129例肺癌患者中ALK阳性病例临床病理特征研究

葛晓松+刘彦魁+王晓莉

[摘要] 目的 探讨无锡地区肺癌患者中ALK融合基因阳性率。方法 整群选取并回顾性分析2014年9月—2016年7月间该院收治的129例肺癌患者的临床病理资料及Fish检测报告。 结果 有6例患者ALK融合基因阳性，且均为腺癌，阳性率为4.65%（6/129），其中男性4例，女性2例，女性患者在ALK阳性中所占比例为33.3%，临床分期包括II～IV期。结论 该院ALK检测阳性率与国内外报道的阳性率基本一致，对指导肺癌靶向治疗，具有重要意义。

[关键词] ALK；非小细胞肺癌；FISH；靶向治疗

[中图分类号] R563 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）11（a）-0030-03

[Abstract] Objective To investigate the positive rate of ALK fusion gene in patients with lung cancer in Wuxu， China. Methods Group selection and use retrospective study method， we Analyzed 129 cases of lung cancer patients in our hospital with their clinical and pathological data and Fish test report between September 2014 to July 2016. Results There are 6 cases ALK fusion gene-positive patients in 129 cases， the pathological type of the six areall adenocarcinoma， ALK fusion gene positive rate was 4.65%（6/129）， including 4 male and 2 female. Female patients with ALK-positive account for the proportion of 33.3%. The clinical stage of patients include stage II to stage IV. Conclusion The positive rate of ALK fusion gene in our hospital are basically consistent with the reported in the literature. It is essential to guide lung cancer targeted therapy.

[Key words] ALK fusion gene；NSCLC； Target therapy； FISH

肺癌是全世界范圍内最常见的恶性肿瘤，同时，肺癌也是死亡率居首位的恶性肿瘤，其5年生存率不足15%[1-3]。肺癌包括非小细胞肺癌（NSCLC）与小细胞肺癌（SCLC）两大类，近年来，以分子靶向治疗为核心内容的精准化治疗，已经成为肺癌治疗发展最快的领域[4]，代表性药物如易瑞沙对比传统含铂类的联合化疗方案，能显著改善患者生活质量，延长患者生命，且不良反应较小。因此相关位点突变检测研究已经成为肺癌分子靶向治疗的热门方向[5-6]。为评估无锡地区肺癌患者中ALK融合基因阳性率，同时为评价该院Fish检测ALK融合基因的准确性。该研究回顾性分析了该院自2014年9月—2016年7月间利用Fish法检测的129肺癌患者中ALK融合基因表达情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该研究中涉及的患者，均为整群选取就诊无锡市第四人民医院，且经细胞学或病理学明确诊断的肺癌新鲜手术及穿刺组织、石蜡组织标本、胸水脱落细胞，共计129例，其中男性84例，女性45例；肺腺癌117例，肺鳞癌8例，肺大细胞癌3例，肺腺鳞癌1例；患者年龄35～84岁，平均年龄61.5岁；临床分期为I期8例，II期12例，III期26例，IV期82例。所有标本的采集及处理已征求了患者知情同意并获得无锡市第四人民医院伦理委员会批准实施。

1.2 材料与试剂

所有患者ALK融合基因均采用Fish法检测，检测所用试剂盒由基因科技（上海）有限公司提供。

1.3 实验方法

所有患者病理切片均按照试剂盒厂家推荐的说明书进行操作。ALK FISH检测判读标准：高倍镜视野下计数50个肿瘤细胞： 如阳性细胞≥50%即25个，判断患者发生ALK重组； 如阳性细胞<10%即5个，判断患者未发生ALK重组； 如阳性细胞≥10%（5个）且<50%（25个），则重新计数50个肿瘤细胞，统计这100个肿瘤细胞，若其中阳性细胞≥15%，判断患者发生ALK重组；阳性细胞<15%，判断患者未发生ALK重组。

1.4 统计方法

采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析， 计数资料采用百分率（%）表示，采用χ2检验，以 P <0.05 为差异有统计学意义

2 结果

在129例肺癌患者中，有6例患者ALK融合基因突变阳性，阳性率为4.65%，其中男性4例，女性2例，女性在ALK阳性患者中所占比例为33.3%。6人中有4例为IV期，1例为III期，另外1例为II期。所有ALK阳性患者均为肺腺癌，对比文献报道的统计结果，该院ALK阳性率与国内外报道[2]基本一致。值得注意的是，有1例男性患者为EGFR 20外显子突变及ALK融合基因双阳性。

3 讨论

Anaplastic lymphoma kinase（ALK），即人类间变性淋巴瘤激酶基因，通常编码一种只在一定的神经元细胞中表达的酪氨酸激酶，1994年首次在间变性大细胞淋巴瘤中被发现而命名。ALK作为一种酪氨酸激酶受体，在细胞生理活动中的许多环节包括细胞凋亡、细胞增殖及细胞周期等发挥重要的调控作用，其异常表达将导致包括肺癌、淋巴瘤等在内的一系列疾病的发生。ALK的异常形式包括突变、扩增和融合基因的产生，其中最常见的是融合基因的产生。2007年nature杂志首次报道，EML4与ALK基因在约5%的NSCLC患者中发生融合突变，这2个基因均位于人2号染色体，通过融合形成EML4-ALK基因，其编码的蛋白产物通过激活PI3K-AKT，MAPK 和 JAK-STAT 途径，导致肿瘤的发生发展，在NSCLC中发挥重要的驱动作用。事实上，在多种肿瘤中，均可检测到ALK基因融合，其融合的基因和形式多种多样。研究表明通过小分子抑制剂可阻断ALK活化，进而抑制肿瘤细胞的增殖[7]。自从2007年首次报道了非小细胞肺癌（NSCLC）中ALK融合基因是肺癌驱动基因以后，仅过了3年时间，针对ALK融合基因的小分子靶向药物克唑替尼就研发成功，并在临床试验显示出强大抗肿瘤活性。与传统化疗相比，ALK阳性肺癌患者在服用克唑替尼后，其临床客观缓解率达到64%，疾病控制率接近90%，且不良反应非常少，包括常见的恶性、呕吐等，患者容易耐受。因此2011年8月克唑替尼被FDA快速批准，用于局部晚期或转移性ALK阳性NSCLC的一线治疗。目前已有了ALK抑制剂，包括第1代的克唑替尼，第2代的色瑞替尼（Ceritinib）、Alectinib以及正在进行临床试验的第三代Lorlatinib ，均显示出了强大的抗肿瘤活性。

目前检测ALK融合基因的手段主要包括3种方法：荧光原位杂交（FISH）、免疫组化（IHC）和聚合酶链反应（PCR），其中最常用的为FISH及IHC法。FISH主要用来检测DNA，与其他2种方法相比，FISH法检测的基因组DNA相对稳定，IHC受人为因素影响较大，结果偏主观性。PCR法虽敏感性及特异性均较高，但样本容易受到污染，从而产生假阳性结果。文献报[6]ALK融合基因阳性占非小细胞肺癌比例约为3%～6%，预测中国约每年约有超过3万例新发EML4-ALK阳性肺癌患者。

该研究中，通过回顾性分析，首次报道了无锡地区ALK融合基因阳性患者占非小细胞肺癌比例为4.65%，且均为腺癌，Cappuzzo及Rossi等人[7-8]报道EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌中的阳性率约为3%～6%，与之前文献报道一致。但是在阳性人群中，我们的结果中，女性所占比例与报道相比偏低，可能是本回顾性研究中样本总量偏少，导致阳性标本偏少引起的误差。将会继续进行ALK融合基因阳性患者的统计工作，扩大样本总量。同时，检测的标本包括石蜡切片、富集胸水脱落细胞、穿刺标本、手术标本等多种来源，证实多种临床标本均可用于ALK融合基因的检测。在检测阳性的6例患者中，進行了跟踪随访，其中有2例口服了克唑替尼靶向治疗，无进展生存期均接近12个月，且胸闷、气喘等症状均得到了明显改善，另外4例目前进行传统化疗，有可能在二线治疗时，考虑行克唑替尼或色瑞替尼靶向治疗。

值得注意的是，在6例ALK融合突变阳性的患者中，有1例为ALK和EGFR双突变。该患者为EGFR 20外显子插入突变，未进行EGFR-TKI治疗，在培美曲塞单药维持治疗进展后，直接开始口服克唑替尼，患者一般情况及症状明显改善，病灶缩小。以往研究认为ALK融合突变和EGFR基因突变相互排斥，即这2种突变不会发生在同一病人体内。事实上，近年来陆续有文献报道人群中ALK与EGFR双阳性突变发生率并不低，2014 年 Yang报道人群中 ALK 融合基因合并EGFR基因突变为18.6%（12/70）[10-12]，该研究结果与此接近。

综上所述，ALK融合突变是NSCLC中重要的驱动基因，文献报道NSCLC中发生率约为5%，回顾性分析结果表明，在该院非小细胞肺癌患者中，ALK融合基因检测阳性率为4.65%，用于指导临床靶向治疗用药，提高了患者的生存时间，改善了患者的生活质量，值得进一步推广。

[参考文献]

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[2] Torre LA， Bray F， Siegel RL， et al.Global cancer statistics， 2012[J]. CA Cancer J Clin，2015，65（2）：87-108.

[3] 陈万青，张思维，曾红梅，等.中国2010年恶性肿瘤发病与死亡[J].中国肿瘤，2014，23（1）：1-10.

[4] 韦丽丽，于忠和. EML4-ALK融合基因在肺癌转移灶中的表达及临床特点[J].中国医药导报，2015，12（14）：4-7.

[5] 朱翔，李红威，曹宝山， 等.525例肺癌中ALK阳性病例临床病理特征研究及检测方法探讨[J].中国肺癌杂志，2014，17（3）：226-232.

[6] 谢强，陈群，林清华，等. ALK阳性晚期非小细胞肺癌临床病理分析[J].临床与实验病理学杂志，2014，30（10）：1135-1138.

[7] Cafarotti S， Lococo F， Froesh P， et al.Target Therapy in Lung Cancer[J].Adv Exp Med Biol，2016，893：127-136.

[8] Rossi A. Alectinib for ALK-positive non-small-cell lung cancer[J].Expert Rev Clin Pharmacol，2016，9（8）：1005-1113.

（收稿日期：2016-08-05）