HPV在鼻息肉的表达水平及其临床意义

廖桂周

（广东省汕头市潮阳区大峰医院 检验科，广东 汕头515154）

HPV在鼻息肉的表达水平及其临床意义

廖桂周

（广东省汕头市潮阳区大峰医院 检验科，广东 汕头515154）

目的 探讨HPV在鼻息肉的表达水平及其临床意义。方法 选取210例鼻息肉石蜡包埋组织标本作为鼻息肉组，并采用GP5＋／6＋PCR通用引物进行HPV分型，另选20例正常鼻腔黏膜组织作为对照组。结果 鼻息肉组的HPV总阳性率为40.95% （86／210），显著高于对照组的0.00% （0／20），差异有统计学意义 （P＜0.05）。HPV病毒分型以HPV11亚型为主。鼻息肉患者中，不同性别、年龄及其高、低危亚型分布的感染率比较差异均无统计学意义 （P＞0.05）。结论 鼻息肉的发病与HPV感染密切相关。HPV高、低危亚型均可感染致病，但以低危亚型 （HPV11亚型）为主，这对临床治疗鼻息肉及相关疫苗的研制开发有一定意义。

鼻息肉；HPV感染；临床意义

鼻息肉是常见的鼻部疾病，临床特征是以高度水肿的鼻黏膜在鼻道形成的单发或多发的息肉的常见疾病群，在普通人群中约有1%～4%的人患有鼻息肉，其具有较高的发病率和复发率，但对其发病和复发的确切原因存在争议，目前，感染和过敏因素是较为认可的病因［1］， 而主要因素则是感染［2］。 但过去的多数报道主要集中在细菌性感染，而对病毒性感染鲜有报道。临床上有部分鼻息肉患者经长期抗生素、鼻喷激素及多次手术治疗仍无法治愈，易反复，其发病原因尚不明确。本研究采用GP5＋／6＋PCR法对210例鼻息肉石蜡包埋标本组织进行HPV检测及分型，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料本研究中210例鼻息肉石蜡包埋组织标本来自我院2014年5月至2016年2月经病理确诊且临床资料完整的鼻息肉患者，作为鼻息肉组。其中男139例，女 71例；平均年龄36.51岁；平均病程8.13年；1次性手术36例，≥2次手术10例。另选取20例健康志愿者的鼻腔黏膜组织作为对照组，其中男13例，女7例；平均年龄44.62岁。所有对象均对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要仪器与试剂 PCR扩增仪，PCR试剂盒，DNA提取试剂盒，HPV核酸扩增分型检测试剂。

1.2.2 检测方法 ①石蜡样本DNA提取：将石蜡样本于液氮中研磨后，采用QIAGEN BLOOD KIT试剂盒，按照试剂盒说明书相应的步骤来提取石蜡包埋组织中的DNA。②新鲜冷冻组织样本DNA提取：室温下取0.1 g的冷冻组织于1.5 mL EP管中解冻，然后用独立剪刀将组织剪碎，避免样品间的交叉污染，将0.5 mL磷酸盐缓冲液加入EP管中，经振荡、离心对细胞进行沉淀。然后按照DNA试剂盒说明书的相应步骤提取DNA。③GP5＋／6+PCR扩增：按照样本数量，分别取PCR premix、Taq酶23.25 μL、0.75 μL混匀，按编号分别取1 μL提取DNA加入PCR混合液中，总反应液体积25 μL。将反应液置于预先设定好PCR反应程序的PCR扩增仪中进行扩增，同时将蒸馏水作为阴性对照，进行40个循环。

1.3 HPV分型检测采用一对通用引物 GP5＋／6＋PCR实验以确认HPV-DNA全长是否存在，HPV阳性结果者的具体型别将用2个混合HPV寡聚探针做酶联免疫实验来确定，本研究检测HPV37亚型分别为 HPV6、11、16、18、26、31、33、34、35、 39、 40、 42、 43、 44、 45、 51、 52、 53、 54、 55、 56、57、 58、 59、 61、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 82、83、84、cp8304。

1.4 统计学处理采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组HPV阳性表达情况比较鼻息肉组210例鼻息肉石蜡包埋组织标本中有86例感染HPV，阳性率为40.95%；对照组20例标本的检测结果均为阴性；两组的阳性率差异具有统计学意义（χ2=13.08，P＜0.05）。

2.2 鼻息肉中HPV亚型分布情况本研究检测HPV37亚型，其中 HPV16、18、 31、33、35、 39、45、51、52、53、56、58、59、66、68亚型为HPV高危型，其他亚型为低危型。鼻息肉组感染HPV的86例标本中检出HPV病毒113株，有10个HPV亚型分布，其中 4个低危亚型检出 HPV病毒 60株（53.10%），主要以HPV11亚型为主，占42.48%；6个高危型检出53株 （46.90%），主要以HPV52和HPV58亚型为主，分别占11.50%和15.04%。

2.3 鼻息肉组性别与HPV感染及其高、低危亚型的关系鼻息肉组210例患者中，男139例，阳性率为37.41% （52／139）；女71例，阳性率为47.89% （34／71）。52例男性HPV阳性患者中，高危亚型24例，低危亚型28例；34例女性HPV阳性患者中，高危亚型20例，低危亚型例14例；差异无统计学意义（χ2=1.32，P＞0.05）。

2.4 鼻息肉组年龄与HPV感染的关系本研究按患者年龄间隔10年为一组，分成5组：20～29岁，30～39岁，40～49岁，50～59岁，60～69岁。HPV阳性率分别为42.42% （14／33）、40.00% （10／25）、48.72% （19／39）、39.34% （24／61），36.54%（19／52），年龄与HPV感染无显著性关系。见图1。

图1 年龄与HPV阳性率的关系

3 讨论

鼻息肉与HPV关系的研究在国内外鲜有报道，但在现有的报道［3-4］中，因其标本病例数相对较少且检测方法不同，故检出率为0.0%～92.3%。目前，鼻息肉的发病与HPV感染是否有关系尚无定论。周玉英等［3］应用PCR技术检测13例复发鼻息肉患者标本，其HPV阳性率为 92.3%；Ioannidis等［4］在鼻息肉病疱疹病毒和人类乳头状瘤病毒的研究中对91例标本进行检测，HPV阳性率为14.29%。本研究对鼻息肉组210例组织标本进行HPV检测，阳性率为40.95% （86／210），对照组的组织标本均为阴性，可认为鼻息肉与HPV感染密切相关。且本研究采用GP5＋／6＋PCR法扩增DNA产物构建的金磁微粒层析装置进行检测，以目视化方式读取结果，检测结果更清晰。

目前，已发现的HPV亚型有120余种，而国内有关鼻息肉中HPV亚型的相关报道［3］以低危亚型HPV5、HPV6为主。本研究鼻息肉感染以低危亚型HPV11为主，检出48株，占总检出株数的42.48%；而高危亚型HPV52、HPV58次之，分别检出13、17株，分别占总检出株数的11.50%、15.04%，该结果符合鼻息肉为黏膜水肿性良性病变，但与以往研究结果存在差异，这可能与HPV感染存在地域性差异有关。相关报道［5］称女性HPV感染随年龄的增长呈 “U”型分布或具有降低的趋势；也有研究［6］表明未发现女性HPV感染与年龄存在相关性。本研究结果显示，年龄与HPV感染未见显著相关性。有研究［7-9］表明，鼻内翻性乳头瘤向不典型增生进一步发展与HPV高危亚型感染密切相关，但本研究结果表明鼻息肉复发与HPV感染高、低危亚型无显著相关性。

综上所述，鼻息肉组织中的HPV阳性率较高，提示鼻息肉与HPV感染的关系较正常鼻腔黏膜更为密切，这可能因为鼻腔黏膜抵抗力降低更易感染HPV病毒，对临床治疗鼻息肉、预防复发及相关疫苗的研制开发有一定意义。

[1]Kirtsreesakul V,Atchariyasathian V.Nasal polyposis:role of allergy on therapeutic response of eosinophil-and noneosinophil-dominated inflammation[J].Am J Rhinol,2006,20(1):95-100.

[2]王成硕,董震,杨占泉.Toll样受体mRNA在鼻息肉中的表达及意义 [J].中国耳鼻咽喉头颈外科,2004,11(3):185-187.

[3]周玉英,胡牧,刘翠苓.鼻息肉病中人类乳头状瘤病毒-DNA检测[J].临床耳鼻咽喉科杂志,2001,15(5):212-213.

[4]Ioannidis D,Lachanas VA,Florou Z,et al.Herpes viruses and human papilloma virus in nasal polyposis and controls[J].Braz J Otorhinolaryngol,2015,81(6):658-662.

[5]Zeng XX,Yan LX,Huang XX,et al.Prevalence and genotype distribution of human papillomavirus among Hakka women in China[J]. Ann Transl Med,2016,4(15):276.

[6]靳琼,沈铿,李辉,等.西藏自治区妇女子宫颈人乳头状瘤病毒感染现状调查及相关因素分析 [J].中华妇产科杂志,2009,44(12): 898-902.

[7]孙璞,陈晓平,裴斐,等.鼻内翻性乳头状瘤与人乳头状瘤病毒感染及其亚型的关系 [J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2010,45(4): 310-313.

[8]梁青壮,李德志,徐震纲.鼻腔-鼻窦内翻性乳头状瘤临床及其相关研究进展 [J].中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,2015,21(1):80-84.

[9]米热姑丽肉孜,江华,米尔班祖农,等.鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤研究进展 [J].广东医学,2010,31(20):2723-2725.

（责任编辑：何华）

Expression Level of HPV in Nasal Polypsxand Its Clinical Significance

LIAO Guizhou
(Clinical Laboratory,Dafeng Hospital of Chaoyang District,Shantou 515154,China)

Objective To explore the expression level of HPV in nasal polyps and its clinical significance.Methods 210 cases of paraffin-embedded tissue specimens of nasal polyps were selected as nasal polyps group and given HPV typing by GP5+/6+universal PCR primers.Another 20 cases of normal nasal mucosa tissue were selected as control group.Results The total positive rate of HPV of nasal polyps group was 40.95%(86/210),significantly higher than 0.00%(0/20)of control group,with statistical difference(P＜0.05).HPV virus was mainly HPV11 subtype.No statistical difference was found in the infection rates among different genders,age and distribution of high or low-risk subtypes in nasal polyps(P＞0.05).Conclusions The pathogenesis of nasal polyps is closely related to HPV infection.Both high and low-risk subtypes of HPV can be infected,but low-risk subtype(HPV11 subtype)is main,which has a certain significance for the clinical treatment of nasal polyps and development of relative vaccine.

Nasal polyps;HPV infection;Clinical significance

R765.25

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.03.0383

2016-11-06

廖桂周 （1978-），男，广东汕头人，本科学历，主管技师，研究方向：临床免疫学。