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高效液相色谱法测定参麦散结胶囊中羟基红花黄色素A的含量

2017-04-10袁常珍

中国医院用药评价与分析 2017年3期
关键词:黄色素参麦羟基

袁常珍,梅 刚

(1.泸州市食品药品检验所中药室,四川 泸州 646000; 2.四川省泸县中医医院药剂科,四川 泸州 646000)

高效液相色谱法测定参麦散结胶囊中羟基红花黄色素A的含量

袁常珍1*,梅 刚2

(1.泸州市食品药品检验所中药室,四川 泸州 646000; 2.四川省泸县中医医院药剂科,四川 泸州 646000)

目的:建立高效液相色谱法测定参麦散结胶囊主药红花中羟基红花黄色素A的含量。方法:色谱柱为ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(V∶V∶V=23 ∶2 ∶75),检测波长为403 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为35 ℃。结果:羟基红花黄色素A的质量浓度在24.25~121.25 μg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.999 5,n=5),平均回收率为97.93%,RSD为1.64%(n=6)。结论:本方法简便快速、准确、重复性好,可用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法; 参麦散结胶囊; 羟基红花黄色素A; 含量测定

参麦散结胶囊是由党参、麦冬、酸枣仁、红花等9味中药制成的中药复方制剂,由泸州医学院(即西南医科大学附属医院)制剂室生产,具有益气养阴、软坚散结、活血化瘀等功效,适用于颈部包块、心悸自汗、神疲乏力、气短等甲状腺肿大见上述症状者,其疗效显著,在临床应用广泛。红花具有活血通经、散瘀止痛的功效,其主要成分为羟基红花黄色素A、山萘素等[1-2]。现选取羟基红花黄色素A的含量作为参麦散结胶囊质量控制的指标,采用高效液相色谱法进行测定,报告如下。

1 材料

1.1 仪器

Angilent 1200型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司);LC 3D系统化学工作站(版权:安捷伦科技有限公司2001—2007);安捷伦G1329A型液相色谱进样器;XS205DU型电子天平(梅特勒-托利多);KH7200B型超声清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。

1.2 药品与试剂

羟基红花黄色素A(中国食品药品检定研究院,批号:111637—201308);参麦散结胶囊(泸州医学院附属医院,批准文号:川药制字Z20070523,批号:160601、160701、160728,规格:0.45 g/粒);甲醇为色谱纯(美国Fisher Scientific),乙腈为色谱纯(美国Fisher Scientific),水为重蒸馏水,磷酸为分析纯(重庆川东化工集团有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);柱温为35 ℃;流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(V∶V∶V=23 ∶2 ∶75)[3-6];流速为1.0 ml/min;检测波长为403 nm[7-10];进样量为15 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.2 供试品溶液:精密称取参麦散结胶囊中的内容物1 g,置于50 ml容量瓶中,加入30%甲醇适量,超声30 min(功率300 W,频率50 kHz,冰袋控温)[1,3,11-12],摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性对照品溶液:按处方比例计算,制成缺红花的阴性样品100粒,按“2.2.2”项下方法制备,即得。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下对照品贮备溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各15 μl,按照“2.1”项下色谱条件进样测定,记录色谱图,见图1。结果显示,对照品溶液与供试品溶液主成分峰的保留时间基本一致,供试品溶液主成分峰与杂质峰分离良好,阴性对照无干扰,理论板数以羟基红花黄色素A峰计算>3 000。

A.对照品溶液;B.供试品溶液;C.阴性对照溶液A. reference solution; B. test solution; C. negative reference solution图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 线性关系考察

分别精密量取“2.2.1”项下对照品贮备溶液1、2、3、4、5 ml,置于10 ml容量瓶中,以30%甲醇溶液定容至刻度[1,7,12-14],摇匀。分别精密量取上述溶液15 μl,按照“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。以羟基红花黄素A峰面积(Y)为纵坐标、质量浓度(X)为横坐标进行线性回归,得回归方程Y=16.937 5X-12(r=0.999 5,n=5)。结果表明,羟基红花黄色素A质量浓度在24.25~121.25 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。采用Kolmogorov-Smimov检验考察数据是否符合正态分布,采用Levene检验考察数据的方差齐性。符合正态分布且方差齐的计量资料以x±s表示,采用t检验;计数资料以例数或率表示,采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

精密量取“2.2.1”项下对照品贮备溶液3 ml,置于10 ml容量瓶中,加入30%甲醇溶液稀释至刻度,即得质量浓度为72.75 μg/ml的对照品溶液。精密量取上述对照品溶液15 μl,按“2.1”项下色谱条件重复进样6次,记录峰面积。结果表明RSD=0.86%(n=6),仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液,分别于室温(25 ℃)下放置0、2、4、6、8、10、12、18、24 h时进样测定[12-13,15],进样量15 μl,记录峰面积。结果表明RSD=1.02%(n=8),供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.7 加样回收率试验

取已知含量的样品1 g,共3份,置于50 ml容量瓶中,分别精密加入“2.2.1”项下对照品贮备溶液10、15、25 ml,加30%甲醇溶液适量,超声处理30 min(功率300 W,频率50 kHz,冰袋控温),并用30%甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,滤过。分别精密量取续滤液5 ml,置于10 ml容量瓶中,加入30%甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,按照“2.1”项下色谱条件进样测定,计算加样回收率,结果见表1。

表1 羟基红花黄色素A加样回收率试验结果(n=6)Tab 1 Recovery test of hydroxysafflor yellow A(n=6)

2.8 重复性试验

精密称取同一批样品(批号:160728)适量,共6份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计算含量。结果表明,羟基红花黄色素A的平均含量为4.469 5 mg/g,RSD=0.85%(n=6),本方法重复性良好。

2.9 样品含量测定

取各批样品适量,分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样测定并计算样品中羟基红花黄色素A的含量,见表2。

表2 羟基红花黄色素A含量测定结果Tab 2 Content determination of hydroxysafflor yellow A

3 讨论

3.1 色谱条件考察

参照《中华人民共和国药典:一部》(2015年版)红花“含量测定”项下的色谱条件和测定方法对参麦散结胶囊中羟基红花黄色素A进行含量测定,根据品种自身特点,对流动相、提取溶剂、提取时间做部分调整后所得方法准确、快速、重现性好,可用于羟基红花黄色素A的含量测定。参考相关文献中采用甲醇磷酸系统作为流动相的方法[3],本研究分别考察了甲醇-0.5%磷酸溶液(V∶V=25 ∶75)、甲醇-0.5%磷酸溶液(V∶V=20 ∶80)、甲醇-0.5%磷酸溶液(V∶V=27 ∶73)、甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(V∶V∶V=26 ∶2 ∶72)作为流动相。结果表明,甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(V∶V∶V=23 ∶2 ∶75)作为流动相时保留时间适宜,分离效果、对称性、重复性、理论板数较好。并分别考察了柱温35、30、25 ℃时,流速1.5、1.2、1.0、0.9、0.8 ml/min时的结果,最终确定了柱温为35 ℃、流速为1.0 ml/min的色谱条件。

3.2 提取时间考察

由于羟基红花黄色素A的热不稳定性,本研究采用超声法提取样品。在相同的试验条件下,考察了样品在超声20、30、35、40、45、50 min后的提取效果。结果表明,样品在超声30 min时提取率最高,损失最小。而随着超声时间延长,可能导致水温升高,羟基红花黄色素A含量下降,故在超声过程中,可用冰袋控温。

3.3 提取溶剂考察

在相同实验条件下,本研究分别考察了流动相及100%、75%、50%、30%、25%的甲醇溶液作为提取溶剂时的提取率。结果表明,选择30%甲醇溶液时的提取率最高,故选用30%甲醇溶液作为提取溶剂。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].2015年版.北京:中国医药科技出版社,2015:151.

[2]梁颖,裴瑾,万德光.红花黄色素中主要成分的含量测定[J].中国现代应用药学,2011,28(13):1349-1351.

[3]陈宗良,朱克,周玲娜,等.HPLC法测定愈伤灵胶囊中羟基红花黄色素A的含量[J].药物分析杂志,2010,30(2):297-299.

[4]江建君,李玲玲,陈惠玲,等.HPLC法测定正天丸和正天胶囊中羟基红花黄色素A的含量[J].中国药品标准,2013,14(3):197-200.

[5]孙瑛,何春龙,王焕芸.HPLC法测定五味清浊丸中羟基红花黄色素A的含量[J].现代中药研究与实践,2015,29(1):58-60.

[6]黎跃成.HPLC法测定肤痒颗粒中羟基红花黄色素A的含量[C]//第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集,2011:178.

[7]赵明波,邓秀兰,王亚玲,等.高效液相色谱法测定红花中羟基红花黄色素A[J].色谱,2003,21(6):593-595.

[8]赵国英,袁秀荣,李玲,等.鹿红颗粒中黄芪甲苷和羟基红花黄色素A的含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(6):40-43.

[9]汤化琪,张志千,汪文琪,等.宣痹洗剂中羟基红花黄色素A的含量测定[J].中国医药导报,2015,12(12):129-132.

[10] 邹婕凡,周萍,鲁翠香.HPLC法测定丹红注射液中羟基红花黄色素A的含量[J].现代医药卫生,2013,2(5):658-659.

[11] 杨红,陈岳蓉,刘海青.RP-HPLC测定骨筋丸胶囊中羟基红花黄色素A、落干酸和龙胆苦苷的含量[J].药物分析杂志,2014,34(3):423-427.

[12] 甄栋钦,苏映雪,王延东.红花黄色素滴眼液中羟基红花黄色素A的含量测定[J].今日药学,2016,26(10):687-690.

[13] 尤艳艳,张艳芬,富光明,等.HPLC法测定菊花七味胶囊中羟基红花黄色素A的含量[J].内蒙古民族大学学报:自然科学版,2016,31(1):68-70.

[14] 彭官良,梅昭,孔令提.HPLC法同时测定复方丹参口服液中羟基红花黄色素A和丹酚酸B的含量[J].中国药房,2015,26(33):4726-4728.

[15] 喻录容,何先元,黄英如.HPLC同时测定冠心康颗粒中芍药苷、丹酚酸B和羟基红花黄色素A的含量[J].中国现代应用药学,2015,32(5):561-564.

Content Determination of Hydroxysafflor Yellow A in Shenmaisanjie Capsules by HPLC

YUAN Changzhen1, MEI Gang2

(1.Traditional Chinese Medicine Laboratory,Luzhou Food and Durg Inspection Institute, Sichuan Luzhou 646000, China; 2.Dept.of Pharmacy, Sichuan Luxian County Traditional Chinese Medicine Hospital, Sichuan Luzhou 646000, China)

OBJECTIVE:To establish the method for the content determination of hydroxysafflor yellow A in Shenmaisanjie capsules by high performance liquid chromatography(HPLC). METHODS: The chromatographic column was ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm), the mobile phases consist of methanol-acetonitrile-0.7% phosphoric acid(V∶V∶V=23 ∶2 ∶75), with detective wavelength of 403 nm and flow rate of 1.0 ml/min, the column temperature was 35 ℃. RESULTS: The calibration curve of hydroxysafflor yellow A was linear over the range of 24.25 μg/ml-121.25 μg/ml(r=0.999 5,n=5). The average recovery rate was 97.93%,RSD=1.64%(n=6). CONCLUSIONS: The method is simple, rapid and accurate with good reproducibility and can be used for the quality control of the preparation.

High performance liquid chromatography; Shenmaisanjie capsules; Hydroxysafflor yellow A; Content Determination

R927.2

A

1672-2124(2017)03-0377-03

2016-11-25)

*主管中药师。研究方向:药品检验。E-mail:270414608@qq.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.03.033

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