椭圆形(图1)，部分牛黄体的腔很小或接近无。无腔黄体为实质性黄体声图像特征是较均匀较强回声，与卵巢基质界限明显，为椭圆形或近似圆形(图2)，轮廓清晰。
2.3 受体牛怀孕30 d的声像图
移植后23 d(怀孕30 d)受体牛的子宫扩张，似圆筒状，有液性暗区，回声均匀，由于扫查方向不同，胎儿切面图像不同，胎儿在子宫内出现回声增强的光团、斑块，成团状结构(图3-A)，有时可扫查到胎膜，呈现环状线，内部为羊水的暗区和胎儿的不同切面的回声图像(图3-B)，这些可明显与子宫壁区分。未孕牛探查纵切面弯曲类似羊角状(图3-C)，子宫横切面类似两个不同的不规则圆饼状(图3-D)，回声都不均匀，大体轮廓清晰，两者都不出现子宫不扩张，液体暗区、胎儿的断面、子叶等怀孕图像。
2.4 部分已产和牛图片
图2 实质性黄体，A-D的CLD分别是30 mm、30 mm、25 mm、20 mm
图3 A-B是移植后23天的妊娠声像图，C-D是未孕子宫声像图
图4 和牛犊牛(深棕色) 图5 和牛犊牛(黑色)
3 讨论
3.1 蔡周山[3]、王建军[7]等报道，根据直肠检查鉴别西杂母牛做受体黄体直径A级是1.5 cm以上，B级是1～1.5 cm，A级和B级移植高产奶牛和安格斯牛胚胎。李庭芳[5]报道，黄牛、西杂母牛做受体黄体发育1 cm以上进行移植奶牛胚胎。以上研究都是以直肠检查方法来确定黄体直径大小。而本研究是应用B超测量，因直肠检查主要是触摸卵巢表面突出黄体部分，由于有些黄体突出卵巢表面不明显，埋在卵巢中的黄体部分感觉不到，而B超是切面图像，可以扫查到表面和内部的断面图像，并且仪器上有电子尺可测量，因此黄体直径的测量更加准确。韩志强等[9]报道，根据直肠检查鉴别育成奶牛做受体，黄体直径A级是2～3 cm,B级是1～2 cm，应用B 超检测合格黄体，胚胎移植受胎率92.3%，显著高于直肠检测组57.3%，但是在用B超鉴定黄体时，未对黄体直径分组进行研究，本研究当中不同黄体直径对受胎率的影响各组之间差异不显著。孕酮是维持奶牛妊娠的必要条件，奶牛怀孕期间黄体分泌孕酮，孕酮浓度与黄体发育密切相关。Kastelic等[13]报道，在牛的发情周期中血浆孕酮含量的变化与超声法检测黄体体积和直径呈正相关，从而预示黄体的超声检查可作为分析血浆孕酮含量的辅助方法。因此胚胎移植时受体牛第7天黄体的发育状态与移植受胎率密切相关。
3.2 孙树春等[14]认为黄体面积与受胎率差异显著，妊娠牛与未妊娠牛黄体面积分别是2.46±0.55 cm2、1.74±0.10 cm2。刘贤侠等[15]对排卵延迟后黄体指标进行研究，主要测量了黄体直径、黄体面积、黄体体积，因此今后在胚胎移植时需要检测受体牛黄体的这些指标研究对移植受胎率的影响，另外，因为在临床实践中发现部分牛发情后第7天黄体有腔，黄体面积计算时需要把内腔的面积减去，这样才更加准确，这些今后需要进一步深入研究。
(本研究感谢李海军、阿卜杜克依木·艾力木、苏拉依曼·肉孜、王海滨、时利军、时利群的大力支持)。
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The Effect of Corpus Luteum Diameter on Conception Rate of Transplantation in Adult Heifer
XUE Sen-wu1, LIU Xian-xia1, WANG Zhong2, WANG Jian-mei1, LI Xue-xin2, YANG Yong-jun3, JIANG Fa-yun2
(1.Collegeofanimalscienceandtechnology,ShiheziUniversity,Shihezi832003;TheXinjiangProductionandConstructionCorpos，theeighthdivision142regimentshuangqianghusbandryLimitedLtd,Shihezi832029;TheXinjiangProductionandConstructionCorpos，theeighthdivision142regimentAnimalhusbandrycenter,Shihezi832029)
In order to obtain more pure Japanese black cattle, 114 heifer as receptors were examined by clinical observation, rectal examination, and B-mode sonography then were placed CIDR (the vaginal suppository) to cause synchronous estrus on receptors. Receptor cow corpus luteum diameter were determined by B-mode ultrasonic apparatus in the seventh day after heat. Eligible receptors were transferred embryos of Japanese black cattle. Corpus lutum diameter (CLD) were divided into 3 groups, 1≤CLD≤1.5, 1.5
adult Heifer; Corpus luteum diameter; conception rate of transplantation
2016-11-30 接收日期:2016-12-10
薛森武(1990-)，男，硕士生，研究方向：兽医技术服务；E-mail：1252604711@qq.com。
作者简介：刘贤侠(1970-)，男，副教授，博士，硕士生导师，主要从事兽医外产科学的教学和科研工作。
S823.2
A
1001-9111(2017)01-0018-05
