HPLC法测定颈康片中三七含量

HPLC法测定颈康片中三七含量

刘海洋

目的建立高效液相色谱法测定颈康片中三七含量的测定方法。方法色谱柱：Inertsil ODS-SP C18（4．6 mm×250 mm，5μm），检测波长：203 nm。结果三七皂苷R1在37．75～755．01μg，人参 皂 苷 Rg1在 144．97～ 2 899．40μg， 人 参 皂 苷 Rb1在 143．36～2 867．22μg，呈线性关系（r=0．999 9），三七皂苷R1的平均回收率为93．8%（RSD=1．7%）。人参皂苷Rg1的平均回收率为95．5%（RSD=0．8%）人参皂苷Rb1的平均回收率为93．8%（RSD=1．4%）。结论本方法结果准确，重复性好，可作为该制剂的质量控制指标。

颈康片；三七；HPLC；含量测定

颈康片是由熟地黄、何首乌、杜仲、三七等九味药材组成的中药制剂[1-4]。具有补肾、活血、止痛功效，用于肾虚血瘀所致的颈椎病[5-6]。三七作为方中主药，本文以其皂苷类成分为检测指标进行研究，建立了适用于该品种的质量控制的高效液相色谱方法。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（LC-2010AHT型，Lcsolution工作站）。颈复康片（吉林省龙泰药业有限公司 150101）三七皂苷R1对照品（由中国食品药品检定研究院提供），批号：110745-201117，规格：供含量测定用；人参皂苷Rg1对照品（由中国食品药品检定研究院 提供），批号： 110703-201128，规格：供含量测定用（含量以93.4%计）；人参皂苷Rb1对照品（由中国食品药品检定研究院 提供），批号：110704-200921； 规格：供含量测定用（含量以92.6%计）。试剂：乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-SP C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1进行梯度洗脱。

2.2 对照品溶液的制备

取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品及人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml中含三七皂苷R10.04 mg、人参皂苷Rg10.15 mg、人参皂苷Rb10.15 mg的混合溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣，研细，精密称取1 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 ml，称定重量，回流提取4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加水10 ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次25 ml，合并正丁醇液，氨试液洗2次，每次25 ml，合并氨液，用水饱和的正丁醇25 ml洗涤氨液，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇转移至5 ml量瓶中，摇匀，即得[7-8]。

2.4 阴性对照液的制备

根据处方取除三七外的其余全部药味，按工艺制备成缺三七的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。吸取对照品、供试品、阴性对照溶液，分别注入色谱仪，阴性样品色谱在与三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1峰相应的保留时间附近无干扰峰检出，符合检测要求。

2.5 线性考察

取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品及人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml中含三七皂苷R10.08mg、人参皂苷Rg10.3 mg、人参皂苷Rb10.3 mg的混合溶液，作为储备液。分别精密吸取储备液1 ml、5 ml、10 ml、15 ml至20 ml量瓶中，加甲醇至刻度。吸取上述四种溶液及储备液各10μl，注入高效液相色谱仪，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明三七皂苷R1在37.75～755.01μg范围内，呈线性，人参皂苷Rg1在144.97～2 899.40μg范围内，呈线性，人参皂苷Rb1在143.36～2 867.22μg范围内，呈线性，符合外标法定量测定的要求。

2.6 精密度试验

吸取同一供试品溶液10μL，重复6次，注入液相色谱仪，测定峰面积，结果三七皂苷R1精密度RSD 0.9%、人参皂苷Rg1精密度RSD 1.2%及人参皂苷Rb1精密度RSD 1.3%。

2.7 稳定性试验

取室温下放置的同一样品溶液，分别在0、12、24、36、48小时进样，考察其稳定性，以峰面积为指标，结果三七皂苷R1峰面积RSD为1.5%，人参皂苷Rg1峰面积RSD为0.8%，人参皂苷Rb1峰面积RSD为1.4%，结果表明48小时内供试品溶液的含量基本稳定。

2.8 重复性试验

同一批号样品，独立测定6份，结果见表2。表明该法具良好的重复性。

表2 重复性试验结果

2.9 回收率试验

取已知含量的供试品（吉林省龙泰药业有限公司 150101，含量为0.92 mg/片）6份，分别精密加入三七皂苷R1对照品溶液（0.192 7 mg/ml）1ml、人参皂苷Rg1对照品溶液（0.792 3 mg/ml）1ml及人参皂苷Rb1对照品溶液（0.793 8 mg/ml）1 ml，测定，计算回收率。三七皂苷R1回收率结果见表3，人参皂苷Rg1回收率结果见表4，人参皂苷Rb1回收率结果见表5。表3得出回收率平均值：93.8%，RSD：1.7%。表4得出回收率平均值：95.5%，RSD：0.8%。表5得出回收率平均值：93.8%，RSD：1.4%。以上结果表明本法回收率较好，准确度较高。

3 讨论

柱的选择及柱效的考察：采用四种色谱柱进行考察（1）Inertsil ODS-SP C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，（2）Thermo Hypersil GOLD C18（4.6 mm×250 mm，5 μm） 色谱柱，（3）Thermo ODS2 Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，（4）依利特Hypersil ODS2 C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱，分别按正文方法进行实验，结果理论板数分别为（1）167 492，（2）60 736，（3）13 486，（4）13 660 ，根据四种柱的检测结果，确定本品理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于3 000，结果表明，该方法有较好的色谱柱适应性。

表3 三七皂苷R1回收率结果

表4 人参皂苷Rg1回收率结果

表4 人参皂苷Rb1回收率结果

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如何撰写论文的“讨论”

讨论是论文中很重要的部分，其主要任务是探讨“结果”的意义。讨论的主要内容包括：（1）主要的原理和概念；（2）实验条件的优缺点；（3）本人结果与他人结果的异同，突出新发现、新发明；（4）解释因果关系，说明偶然性与必然性；（5）尚未定论之处，相反的理论；（6）急需研究的方向和存在的主要问题。“讨论”的内容也以精简为原则，要能讲清楚主要的论点，已经谈过的不宜在这一节里予以重复，不要仅罗列国外文献资料，或仅罗列与本文无关的综述材料。在结论的问题中避免以假设来“证明”假设，以未知来说明未知，并依次循环推论。

HPLC Determination of Panax Notoginseng in Jingkang Tablet

LIU Haiyang Instrument Room, Tonghua Institute for Food and Drug Control, Tonghua Jilin 134001, China

ObjectiveTo determine the quality of panax notoginseng in Jingkang tablet, a simple and reliable method of high-performance liquid chromatography (HPLC) was established.MethodsThe colum was Inertsil ODS-SP C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm particle size) and thedetective wavelength was 203 nm.ResultsThe linear ranges for ginsenoside R1, ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1were 37.75～755.01 μg (r=0.999 9), 144.97～2 899.40 μg (r=0.999 9) and 143.36～2 867.22 μg (r=0.999 9),respectively. The average recovery rate was 93.8%, 95.5%, 93.8%, and the relative standard deviation was 1.7 %,0.8 %,1.4%, respectively.ConclusionHPLC analysis can be used for the quality assessment of Panax notoginseng in Jingkang tablet.

Jingkang tablet; panax notoginseng; HPLC; contents determination

R284

A

1674-9316（2017）05-0112-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．05．064

通化市食品药品检验所，吉林 通化 134001