天津地区发生禽心包积液-肝炎综合征及其病毒分离鉴定

王 菁 ， 张文生 ， 刘 蕊 ， 李富桂

(1.天津农学院动物科学与动物医学学院 ， 天津西青300384 ； 2. 天津职业大学生物与环境工程学院 ， 天津北辰300402)

天津地区发生禽心包积液-肝炎综合征及其病毒分离鉴定

王 菁1， 张文生2， 刘 蕊1， 李富桂1

(1.天津农学院动物科学与动物医学学院 ， 天津西青300384 ； 2. 天津职业大学生物与环境工程学院 ， 天津北辰300402)

为探究禽心包积液-肝炎综合征的发病原因。对2016年7月天津市某家禽养殖场的病死鸡进行了大体病变检查、组织病理学检查、细菌学检验及其病毒的分离鉴定和回归试验等。结果显示，剖检以大量心包积液和肝脏肿大为主；组织切片H.E.染色观察到肝脏淤血、水肿，肝细胞变性、坏死且含有大量嗜碱性核内包涵体；细菌培养均为阴性；PCR检测禽腺病毒-4型(FAdV-4)呈现阳性；回归试验的结果与临床病例一致。最终诊断为禽心包积液-肝炎综合征，与I群4型禽腺病毒相关。病毒的致病性研究正在进行中。

心包积液-肝炎综合征 ； 禽 ； I群4型禽腺病毒 ； 诊断 ； 分离鉴定

自2015年以来，河南、辽宁、吉林、山东、河北等地鸡场相继发现以心包积液、肝脏肿大为主要症状的禽传染性疾病[1]。2016年7月天津市武清某养殖场肉鸡也出现类似病症。该病主要多发于20～30日龄的肉鸡，发病迅速，发病后4～8 d死亡率升高[2]。随着发病区域不断扩大，对我国的养鸡业造成了严重的经济损失。天津地区目前还没有该病的报道。为进一步了解此次发病的原因，本文对被检鸡进行了临床病理及其病原研究，该病毒的致病性研究正在进行中。

1 材料与方法

病料来源于2016年7月18日天津市某养殖场病鸡。对15只病死鸡进行剖检，采集多组织用于细菌学检查、组织病理学检查以及病毒分离。无菌采集肝脾，匀浆取上清，接种10日龄SPF鸡胚，收集尿囊液进行病毒基因组提取。根据GenBank发表的FAdV-4的hexon基因(EU177544)保守序列设计1对引物。上游引物：5′AATGACGGTCACGAAGAAGG 3′下游引物：5′AAGTTGGCCATGAGGTTCAC 3′片段大小为665 bp，用于病毒基因组RT-PCR扩增，测序分析同源性、遗传进化；同时，接种25只1日龄SPF雏鸡进行回归试验。

2 结果

2.1 剖检及细菌学检查结果 15只鸡均可见大量淡黄色心包积液呈胶胨样，肝脏不同程度坏死、肿大并伴有针尖状出血点。其中8只肾脏肿胀，偶有花斑肾；7只腔上囊黏膜水肿，囊内有黄绿色黏液；6只肺淤血、水肿；2只腺胃乳头出血；2只有少量尿酸盐沉积；1只心肌出血；1只腺胃与肌胃交界处出血。心包积液，肝脏、脾脏的细菌培养均为阴性。2.2 组织病理学检查 肝脏中央静脉、窦状隙内充满血液(见中插彩版图1)，部分肝脏呈淤血性水肿，肝细胞出现变性、坏死且有大量嗜碱性核内包涵体(见中插彩版图2)；心肌纤维变性、间质水肿、充血及少量炎性细胞浸润；肺泡壁毛细血管扩张充满血液；腔上囊滤泡和假复层上皮萎缩、变性；其他组织无明显组织病理学变化。

2.3 分子生物学PCR检查结果 电泳结果显示，从鸡胚尿囊液获取的病毒液中提取基因组DNA，通过RT-PCR扩增出1条665 bp的预期目的条带(图3)。

图3 PCR产物电泳结果

M:DL-2 000 DNA Marker 1:待检样品； 2:待检样品

2.4 序列分析结果 将临床分离株命名为TJ1607。用MegAlign进行同源性分析，结果表明，TJ1607与GenBank公布的FAdV-4对比，同源性为98.3%～97.3%。其中与中国分离株同源性为98.3%，与印度分离株同源性为97.9%，与加拿大分离株同源性为97.3%。与FAdV-10同源性93.3%。与腺病毒其他血清型同源性为48.4%～73.2%。

用MegAlign进行遗传进化分析，结果见图4。结果表明，分离株与FAdV-4亲缘关系最近。结合发病情况和病理变化将该病诊断为I群4型禽腺病毒感染。

图4 基于腺病毒hexon基因的遗传进化分析

2.5 回归试验结果 接种第3天试验组开始死亡，对照组未见死亡。发病死亡鸡的临床症状、病理变化和病毒分离结果均与临床病例一致。

3 讨论

3.1 序列分析 通过基因序列比对分析确定此次疫病是由TJ1607引起，因此禽心包积液-肝炎综合征在天津地区为首次报道。临床分离株(TJ1607)与 GenBank 中公布的FAdV-4进行比对,同源性为 98.3%～97.3%；其中与我国的分离毒株JSJ13同源关系较近为98.3%，比较核酸序列发现部分碱基发生突变，可能将影响致病性的强弱。在回归试验中，攻毒组死亡率约为36%，可推测本试验的分离株为高致病性变异株，毒株的致病性等试验正在进行中。

3.2 病原分析 禽腺病毒(FAdV)是一种无囊膜的双链DNA病毒，是家禽常见的传染病源。根据抗原结构不同分为Ⅰ、Ⅱ群和Ⅲ群。Ⅰ群主要是传统的禽腺病毒，具有共同的特异性抗原，从中分离出了12个血清型(FAdV1-12)[3]。

心包积液-综合征首次发生于1987年的巴基斯坦[4]，由于疫情主要发生在安卡拉地区,所以也称之为安卡拉病[5]，在此之前我国的相关报道较少。自2015年以来我国陆续出现类似的疾病，报道中常见以安卡拉病、心包积液综合征、心包积液肝炎综合征、鸡包涵体肝炎等名称命名该病。本次试验遗传进化分析结果表明，TJ1607与FAdV-4亲缘关系最近，该病主要是由I群4型腺病毒(FAdV-4)引起，这与部分报道[6-7]FAdV-4本身可引起发病的结论是一致的。为进一步研究FAdV-4的发病机理奠定了良好的基础。

3.3 防治措施 目前，对该病尚无有效的治疗和免疫措施，但强化饲养管理，可提高机体抵抗力。做好鸡舍的卫生管理，加强通风，合理消毒以防止粪便中的病毒经其排泄物传播。传染性腔上囊病病毒(IBDV)和传染性贫血病毒(CIAV)都会增加腺病毒的致病性，所以要严格执行卫生防疫措施并做好免疫。在治疗过程中，建议减少抗生素类药物的使用，同时使用保肝护肾的药品以减轻对肝肾的损伤。

[1] Zhao J,Zhong Q, Zhao Y,etal. Pathogenicity and Complete Genome Characterization of Fowl Adenoviruses Isolated from Chickens Associated with Inclusion Body Hepatitis and Hydropericardium Syndrome in China[J]. Plos One, 2015, 11(8)：e0161744.

[2] Asthana M, Chandra R, Kumar R. Hydropericardium syndrome: current state and future developments[J]. Archives of Virology, 2013, 158(5):921-931.

[3] Mcferran J B, Smyth J A. Avian adenoviruses[J]. Revue Scientifique Et Technique, 2000, 19(2):589-601.

[4] Khawaja D A, Ahmed S, Rauf A M,etal. Isolation of an adenovirus fromhydropericardium syndrome in broiler chicks[J]. Vet Res,1988，2-17.

[5] 扈荣良. 现代动物病毒学[M]. 北京:中国农业出版社, 2014：681-683.

[6] 罗玲, 赵康, 张媛,等. 鸡心包积水综合征病原的分离与鉴定[J]. 中国家禽, 2016, 38(6):56-58.

[7] Mittal D, Jindal N, Tiwari A K,etal. Characterization of fowl adenoviruses associated withhydropericardium syndrome and inclusion body hepatitis in broiler chickens[J]. Indian Journal of Virology, 2014, 25(1):114-119.

Hydropericardium Syndrome-Inclusion Body Hepatitis in Tianjin Area and Virus Isolation & Identification

WANG Jing1, ZHANG Wen-sheng2, LIU Rui1, LI Fu-gui1

(1.College of animal science and veterinary medicine, Tianjin AgriculturalUniversity,Tianjin 300384，China; 2.Institute of Biology and Environment Engineering,Tianjin Vocational Institute,Tianjin 300402，China)

In order to explore the causes of hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis, experiments using the methods of symptom examination, gross lesion& histopathological observation，bacteriologic tests，virus isolation and artificial infection were applied on a chicken farms in Tianjin in July 2016. The results showed that pericardial enlarged hydropericardium and hepatomegaly were the main changes grossly. Congestion and edema in liver, hepatocytic degeneration and necrosis with many intranucleic basophilic inclusion bodies in tissue sections stained with H.E.were observed under microscope. Bacterial cultures were negative and FAdV-4 was positive by PCR. Artificial infection case was the same as clinical case. These results suggest that hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis is caused by FAdV-4 infection. The virus pathogenicity studies are ongoing.

Hydropericardium Syndrome-Inclusion Body Hepatitis; Fowl; Fowl adenovirus 4; Diagnosis; Isolation & Identification Corresponding author：LI Fu-gui

2016-11-15

天津市科技计划项目(15ZXBFNC00210)

王菁(1990-)，女，硕士生，主要研究方向为小动物疾病，E-mail:wangjingtn2014@126.com

李富桂，E-mail:lifugui2008163@163.com

S831.7

A

0529-6005(2017)03-0016-02