提高病理组织石蜡切片质量的策略研究

2017-03-08韦翠容

临床医药文献杂志(电子版) 2017年27期

关键词：病理切片蜡块石蜡

韦翠容

（贵港市人民医院，广西贵港 537100）

提高病理组织石蜡切片质量的策略研究

韦翠容

（贵港市人民医院，广西贵港 537100）

病理组织学的准确检测结果对于病理诊断具有重要作用，可使得临床治疗得以准确完成。病理组织石蜡切片质量的环节主要包括取材、固定、包埋、染色等，对每个制作环节予以关注及改善，可提高病理组织石蜡切片质量。

病理组织；石蜡切片；质量

病理组织石蜡切片染色应用到患者的临床诊断具有显著意义。石蜡切片通过难以发生脱片现象，当经过染色处理后，能够进行较长时间的保存，如同患者病历，诊断使用后石蜡切片能够予以长时间封存，如此对于医疗事故具有显著预防效果，因此在医院中具有广泛使用价值。对病理切片进行常规制作时，需要对每个操作步骤予以注意。本文对组织固定取材、脱水包埋、染色等各个环节进行病理石蜡切片制作的探讨，解决其中容易产生的问题，采用合理措施提高石蜡切片的质量。

1 固定

自机体组织切下标本后需要及时进行固定，通常需在30 min完成，此乃制片是否获得成功的一个重要环节。讲10%中性缓冲福尔马林作为固定液进行常规使用，而且在使用过程中应确保其足量，一般按照组织体积的5～10倍进行使用，对小标本实施固定处理时，通常持续4～6 h，对大标本进行固定时，通常持续18～24 h或以上。对标本予以固定是为了使得组织能够尽可能的将生前状态保存下来，避免组织因为死亡而发生改变，或是发生自溶。通过对标本的合理固定，在实施显微镜观察时，切片细胞中的微细结构情况可得到较为清楚地检测。我们在具体工作时，往往会遇到多种标本，对其进行固定的具体方法并不完全相同，对大标本固定时，应沿最大剖面予以切开，且需平行进行书页式的多个切面处理，使得固定液可以尽可能扩散到组织中；可通过灌注法对空腔脏器予以有效固定，或是将其剪开予以合理固定，注意需详细记录腔内容物的具体特性及含量[1]。

2 取材

依据脏器具体的取材标准完成每个取材步骤，通常组织块切片范围为（1～1.5）cm×（1～1.5）cm×0.3 cm，注意不可过厚，预防组织无法达到完全处理；但也不可过太薄，导致处理后组织块难以保持平整性。在取材时，应先完成非瘤性标本的采集，然后再对肿瘤性标本进行采集；在取材时，需注意每例标本均需对器械及台面进行流水冲冼，预防标本间受到污染。在取材时所使用的刀应保持锋利性，完成标本采集的整个过程，均需注意操作轻柔，不可对组织进行来回的重力切割。使用内窥镜等进行活检处理的小标本应将其整个进行取材，且通过滤纸予以有效包裹，避免将其弄丢，如有需要则通过点伊红对其进行合理标注。需将组织内存在异物进行有效清理。对大标本取材时应注意在多处进行采集，特别是病变处出现不同的临床特征。肿瘤根治术治疗后，应注意对病变组织与正常组织交汇之处予以标本取材。

3 脱水

目前通常经程序化脱水浸蜡，因此需按照标本数量、具体大小进行脱水机内试剂的更换，避免对脱水效果产生不利影响，导致组织与蜡难以有效相溶，使得组织蜡块制作后不合格。如条件允许则按照组织标本具体情况采用适宜的石蜡，当组织具有较高韧性时，可应用熔点较高的石蜡，当组织较软是，可应用熔点较低的石蜡[2]。

4 包埋

将切片进行包埋处理时，需在包埋模底部将切片完全压平，由此对组织实施观察时，预期切面可处于相同水平面；应先往包埋盒内滴入少量液体石蜡，确保成型蜡块底部能够保持良好的光滑性及平整度，然后在包埋盒底部使得切片观察面完全压平，注意将组织的紧凑性，却需避免其出现重叠情况。包埋组织时所使用的蜡块应迅速凝固，因此需要将已附有液体蜡的包埋盒通过冷冻台进行凝固处理，一般是蜡块需于蜡的大部分或全部处于凝固状态后再将包埋盒移走；如蜡块凝固不够充分，将包埋盒移走后，会使得成型蜡块无法保持良好的底部平整性，若凝固蜡块无较为平整的底部，极易造成小标本修片的浪费。

5 切片

在进行切片环节时，①若切片存在大量的横向褶皱，无法成带，主要是因蜡块温度太高；切片刀变钝；在切片刀边缘有石蜡的粘附，此时应将蜡块再次通过冰袋或冷冻盒进行处理，使得蜡块温度能够下降；将切片刀予以及时更换；将纱布打湿，沿着切片刀的刀口缓慢擦拭。②若切片均在相同部位出现裂缝、裂纹，主要是由于切片刀出现了小缺口；蜡块中存在一定杂质或是有一定硬度的，但体积比较小的似骨（钙）化性组织；在包埋处理时，蜡块凝固无较高的均匀性。针对此情况，应将切片刀进行合理移位或直接换用其他切片刀；通过少量盐酸将含有的钙化性组织予以对应的软化处理；再次将蜡块进行包埋处理。③若切片上存在位置不固定的多道小裂缝或裂纹，主要是因为蜡块保持在高温状态；切片刀未保持较高锋利性。应将蜡块再次置于冰袋或冷冻盒上，促进蜡块稳定的下降；更换切片刀位置或直接使用新的切片刀。④蜡条出现往一侧严重弯曲现象，主要是因为弯曲部位的蜡块均匀性不高，蜡块并未得到较为理想的修整，其边缘具一定的毛糙性等；在弯曲部位所使用的切片刀无较高锋利性。针对此情况，应再次对蜡块进行修整；将切片刀合理移动；对蜡块实施冷冻处理，当其稍变硬的情况出现后也能够使之弯曲度减少。⑤切片无较均匀的厚度，或是将几片进行固定后，能够得到一张比较完整的切片，主要是由于蜡块具有较高的硬度或是太大；使用的蜡块夹持器或是切片刀未保持良好的松紧度；切片机功能异常，使得切片厚度无法保持准确度。针对上述情况，若组织块硬度太高则应再次进行取材包埋处理，当蜡块太大时，可再次进行包埋；应及时将夹持器进行合理调整，使得刀片保持良好松紧度；应注意对机器的修理维护。

6 漂片

在漂片环节，温度在选取时通常比蜡块熔点低10℃。若温度太高往往导致蜡条形成一些小气泡。

7 烤片

在烤片环节，所使用的温度与时间具有具有广泛的选择范围，在37℃烤箱烘烤干1天，一直到75℃烤箱烘烤20min，其中间稳定及时间可合理选取，也应按照目的将烤片所需要的时间及温度进行明确，或按照石蜡熔点予以明确，通常将温度保持在石蜡熔点的10～15℃之上[3]。

8 染色

染色环节应严格按照操作步骤完成。脱蜡处理时应确定彻底性脱除，避免组织、细胞难以被染料充分浸染，不利于着色效果。一个包子各个染色缸具有充足的液体，且保持新鲜，通常新染液可达到较为理想的着色效果，而且可明显减少染色时间；不然会明显延长染色时间。当切片保持均匀、透明状态，则可开展下一步操作。对二甲苯进行清洗时，应及时更换100%酒精，预防其失效导致切片水洗形成乳白色，如此可再次予以脱二甲苯。通过伊红预防过染，不然会导致胞核、胞质难以进行清楚的比较。切片需保持湿性封固状态，中性树胶的浓度及量需保持合理性，不然极易导致外溢或空泡等事件的发生。最后切片需保持较为鲜艳的着色，其红、蓝较为分明，可进行较为清晰地对比。

9 封片

切片通过二甲苯透明后，采用中性树胶进行封固。为了提高切片透明度，预防细胞出现收缩、龟裂现象或是切片形成黑色结晶样小点。因此需对切片予以湿封，避免干燥封片。若处于南方冬春、霉雨季节，在封片时需避免口鼻呼出的气体与切片相接触；若天气潮湿，不可一次性取出多张切片进行待封处理，预防因“还潮"而导致透明不佳，存在云雾状水珠。注意脱水剂应定时更换。封片树胶避免过稀[4]。