MiR—208在急性冠脉综合征患者血清中的表达及与炎性因子的相关性研究

吕晋琳+尹雪艳+吴新华+李利华+董榆+张雷+罗文娟

[摘要] 目的 探讨急性冠脉综合征患者外周血微小RNA-208（miR-208）的表达及其与炎性因子表达水平的关系。方法 整群选取2014年4月—2015年5月大理大学附属医院心血管内科收治的138例ACS患者血清临床资料，以 52名健康体检者为对照组。分析miR-208在ACS患者血清中的表达及其与炎性因子TNF-α、CRP、IL -6的关系。结果 与对照组相比，miR-208在ACS患者血清中的表达升高2-ΔΔCt：（24.28±3.85） vs （7.83±1.54） P<0.001，并且miRNA-208表达的升高和炎症因子分泌呈明显正相关TNF-α （r=0.612）、CRP （r=0.443），IL -6 （r=0.543） P<0.05。 结论MiR-208表达在AMI患者血清中上调，并与炎症相关，其可能成为ACS新的潜在诊疗靶点。

[关键词] 急性冠脉综合征；miR-208；炎性因子

[中图分类号] R541 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）11（a）-0008-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of RNA-208 （miR-208） in peripheral blood of patients with acute coronary syndrome and its relationship with the expression of inflammatory cytokines. Methods Group selection the clinical data of patients with ACS admitted to Department of Cardiovascular Medicine，The Affiliated Hospital of Dali University from April 2014 to May 2015 were enrolled.138 ACS patients and 52 healthy persons with matched age and gender served as healthy control group. The levels of serum miRNA-208， IL-6， CRP， TNF-αin all the subjects were recorded. The correlation between serum miR-208 and the inflammatory cytokines was analyzed. Results Compared with control group， miR-208 expression in ACS patients was higher （2-ΔΔCt （24.28±3.85） vs （7.83±1.54）， P<0.001. MiR-208 expression was associated with inflammation factorsTNF-α （r=0.612），CRP （r=0.443），IL -6 （r=0.543）， P<0.05. Conclusion Upregulated serum miR-208 is involved in the pathophysiology of ACS. MiR-208 may be used as a reference to predict， diagnosis and treat ACS.

[Key words] Acute coronary syndrome ； miRNA-208； Inflammatory factor

動脉粥样硬化（atherosclerosis，As）引起的心脑血管疾病发病率渐呈上升趋势，已成为危害人类健康的主要杀手[1]。对其发病机制，多数学者支持炎症反应学说，认为血管壁的慢性炎症是导致As发生发展的重要因素。在动脉粥样硬化性疾病中，急性冠脉综合征（acute coronary syndrome， ACS）是一组由急性心肌缺血引起的综合征，炎症因子激活在其中发挥重要的作用[2]。MiRNAs是一类内源性、非编码小RNA序列。MiRNA基因先在细胞核内转录出初始miRNA，再经Drosha- DGCR8复合物剪切为60～80碱基长度带有茎-环结构的miRNA[3]。它们主要通过与蛋白编码基因外显子区或基因信使RNA（mRNA）的种子序列互补结合，致靶基因降解和/或翻译抑制[4]。近年来，随着分子生物学及高通量技术的发展，miRNA 在As中的作用逐渐引起人们重视。该研究通过检测2014 年4 月—2015年5月大理大学附属医院心血管内科收治的138 例ACS患者血清miR-208表达水平，探讨其与炎症因子相互关系，以期为ACS诊疗提供新的靶点，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

整群选取大理大学附属医院心血管内科收治的138 例ACS患者，其中急性心肌梗死（AMI）42例，不稳定型心绞痛（UA）96例，所有患者均行冠状动脉造影检查，以 52名健康体检者为对照组。排除其他心脏疾病，合并严重的肝肾功能不全，其他慢性炎症，卒中，恶性肿瘤，风湿性疾病，近期应用抑炎症药物。该研究共纳入42例AMI患者，其中男性34例，女性8例。96例UA患者，其中男性67例，女性27例。ACS组年龄（57.1±16.2）岁。52名健康体检者作为对照组，其中男性38名，女性14名，年龄（59.7±12.4）岁。各组患者性别、年龄差异无统计学意义。

1.2 研究方法

1.2.1 血样采集和qRT-PCR ACS患者在发病24 h内从前臂静脉采取空腹血标本，对照组于空腹体检时采血3 mL，肝素钠抗凝。利用EastepTM试剂盒提取血清总RNA。用Hairpin-itTMmiRNA qRT-PCR试剂盒，按说明书步骤进行qRT-PCR反应。ABI7 500实时定量PCR仪测定并用2-ΔΔCt计算其相对表达量。

1.2.3 酶聯免疫吸附试验（ELISA）检测血清炎症因子水平 ELISA试剂盒用于肿瘤坏死因子（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）、白介素6（IL -6）检测，按说明书进行操作。

1.3 统计方法

用SPSS 17.0 统计学软件进行统计学分析， 计量资料均以均数±标准差（x±s）表示，均数比较用t检验或单因素方差分析，用线性相关分析炎症因子与miRNA-208的关系，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床特征

该研究共纳入42例AMI患者，其中男性34例，女性8例。96例UA患者，其中男性67例，女性27例。52名健康体检者作为对照组，其中男性38例，女性14例。各组患者性别、年龄及甘油三酯（TG）水平差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比，AMI组血糖、收缩压、舒张压、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（HDL-C）及低密度脂蛋白（LDL-C），UA组收缩压、HDL-C及LDL-C水平差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 外周血miR-208 的表达水平分析

如图1所示，AMI及UA患者外周血miR-208水平均较健康对照组（CTL）升高，见图1。

2.3 miR-208 与炎性因子的相关分析

与对照组相比，ACS组血清TNF-α、CRP、IL -6水平升高。MiR-208与TNF-α （r=0.612）、CRP （r=0.443），IL -6 （r=0.543）呈显著正相关，详见表2。

3 讨论

ACS 是由于动脉粥样硬化斑块破裂或糜烂，伴有不同程度血栓形成、血管痉挛及栓塞引起心肌急性缺血所导致的一组综合征。诸多研究证明炎症是ACS的关键，IL、TNF、CRP等因子均参与了ACS 的病理过程。炎性因子水平升高，可促进炎症反应及As斑块形成，与病情严重程度明显相关。近年来研究发现，miRNAs在调控心血管系统发育和功能上起重要作用，As患者血管中有44种miRNAs上调57种miRNAs下调[5]，并且miRNAs可调控As进程中的炎症通路。例如，保护性的载脂蛋白apoE的作用机制之一即增加单核-巨噬细胞内miR-146水平而抑制NF-κB炎症通路，miR-155可抑制了TNF-α刺激内皮细胞中NF-κB的表达，对炎性反应进行负向调控[6]。大鼠颈动脉球囊损伤模型中，在血管细胞中检测了140种miRNA，损伤后约有110种miRNA发生异常表达，其中miR-208上调高达40多倍[7]。MiR-208在损伤管壁中表达升高，敲除miR-208可抑制血管平滑肌细胞增生、促进细胞凋亡，由此显著抑制新生内膜形成[8]。既往研究认为miR-208可能参与了动脉粥样硬化的进程，但对其作用机制仍缺乏相关报道[9]。该研究表明，与对照组相比miR-208在ACS患者血清中表达增加超过20倍。在ACS患者血浆中炎性因子的表达分别为TNF-α（37.2±4.3）ng/L，CRP（17.6±4.3）mg/L ，IL-6（25.6±5.7）ng/L，均较对照组明显升高，并且与miR-208水平呈正相关。上述实验与Huang X等[9]的体外研究结果相符，并且进一步从临床角度证明了血清miR-208 可能作用于炎症信号通路的关键环节， 调控炎症因子的表达，其可能作为ACS的一种潜在生物学标志物用于临床诊断和病情判断。

作为新的特异性基因调节小分子，miRNA不仅有助阐明疾病病理生理过程及发病机制，在临床诊疗中无疑也具有重要的应用前景。MiR- 208其对心肌缺血损伤反应的敏感性及特异性可能成为利于早期及时诊断AMI 的生物学标志物及新的治疗靶点。

[参考文献]

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（收稿日期：2016-08-05）