NF-κB和TLR4在慢性萎缩性胃炎中的表达及意义

王向前

（广州市中西医结合医院，广东 广州 510800）

NF-κB和TLR4在慢性萎缩性胃炎中的表达及意义

王向前

（广州市中西医结合医院，广东 广州 510800）

目的 探讨NF－κB和TLR4在慢性萎缩性胃炎中的表达及意义。方法 选取我院2015年3月至2016年3月期间收治的慢性胃炎和胃癌患者192例，分为A组 （69例，慢性非萎缩性胃炎）、B组 （65例，慢性萎缩性胃炎）和C组 （58例，胃癌）。采用免疫组化SP法分别检测三组患者胃黏膜中NF－κB和TLR4的表达水平。结果 A组和B组的NF－κB和TLR4阳性率比较差异均无统计学意义 （P＞0.05），而C组的NF－κB和TLR4阳性率显著高于A组和B组，差异均有统计学意义 （P＜0.05）。结论 慢性萎缩性胃炎患者NF－κB和TLR4表达水平的提高与胃癌的发生和发展有显著相关性，在慢性萎缩性胃炎患者中定期检查NF－κB和TLR4表达水平对胃癌的早期发现具有重要临床意义。

NF－κB；TLR4；慢性萎缩性胃炎；胃癌

0 前言

慢性萎缩性胃炎 （chronic atrophic gastritis，CAG）又称萎缩性胃炎，是一种慢性消化系统疾病［1］。慢性萎缩性胃炎不仅是临床常见的消化系统难治性疾病，还是胃癌的癌前病变之一。细胞核因子-B （nuclear factor kappa B，NF-κB）是一组普遍存在的多功能核转录因子［2］。TLR4（Toll-like receptor 4，TLR4）是一种Toll样受体，是近年研究的热点之一。研究［3］表明，TLR4可以通过各种信号通路促进炎症和肿瘤的发生和发展。本研究通过检测NF-κB和TLR4在慢性萎缩性胃炎患者中的表达，探讨其在CAG预防和治疗中的意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取我院2015年3月至2016年3月期间收治的慢性胃炎及胃癌患者192例，所有患者均符合我院关于慢性胃炎 （包括慢性非萎缩性胃炎和慢性萎缩性胃炎）及胃癌的诊断标准。A组 （69例，慢性非萎缩性胃炎）中，男38例，女31例；年龄38～73岁，平均年龄（43.5±10.6）岁。B组 （65例，慢性萎缩性胃炎）中，男36例，女29例；年龄41～75岁，平均年龄（45.2±11.3）岁。C组 （58例，胃癌）中，男32例，女26例；年龄45～81岁，平均年龄（48.8±13.7）岁。三组患者的一般资料比较差异无统计学意义 （P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法所有患者在做胃镜时，用活检钳钳取胃黏膜组织，制成组织切片，分别检测NF-κB和TLR4。检测所用SP试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司生产，NF-κB和TLR4单克隆抗体均由上海钰博生物科技有限公司生产。所有胃黏膜组织切片在68℃下进行烤片，持续20 min，然后进行常规脱腊脱水，将内源性过氧化物酶灭活，在缓冲液中煮沸修复抗原。先用羊血清封闭非特异性抗原，添加McAb NF-κB和McAb TLR4，在4℃下孵化12 h，加入生物素对二抗进行标记，在37℃恒温培养箱中孵育0.5 h，用磷酸缓冲盐溶液（PBS）进行冲洗，用二氨基联苯胺 （DAB）染色并进行复染，接着进行透明、脱水和干燥，最后封片并在光学显微镜下进行观察。

1.3 评价指标NF-κB阳性判断标准：胞质和 （或）胞核呈棕黄色颗粒。TLR4阳性判断标准：细胞浆或细胞膜呈棕黄色颗粒。每张切片均在光学显微镜下选取多个 （通常为≥5个）高倍视野进行观察计数，计数的细胞宜＞500个，根据细胞的染色度以及阳性细胞的比例计算SP评分。染色度评分标准：0分：细胞没有被染色；1分：轻微染色；2分：中度染色；3分：深度染色。着色细胞比例评分标准：0分：着色细胞比例＜5%；1分：着色细胞比例为5%～25%；2分：着色细胞比例为25%～30%；3分：着色细胞比例＞30%。SP评分 =染色度评分 ×着色细胞比例评分。根据SP评分判断患者 NF-κB和TLR4的阳性率，评价标准为：阴性 （-）：SP评分为0～1分；弱阳性（＋）：SP评分为2～3分； 中度阳性（＋＋）：SP评分为 4～6分；强阳性（＋＋＋）：SP评分为7～9分。

1.4 统计学方法采用SPSS 16.0统计软件对数据进行分析处理，计数资料用百分比表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

A组和B组患者NF-κB和TLR4阳性率比较差异无统计学意义 （P＞0.05），而C组患者NF-κB和TLR4阳性率高于A组和B组，差异有统计学意义 （P＜0.05）。见表1、2。

表1 三组患者的NF－κB阳性率比较 ［n，n（%）］

表2 三组患者的TLR4阳性率比较 ［n，n（%）］

3 讨论

研究［4］表明，慢性萎缩性胃炎的发病率和严重程度与患者的年龄呈正相关，因此认为慢性萎缩性胃炎实质上是胃黏膜的一种退行性改变，属于 “半生理”现象。临床上根据病变部位的不同和自身血清免疫学检查的差异可将慢性萎缩性胃炎分成两种，一种是自身免疫性慢性萎缩性胃炎 （A型），发病部位多为胃体部；另一种是多灶慢性萎缩性胃炎 （B型），发病部位多为胃窦部，B型慢性萎缩性胃炎在我国较为常见［5］。慢性萎缩性胃炎的发病原因十分复杂，随着近年来研究的不断深入，有数据显示慢性萎缩性胃炎的发病与遗传因素、免疫因素、理化因素刺激、慢性疾病、幽门螺旋杆菌感染、神经因素等有关，但慢性萎缩性胃炎的具体发病机制目前尚未完全明确。

NF-κB在机体的炎性反应和免疫应答等多种病理和生理过程中都发挥着非常重要的作用。NF-κB与慢性萎缩性胃炎的发生和发展过程密切相关，且炎症信号的下游级联式反应还可能使疾病朝着不良的方向发展，最终发展成肿瘤，目前已有临床研究［6］表明，NF-κB信号通路与肿瘤的发生和发展具有相关性。Toll样受体 （Toll-like receptor，TLR）属于一种蛋白质分子，是非特异性免疫的受体，此外也是特异性免疫和非特异性免疫的连接桥梁，TLR能够识别细菌或病毒的保守结构分子，当其突破机体的皮肤和黏膜等物理屏障时，它能识别并激活机体产生细胞免疫应答。最早发现TLR与果蝇胚胎的背、腹侧发育相关，而随着研究的不断深入，人们发现在哺乳动物体内也有类似受体存在，并统称为TLR家族。TLR4是人类最先发现且研究得最多、最为透彻的TLR蛋白，TLR4几乎分布在所有的细胞系中，主要在粒细胞、上皮细胞、内皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓单核细胞等参与宿主防御功能的细胞中表达。TLR4不仅可以识别LPS（革兰氏阴性菌脂多糖）和HSP（热休克蛋白）等外源性病原体，还可识别透明质酸盐和肝素硫酸盐降解的多糖部分以及局部内源性酶的级联活化反应。目前有研究［7］表明，经TLR4介导的信号通路可能与癌症的发生和发展相关。

为了探讨慢性萎缩性胃炎向胃癌的发展机制，为胃癌的早期发现提供参考，本研究选取我院2015年3月至2016年3月间收治的慢性胃炎及胃癌患者192例，根据其疾病类型不同分别分为A组 （慢性非萎缩性胃炎）、B组（慢性萎缩性胃炎）和C组 （胃癌），比较三组患者胃黏膜组织NF-κB和TLR4的表达水平，结果表明A组和B组患者NF-κB和TLR4阳性率比较差异无统计学意义 （P＞0.05），而C组患者NF-κB和TLR4阳性率高于A组和B组，差异具有统计学意义（P＜0.05），由此可见，NF-κB和TLR4的表达水平与胃癌的发生发展密切相关。

综上所述，NF-κB和TLR4在慢性萎缩性胃炎患者中表达水平的增加与胃癌的发生和发展显著相关，因此慢性萎缩性胃炎患者定期检查NF-κB和TLR4表达水平对胃癌的早期发现具有重要的临床意义。

[1]李琼,刘晏,吴坚炯.慢性萎缩性胃炎的治疗进展 [J].中医学报, 2013,28(1):114-116.

[2]石建玲,段恋,程波,等.胃幽门螺杆菌感染与慢性胃炎病理变化的相关性分析 [J].中国实验诊断学,2015,19(12):2069-2072.

[3]王小娟,罗燕,喻斌,等.灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证模型小鼠TLRs/NF-κB65信号通路的影响 [J].世界华人消化杂志,2014,22(23):3371-3379.

[4]陈凝.NF-κB信号通路在幽门螺杆菌致病机制中的作用的研究[D].福州:福建医科大学,2008.

[5]王冬青,丁西平,殷实.促炎细胞因子在胃癌前病变中的作用 [J].世界华人消化杂志,2014,22(1):39-45.

[6]钟国新.针刺对慢性萎缩性胃炎模型大鼠NF-κB转导系统影响的研究 [D].广州:广州中医药大学,2014.

[7]沙伟.升阳益胃汤阻断萎缩性胃炎大鼠细胞TLR4信号转导通路的研究 [D].兰州:甘肃中医药大学,2015.

（责任编辑：何华）

Expression and Significance of NF-κB and TLR4 in Chronic Atrophic Gastritis

WANG Xiangqian
(Guangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Guangzhou 510800,China)

Objective To explore the expression and significance of NF-κB and TLR4 in chronic atrophic gastritis.Methods 192 cases of patients with chronic gastritis or gastric cancer admitted to our hospital from March 2015 to March 2016 were selected and divided into group A(69 cases,chronic non-atrophic gastritis),group B(65 cases,chronic atrophic gastritis)and group C(58 cases,gastric cancer). Immunohistochemical SP method was used to test the expression levels of NF-κB and TLR4 in gastric mucous membrane of patients in these groups.Results No statistical difference was found in the positive rates of NF-κB and TLR4 between group A and group B(P＞0.05),but the positive rates of NF-κB and TLR4 of group C were significantly higher than those of group A and group B,with statistical differences(all P＜0.05).Conclusions The increased expression levels of NF-κB and TLR4 of patients with chronic atrophic gastritis are significantly related to the occurrence and development of gastric cancer.For patients with chronic atrophic gastritis,the regular examination of expression levels of NF-κB and TLR4 is of great clinical significance to the early discovery of gastric cancer.

NF-κB;TLR4;Chronic atrophic gastritis;Gastric cancer

R573.3

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.03.0363

2016-12-14

王向前 （1978-），男，河南周口人，硕士研究生学历，主治医师，研究方向：消化内科。