高效液相色谱法测定筋骨痛宁胶囊中栀子苷的含量

逯小萌，赵群涛

（1．濮阳市食品药品检验检测中心，河南 濮阳 457000；2．信阳市食品药品检验所，河南 信阳 464000）

高效液相色谱法测定筋骨痛宁胶囊中栀子苷的含量

逯小萌1，赵群涛2

（1．濮阳市食品药品检验检测中心，河南 濮阳 457000；2．信阳市食品药品检验所，河南 信阳 464000）

目的：为完善筋骨痛宁胶囊质量标准，增加该制剂中栀子苷的含量测定项，建立栀子苷含量测定的方法。方法：色谱柱为Waters-C18（4.6 mm×250 mm，5 µm），流动相：乙腈∶水（15∶85），流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长为238 nm。结果：栀子苷进样量在0.021 5～0.538 5 µg与峰面积呈良好线性关系，r＝0.999 7，平均回收率为99.05%，相对标准偏差（RSD）＝0.55%（n＝9）。结论：建立的方法准确度、灵敏度及重复性均较好，可用于筋骨痛宁胶囊中栀子苷含量的测定。

筋骨痛宁胶囊；栀子苷；高效液相色谱法；含量测定

筋骨痛宁胶囊是濮阳市中医医院协定处方［豫药制字：H20120348（濮）］，由大黄、连翘、栀子（炒）、红花、川芎、土鳖虫、乳香（制）、当归、冰片、没药（制）10味中药组成。以上10味，大黄粉碎成细粉，冰片研细过80目筛，备用。连翘、栀子（照清炒法炒至黄褐色）等8味加水煎煮2次，煎煮2 h，合并药液，浓缩至相对密度1.30～1.35（80℃），加入大黄细粉和适量淀粒，混匀，干燥（60～80℃），得干浸膏。干浸膏粉碎为细粉，加入冰片细粉配研，混匀，装入胶囊，即得。功效：清热凉血祛瘀，消肿止痛，用于骨折前期疼痛、肿胀，并促进骨折愈合。原质量标准较简单，无含量测定项，不能准确把握产品内在质量，栀子在本制剂中的作用是清热散结、消肿止痛，栀子苷作为本制剂中栀子的主要活性成分[6]有必要对其进行质量控制。故采用高效液相色谱法并参考有关文献[1-5]，对筋骨痛宁胶囊中栀子苷成分进行了含量测定方法的研究，增加了本制剂栀子的含量测定项。

1 仪器和试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；G1314F型Agilent 1260可变波长检测器（美国安捷伦公司）；Agilent chemstation（美国安捷伦公司）；XS205DU型电子天平（瑞士mettler公司）；UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；KS-500E11型超声仪（宁波海曙科生超声设备有限公司）；0.45 μm微孔滤膜（天津市津腾实验设备有限公司）；栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110749-200714，供含量测定用）；筋骨痛宁胶囊（批号：20160501，20160601，20160901，规格均为0.35 g）；乙腈为进口色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters-C18（4.6 mm×250 mm，5 µm）；流动相：乙腈∶水（15∶85）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：238 nm；进样量：10 µL，理论板数＞5 000。

2.2 溶液的制备

精密称取栀子苷对照品10.77 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，再取10 mL，置50 mL容量瓶中，准确稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取筋骨痛宁胶囊20粒，其内容物置研钵中研匀，取1.05 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。按处方量及工艺制备方法制备缺栀子的阴性样品，依样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验分别精密吸取经微孔滤膜滤过的对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液各10 µL，注入液相色谱仪，按“2.1”色谱条件分析，记录色谱图。由图1可见，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液无干扰，证明方法可行。

2.3.2 线性关系考察精密吸取经微孔滤膜滤过的对照品溶液1，3，5，10，15，20，25 µL注入液相色谱仪，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，

回归方程：Y＝25.759X－4.674 5 r＝0.999 8。

结果表明，栀子苷在0.021 5～0.538 5 µg范围内线性关系良好。

图1 栀子苷含量测定高效液相色谱图

2.3.3 精密度试验精密吸取经微孔滤膜滤过的同一供试品溶液10 µL，注入高效液相色谱仪，重复6次。结果峰面积平均值为259.61，RSD＝0.33%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10，12，24 h进样10 µL，结果峰面积的平均值为259.56，RSD＝0.29%（n＝8）。表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.3.5 重复性试验取同一批样品，按拟定方法平行制备6份供试品溶液，分别进行测定。结果得RSD＝0.38%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验精密量取已知含量的同一批号的样品（批号：20160901，平均装量：0.370 6 g/粒）9份，加入适量对照品依“2.2”项方法配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3个量级的样品溶液，进行测定，计算回收率和RSD值，结果见表1。

表1 栀子苷加样回收实验结果 （n＝9）

2.4 样品含量测定

取样品3批（批号：20160501，20160601，20160901）样品适量，按“2.2”项方法制得供试品溶液，按拟定方法测定样品含量，栀子苷含量分别为0.47 mg/粒，0.49 mg/粒，0.46 mg/粒。

3 讨论

3.1 实验检测波长的选择

取对照品溶液在UV-2550紫外可见分光光度计200～300 nm波长范围内进行扫描，测得在238 nm波长处有最大吸收，故选择238 nm为检测波长。

3.2 流动相及比例的选择

流动相及其比例的选择分别采用了甲醇–水、乙腈–水及甲醇–1%冰醋酸溶液进行实验对比，结果显示用乙腈–水（15∶85）作为流动相，样品主成分峰型良好，与其他苷类分离效果满意，保留时间合理，且阴性对照溶液峰对其无干扰，故选择乙腈–水（15∶85）作为流动相。

3.3 超声溶解时间的选择

超声处理是药品检验中常用的样品处理方法，有着简便、快捷、溶解效果好等特性，本实验同样采用对同一样品，分别超声15，30，45，60 min的方法进行实验对比，结果表明超声30 min即可将栀子苷提取完全。

高效液相色谱法作为测定筋骨痛宁胶囊中栀子苷的方法，操作简单易行，重现性好，准确度高，线性关系良好，可用于筋骨痛宁胶囊中栀子苷含量质量标准的完善。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(2015年版)一部[M].北京:中国医药科技出版社,2015:248.

[2] 赵剑,唐灿,蒲清荣,等.HPLC法测定江西红栀子中栀子苷含量[J].四川中医,2009,27(4):52-53.

[3] 朱晓静,朱文娟,宋粉云,等.RP-HPLC法小儿止咳清肺片中栀子苷的含量[J].海峡药学,2015,27(8):63-65.

[4] 姜勇.HPLC法测定丹栀逍遥散中栀子苷的含量[J].中国药房,2014,25(12):1125-1127.

[5] 胡亚男.清开灵滴丸中栀子苷的HPLC含量测定研究[J].中国实用医药,2004,9(2):252-253.

[6] 陈红,肖永庆,张村,等.栀子炒制过程中栀子苷和藏红花素的含量变化[J].中国中药杂志,2007,32(10):990-992.

本文编辑：鲁守琴

Determination of Geniposide Content in Jingu Tongning Capsules by HPLC

Lu Xiao-meng1, Zhao Qun-tao2
(1. Puyang Food and Drug Inspection and Testing Center, Henan Puyang 457000, China; 2.Xinyang Food and Drug Inspection Institute, Henan Xinyang 464000, China)

Objective：To determine the gardenoside content in jingu tongning capsules, improve the quality standard of this Chinese patent medicine for pain in bones and muscles, and set up the gardenoside content determination method.Methods：The gardenoside content in Jingu Tongning capsules was determined by HPLC using Waters-C18column (4. 6 mm × 250 mm, 5 µm), serving the mixture of acetonitrile and water (15︰85) as mobile phase at a f ow rate of 1. 0 mL / min, a column temperature of 30℃, and a detection wavelength of 238 nm.Results：Geniposide sample load at a range of 0.021 5 ～ 0.538 5 µg showed good linear relationship to the peak area (r＝0.999 7). The average recovery rate was 99.05%, with a RSD of 0.55% (n＝9).Conclusion：To developed method has high accuracy, sensitivity and reproducibility, which may be used for the determination of geniposide content in jingu tongning capsules.

Jingu Tongning Capsules; Geniposide; HPLC; Content Determination

R917；R926

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.02.007

2016 - 09 - 27

逯小萌，男，主管药师。研究方向：药物分析。通讯作者E-mail：lumeng911@163.com