顶空气相色谱法测定罗氟司特中5种残留溶剂

高海鹰，王海玲，关悦

（吉林省药物研究院，吉林 长春 130061）

顶空气相色谱法测定罗氟司特中5种残留溶剂

高海鹰，王海玲，关悦

（吉林省药物研究院，吉林 长春 130061）

目的：建立罗氟司特原料药中四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、甲苯和N,N二甲基甲酰胺残留溶剂的顶空气相色谱测定方法。方法：以二甲基亚砜（DMSO）为溶剂，DB-WAX123-7032石英毛细管柱为色谱分离柱，FID检测器，程序升温，氮气为载气。结果：四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、甲苯和N,N二甲基甲酰胺（DMF）均能得到良好分离。5种残留溶剂均有良好的线性关系，线性系数均＞0.999；平均回收率分别为98.79%，100.99%，106.04%，100.85%，105.39%；检出限分别为0.011 0，0.006 9，0.006 7，0.001 6，0.076 0 μg/mL。结论：该方法的检测灵敏度高，线性关系良好，可用于罗氟司特原料药残留有机溶剂的检测。

罗氟司特；顶空气相色谱法；残留溶剂

罗氟司特是十余年来全球首个获准用于慢性阻塞性肺疾病的新型选择性磷酸二酯酶（PDE）-4抑制剂，在哮喘和重症慢性阻塞性肺疾病的临床治疗上获得了较好的疗效[1-2]。为了对原料药进行质量控制，本文根据新药申报资料的基本要求，针对吉林省药物研究院制备罗氟司特原料药在生产工艺中使用的四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、甲苯和DMF，进行质量控制。

由于异丙醇与乙酸乙酯的沸点均在80℃左右，非常接近，采用程序升温可达到有效分离，在220℃时保持维持2分钟，气化室温度为200℃，确保溶媒全部被吹出，不影响下一次样品的测定。根据罗氟司特水不溶性质以及结合顶空进样的样品溶剂选择原则，确定以DMSO作为样品溶剂，建立了罗氟司特原料药中上述5种溶剂残留量的测定方法，并对该方法进行了方法学验证。结果显示，该气相色谱方法专属性好、灵敏度高，可订入质量标准用于罗氟司特原料药有机残留溶剂的质量控制[3]。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 7820A气相色谱仪（美国Agilent公司）、Agilent 7694E顶空自动进样装置、安捷伦色谱工作站；KQ-50E型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；New Classic MS105DU型全自动电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。四氢呋喃（分析纯，山东禹王实业有限公司化工分公司）、乙酸乙酯（分析纯，天津市光复科技发展有限公司）、异丙醇（分析纯，天津市光复科技发展有限公司）、甲苯（分析纯，北京化工厂）和DMF（分析纯，山东禹王实业有限公司化工分公司）、DMSO（分析纯，山东禹王实业有限公司化工分公司）均为分析纯。罗氟司特原料药样品由吉林省药物研究院制备。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件色谱柱为DB-WAX123-7032石英毛细管柱（0.25 μm×0.32 mm×30 m），柱温采用程序升温：起始温度35℃，保持0 min，以4℃/min的速率升到60℃，保持0 min，以20℃/min的速率升至120℃，保持2 min，以40℃升温速率升至220℃，保持2 min。检测器温度：150℃，气化室温度200℃，载气N2，压力10 psi，分流比5∶1，进样体积1 mL[4-8]。顶空参数：瓶平衡温度140℃、平衡时间30 min、LOOP温度160℃、TRLINE温度180℃。

1.2.2 溶液配制对照品溶液的制备：储备溶液：分别取甲苯89 mg，DMF 88 mg，四氢呋喃72 mg，乙酸乙酯500 mg，异丙醇500 mg，精密称定于100 mL量瓶中，用DMSO溶解并稀释至刻度，摇匀。标准溶液：精密量取储备液10 mL，置100 mL量瓶中，用DMSO稀释至刻度摇匀。精密量取5 mL，置20 mL顶空瓶中，压盖密封。

供试品溶液的制备：取本品0.5 g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，精密加入DMSO 5 mL，加盖密封，振摇使溶解。

2 结果与讨论

2. 1 分析方法的建立

2.1.1 色谱柱的筛选根据5种待测有机溶剂的特性合理选择了具有改善低沸点分析物的分离度的特点极性较强的DB-WAX聚乙二醇（PEG）气相毛细管柱，适当调节初始化温度、流速及分流比等因素，使四氢呋喃与乙酸乙酯得到有效的分离。

2.2 分析方法的验证

2.2.1 系统适用性试验分别考察样品溶剂四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、甲苯和DMF相互间准确定量的干扰情况（见图1）。空白溶液对测定DMF有干扰，在测定DMF含量给予扣除（空白溶液对测定DMF干扰峰面积为A＝28 280，在后续测定DMF方法学验证等各项实验中均需予以扣除），其余4种残留溶剂的色谱峰在各自出峰时间处不产生相互干扰，同时各组分也不含有干扰其他组分测定的杂质峰，说明本方法合理可行。系统适用性在《中华人民共和国药典》（2015年版）中有明确的要求，色谱峰理论塔板数不低于5 000，与其相邻色谱峰的分离度应＞1.5。实验中以混合对照品溶液为测试液，在上述已建立的色谱条件下进样，记录各组分的保留时间（2.277 min，2.417 min，2.754 min，3.940 min，8.377 min）、分离度（1.50，3.48，5.70，6.25，11.90）、理论塔板数（9 257，10 762，12 011，36 427，374 484）。结果表明该分析方法能够满足药典对系统适用性的要求。

图1 系统适用性气相色谱图

2.2.2 检出限和定量限及线性范围对于工艺用到的潜在的残留溶剂，检出线（LOD）及定量限（LOQ）是根据信噪比法来确定的，以信噪比（S/N）为3时相应的浓度为检出限，S/N为10时为定量限。连续进样对照溶液6针，测定其信平均S/N。结果显示，四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、甲苯和DMF的检出限分别小于《中华人民共和国药典》（2015年版）规定的浓度限度。表明采用外标曲线法可实现对药物中溶剂残留量的准确定量。见表1。

表1 溶剂的检出限、定量下限、线性方程、线性范围及相关系数

2.2.3 精密度试验将标准溶液连续6次平行顶空进样，记录各组分的峰面积，计算其相对标准偏差（RSD）。得到5种溶剂的峰面积的RSD分别为1.83%，1.92%， 1.92%，2.21%，1.94%，3.12%，均小于药物质量控制方法研究中关于精密度试验峰面积RSD（n＝6）不＞5.0%的规定，表明本方法精密度良好。见表2。

表2 精密度试验结果

2.2.4 回收率试验精密称取罗氟司特原料样品0.5 g，分别置顶空进样瓶中，分别精密加入标准品溶液5 mL，密封，使溶解，依法测定。平均回收率为四氢呋喃98.79%；乙酸乙酯100.99%；异丙醇106.04%；甲苯100.85%；DMF 105.39%。满足准确度实验平均回收率在90%～110%，RSD（n＝6）＜5.0%的规定，表明本方法准确度良好。见表3。

2.2.5 样品测定取本品3批依上述方法检查，结果3批样品的乙酸乙酯量分别为：0.067%，0.071%，0.081%，其余4种溶剂均未检出，《中华人民共和国药典》（2015年版）限度要求乙酸乙酯不得高于0.5%，因此符合规定。见表4。

3 结论

根据《中华人民共和国药典》（2015年版）四部规定，四氢呋喃限度为0.072%，甲苯限度为0.089%，异丙醇、乙酸乙酯属于第三类溶剂，限度为0.5%，DMF限度为0.088%，均需要进行残留量的研究和控制，因此本文建立了测定罗氟司特原料药中5种残留溶剂的顶空气相色谱方法。通过实验条件优化 ，本文最终确立了以DB-WAX123-7032石英毛细管柱为分析柱、瓶平衡温度140℃、平衡时间30 min、LOOP温度160℃、TRLINE温度180℃的分析方法。对3批样品的测定结果表明，5种溶剂的残留量均小于限度要求，符合要求。经过方法学验证，该方法的专属性、检出限、线性相关性、精密度、准确度等各项指标均可满足药物质量控制的方法学要求，所建立的分析方法能够对罗氟司特原料药中的残留溶剂达到有效监控，可以作为企业产品研发与生产的质控方法。

表3 回收率试验结果

表4 3批原料药残留溶剂的测定结果

[1] Porpodis K, Domvri K. Rof umilast a phosphodiesterase-4 inhibitor induces phagocytic activity in Greek COPD patients [J]. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis,2015,15(10):1123-1128.

[2] Lee Q, Mocarski M. Benefits of Early Roflumilast Treatment After Hospital or Emergency Department Discharge for a COPD Exacerbation [J].Am Health Drug Benef ts,2016,9(3):140-150.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(2015年版)四部[M].中国医药科技出版社,2015.

[4] 张晓娟,朱晓斌.气相色谱法测定来曲唑中甲醇、异丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的残留量[J].广东化工,2012,39(3):166-167.

[5] 党民团,张雪妮.顶空色谱法测定琥珀酸美托洛尔中残留溶剂的研究[J].渭南师范学院学报,2014,29(23):29-32.

[6] 宋劲燕,曹建英.顶空进样法测定罗氟司特中的残留溶剂[J].中国当代医药,2014,21(12):58-60.

[7] 邱宣,王爱迪.顶空气相色谱法测定罗氟司特原料药中残留溶剂的含量[J].应用化工,2013,42(8):1541-1543.

[8] 苏建峰,钟茂生,陈晶,等.气相色谱-质谱法与气相色谱法测定茶叶及茶叶加工品中295种农药多残留[J].分析测试学报,2015,34(6):625-638.

本文编辑：张钰

Determination of Five Residual Solvents in Rof umilast by Headspace Gas Chromatography

Gao Hai-ying, Wang Hai-ling, Guan Yue
(Jilin Institute of Pharmaceutical Research, Jilin Changchun 130061, China)

Objective：To establish a headspace gas chromatography method for determinition of tetrahydrofuran, ethyl acetate, isopropanol, toluen and N,N-dimthyl formamide contents in roflumilast material.Methods：The determination was carried on a DB-WAX123-7032 capillary column with sequential increase of temperature programming. The solvent media was dimethyl sulfoxide (DMSO), with a FID detector, while the carrier gas was nitrogen.Results：All the f ve solvents were separated effectively, of which the linear coeff cients were more than 0.999. The average recovery rates of tetrahydrofuran, ethyl acetate, isopropanol, toluen and N,N-dimthyl formamide were 98.79%, 100.99%, 106.04%, 100.85% and 105.39%, while the detection limits were 0.011 0, 0.006 9, 0.006 7, 0.001 6 and 0.076 0 μg / mL, respectively.Conclusion：The method is sensitive and linear, which may be used for the determination of residual solvents in rof umilast.

Rof umilast; Headspace Gas Chromatography; Residual Solvents

TQ46；R917

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.02.010

2016 - 11 - 14

吉林省科技发展计划项目，项目编号：20126043

高海鹰，女，硕士，副教授。研究方向：药物分析。通讯作者E-mail：ghy1998@126.com