几种杀菌剂对秀珍菇及链孢霉抑菌效果分析

张柳莲 王庆福 黄清铧 张伟伟 陈盈盈 梁磊*

（1 广东省生物工程研究所（广州甘蔗糖业研究所），广东广州510316；2 广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室，广东广州510316；3 广东省植物纤维综合利用工程技术研究开发中心，广东广州510316；4 广州市植物纤维综合利用重点实验室，广东广州510316；5 广东省生物质高值化利用工程实验室，广东广州510316）

秀珍菇（Pleurotus geesteranus Singer）是平菇[1]家族的主要成员，因其营养丰富、口感脆嫩，菇味清香浓郁，深受消费者喜爱[2]。在秀珍菇栽培过程中的主要污染杂菌是链孢霉、绿色木霉、黑曲霉及细菌，其中危害最大的是链孢霉（Neurospora）。链孢霉主要种类有橙色链孢霉、粗糙链孢霉、好食链孢霉、问型链孢霉等，呈绒毛状，白色或灰色，匍匐生长，分枝。分生孢子梗直接从菌丝上长出，与菌丝无明显差异，梗顶端形成分生孢子[3，4]。链孢霉含有大量分生孢子，传染能力极强。链孢霉在自然界分布广泛，其菌丝生长速度与毛霉极为相似，适宜条件下仅2～3 d 即可布满培养料表面，与食用菌的菌丝争夺营养、水分和空间，是目前影响食用菌企业生产最严重的病害之一，严重时甚至会造成绝收，导致企业严重亏损[5]，因而选取高效杀菌剂十分急迫。试验考察多菌灵、甲基托布津、来苏尔消毒液、二氯异氰尿酸纳等四种食用菌生产常用杀菌剂[6～9]对秀珍菇、链孢霉的菌丝生长及孢子萌发抑制情况，以期为秀珍菇生产和链孢霉防治提供了参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料①供试菌株:秀珍菇GX01，保藏于广东省生物工程研究所（广州甘蔗糖业研究所）；链孢霉菌株为N.Cr01，从秀珍菇污染菌袋中分离。

②供试药剂:多菌灵（50%可湿性粉剂，四川农化股份有限公司）、甲基托布津（70%可湿性粉剂，江苏龙灯化学有限公司）、来苏尔消毒液德州安捷高科消毒制品有限公司）、二氯异氰尿酸钠（50%，山西康派伟业生物科技有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 药剂浓度梯度设置 25%多菌灵（质量/体积）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

70%甲基托布津（质量/体积）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

来苏尔消毒液（体积比）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

二氯异氰尿酸纳（质量/体积）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

1.2.2 培养板的准备 采用平板实验法[3]，按浓度梯度依次加入杀菌剂，以不加药组为空白对照。

1.2.3 秀珍菇菌丝生长试验 在无添加杀菌剂的PDA培养上将秀珍菇母种活化，置于25°C培养箱中培养，待菌丝将要长满平板时使用。接种时取直径6 mm的菌块至实验组培养皿中间，每处理重复3次，置25℃下培养，同时接种无添加杀菌剂的PDA平板作为对照。

每隔24 h观察1次，观察菌丝的生长趋势，至其中一种处理菌丝长满培养皿后测量所有处理的菌丝生长长度。按照公式计算菌丝生长速率/（mm·d-1）、不同浓度的4种杀菌剂对菌丝生长的抑制率。菌丝生长速率/（mm·d-1）=（菌丝生长长度-接种的菌片半径）/培养天数。抑制率/%=[（对照菌丝生长速率-杀菌剂处理菌丝生长速率）/对照菌丝生长速率]×100。

1.2.4 链孢霉菌丝生长试验 链孢霉孢子萌发，采用涂布平板法。将从秀珍菇污染菌袋中分离出来链孢霉菌株，在PDA 培养基试管中培养3 d，再将培养好的链孢霉用无菌水洗出，稀释到在10×10倍显微镜下每个视野中含有30～50个分生孢子。在1.2.2培养板上均匀涂布0.1 mL 的链孢霉孢子悬浮液，每处理重复3次。涂布后的玻片平板反置，于25℃下恒温培养，18 h后检查萌发情况，计算孢子萌发数量。

2 结果与分析

2.1 供试药剂对秀珍菇菌丝生长的影响从表1可以看出甲基托布津、来苏尔消毒液对秀珍菇菌丝的生长影响不大，高浓度的多菌灵对秀珍菇有一定的抑制作用，而1000 倍以上就基本上没有抑制作用；秀珍菇菌丝在添加甲基托布津、多菌灵、来苏尔消毒液这三种杀菌剂的培养基中，菌丝厚实洁白，生长势与无添加的对照组相比没有明显差别。但二氯异氰尿酸纳对秀珍菇菌丝的生长有极强的抑制作用，秀珍菇菌丝无法正常生长。

表1 供试四种杀菌剂对秀珍菇生长影响

2.2 链孢霉菌丝平板抑菌试验结果从表2 可以看出甲基托布津、来苏尔消毒液对秀珍菇致病链孢霉菌丝的生长抑制能力较弱，只有高浓度（200 倍）具有较明显的抑制；但是多菌灵和二氯异氰尿酸纳在供试浓度范围内均对链孢霉菌丝生长表现完全抑制作用。

表2 供试四种杀菌剂对链孢霉菌丝生长影响

2.3 供试杀菌剂对链孢霉孢子萌发的影响从表3的数据可以看出:四种杀菌剂中甲基托布津和来苏尔消毒液对链孢霉的孢子萌发的抑制作用比较弱，只有在高浓度（200倍）下，才能完全抑制孢子的萌发；而添加多菌灵和二氯异氰尿酸钠组在供试浓度下链孢霉的孢子均不能萌发，达到完全抑制的效果。

表3 供试四种杀菌剂对链孢霉孢子萌发的影响

3 结论与讨论

试验结果表明，四种杀菌剂在相同的条件下，对秀珍菇菌丝和致病链孢霉、链孢霉孢子分别有不同的影响，多菌灵对链孢霉具有很强的抑制性，可以完全抑制链孢霉菌丝的生长和链孢霉孢子的萌发；同时对秀珍菇菌丝的抑制能力较弱，秀珍菇菌丝在添加多菌灵的培养基中，菌丝的生长厚实致密；甲基托布津和来苏尔消毒液均对秀珍菇菌丝的生长基本没有影响，但两种杀菌剂对链孢霉的抑制能力也较弱，只有在高浓度才具有较明显抑制，在秀珍菇防治链孢霉污染的应用受到限制；二氯异氰尿酸纳对秀珍菇、链孢霉和链孢霉孢子均有很强的抑制性。由此可见多菌灵是适合秀珍菇防霉抗病的高效杀菌剂。