利用胚胎发育潜能评估IVF实验室培养系统的稳定性分析

李 丹，郝好英，谢娟珂，宋小兵，殷宝莉，李昊雨，张翠莲

（河南省人民医院生殖中心（郑州大学人民医院生殖中心），河南 郑州 450000）

体外受精-胚胎移植（IVF-ET）已经过了多年发展。胚胎室、促进排卵技术包含IVF、胚胎以及配子冻融、精子选择、胚胎植入前遗传学诊断、胚胎选择等技术也有所完善[1]。当前，IVF技术核心部分也相对成熟。使用何种方式，确保各种技术在相对稳定的环境中完成操作，可保证实验室质量控制系统为每个IVF实验室必须的。结合实际情况，本文对利用胚胎发育潜能评估IVF实验室培养系统的稳定性进行全面分析，现将具体结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

IVF-ET操作过程使用的材料主要为：卵子洗涤皿、离心锥形管、巴斯德吸管、培养皿、圆底试管。

病患选择原则为：选择2016年5月～2017年5月河南省人民医院生殖中心收集的764例常规方案促排卵为研究对象。来源者均为40岁以下，结合批号不同，分为5个小组，对比不同批号之间耗材对于胚胎发育影响情况。长周期数为4569周期，平均进行5.98个周期.

1.2 方法

1.2.1 超排卵方式

使用常规方案完成超排卵工作。在受试者黄体中期，开展垂体调节工作。每天注射达菲林，直至2周，停药后，每天肌肉注射促卵泡发育药物，同时开展超声检测，分析卵泡发育情况。同时检查受试者子宫内膜厚度以及激素分泌情况。当患者最大卵泡直径达到18mm以上后，其余3个卵泡在16mm以上，并且子宫膜厚度在8mm以上时。可停用促卵泡发育药，肌注剂量为10000IU的HCG，并在36h后，于阴道B超监视下进行穿刺取卵。

1.2.2 精液处理方式

对于质量好的精子，使用非连续密度梯度离心法，处理精子。对于经睾丸、附睾穿刺取得以及弱精症、少精症者，使用直接洗涤法处理精子。

1.2.3 胚胎观察

依照IVF方案或者卵胞浆内单精子注射法(ICSI法)完成受精.IVF法：吸取上游精子，与获得液混合，加精浓度为10000条精子/卵，使用移液管，将精液缓慢加入到培养皿中完成受精。不需要早期观察患者，加精后3-4小时捞蛋，拆蛋时间为加精后18～20小时；需早期观察患者，加精后4小时，捞出并拆蛋，镜下观察卵子成熟以及第二极体排出情况。授精后17±1小时在倒置显微镜下观察原核。授精后44±1小时观察D2发育情况，68±1小时观察D3发育情况，并挑选优秀胚胎。

ICSI法：把卵细胞放置在透明质酸酶内，使用巴斯德吸管吹打卵子，以至于脱去颗粒细胞。注意卵子在透明质酸酶中的时间不宜过久，通常在1min以下。防止卵子结构受损。之后将处理好的成熟期卵子开展ICSI处理。完成受精后17±1h，分析卵子受精度，并在44±1以及68±1h内观察胚胎发育情况，并挑选优秀胚胎。

完成受精后第三天，开展胚胎移植。倘若存在剩余胚胎，根据患者签字情况选择是否冷冻保存。

1.2.4 随访

完成移植之后2周，开展HCG检查，查看是否妊娠。40d后，检查胚胎着床情况。

1.3 观察指标

分析两组临床资料情况。

分析两组实验室资料情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS20.0统计学软件进行分析，计数资料采用x2检验，计量资料采用t 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 五组间临床资料比较情况

详细见表1。

表1 五组间临床资料比较情况（±s）

表1 五组间临床资料比较情况（±s）

小组类别 平均移植数（个） 种植率（%） 平均卵泡获取数量（个） 子宫内膜厚度（mm） 平均年龄（岁）1组（n=152） 2.33±0.71 18.03% 9.5±3.1 9.5±2.5 31.50±2.53 2组（n=158） 2.14±0.86 19.66% 8.6±3.0 11.2±2.3 30.88±4.80 3组（n=166） 2.40±0.55 20.50% 9.2±2.9 9.0±1.7 32.72±2.18 4组（n=112） 2.72±0.45 19.20% 9.8±3.6 10.6±3.4 30.86±2.18 5组（n=176） 2.07±0.55 18.62% 10.2±3.3 9.8±2.8 30.88±1.62 P＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

2.2 组间实验室资料比较情况

详细见表2。

表2 组间实验室资料比较情况（%）

3 讨 论

体外受精-胚胎移植为最近几年新兴技术。就我国实际情况来讲，当前IVF实验室成功率仅为40.00%[2]。和以往相比，我国罹患不孕不育人数呈现出了逐年上升的趋势，IVF成功率远远不能满足日益增长的临床需要。

对胚胎发育造成影响的因素主要为实验室湿度、温度、试剂质量、耗材质量以及CO2水平。由此能够看出选择合理的质量控制监测方式，保证胚胎系统稳定性，为开展体外受精-胚胎移植的重要基础。

当前实验室中检测培养方式主要包含人精子存活实验、小鼠胚胎实验等等[3]。小鼠胚胎咋实验为早期实验方式，此项实验极易受到外部因素影响，结果精准性较低。

精子存活实验有着取材方便，操作简单等特征，但其敏感性较低，且对于人胚胎相关性在当前尚存在争议。

以上方式的检测对象均为精子短时间内存活以及发育状况，IVF实验质量要求为该质量体系下胚胎和卵子受精发育全过程潜能[4]。由此可见，使用回顾性分析胚胎发育状况以及构建发育质量控制图，能够更直接的观察IVF实验室质量是否能够达到要求[5]。

本实验中，精子存活实验室为基础，使用胚胎发育潜能对于不同批号间实验耗材稳定性开展回顾性分析。本实验指出，各项实验室标准均符合当前我国IVF实验室质控标准。实验室整体稳定性为判定胚胎发育重要基础。实验室微环境改变情况对于胚胎发育遗传学、生理学会产生重要影响。

上述影响情况均不能从胚胎形态学中发现。由此可见，创建一个相对完善的质量管理体系，为IVF实验室的重要基础。

[1]杜湧瑞,张云山.质量管理系统在体外受精实验室中的应用[C].中华医学会生殖医学分会实验室学组第三次年会.2013.

[2]黄国宁.IVF实验室的管理及质量控制[C].妇科内分泌与辅助生殖论坛论文集. 2011.

[3]Dolinko A V,Farland L V,Kaser D J,et al.National survey on use of time-lapse imaging systems in IVF laboratories[J].Journal of Assisted Reproduction & Genetics,2017,106(3):e318-e318.

[4]Kai-Liang L I,Liu J.Design and Application of an Alarming System for CO_2 Incubator in IVF Laboratory[J].China Medical Devices,2016.

[5]Dolinko A V,Farland L V,Kaser D J,et al.National survey on use of time-lapse imaging systems (TLI-S) in IVF laboratories[C].Fertility and Sterility.2016:e318.