电针“胰俞”穴对2型糖尿病大鼠肝损伤后转氨酶的影响*

王跃颖，李 瑞，田环环，曹昺焱，马艳佳，贾 宁，胡晓刚

(北京中医药大学，北京 100029)

电针“胰俞”穴对2型糖尿病大鼠肝损伤后转氨酶的影响*

王跃颖，李 瑞△，田环环，曹昺焱，马艳佳，贾 宁，胡晓刚

(北京中医药大学，北京 100029)

目的：通过观察电针“胰俞”穴对2型糖尿病大鼠血糖、血脂及肝脏相关转氨酶的影响，探究电针“胰俞”是否对2型糖尿病大鼠肝细胞具有保护作用。方法：取40只健康雄性SD大鼠，其中8只作为空白对照组，常规饲料喂养；其余32只采用高糖高脂饲料喂养合并腹腔注射链脲佐霉素，制备2型糖尿病大鼠模型。造模成功后随机分组：模型组、胰俞组、格列美脲组、非穴组，每组8只。胰俞组、非穴组分别针刺胰俞穴、非穴，进行电针刺激；格列美脲组以格列美脲溶液灌胃。定期检测各组体重和血糖。干预4周后，腹主动脉取血致死，离心取血清，以自动生化分析仪检测各组甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HOL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷氨酰转移酶(GGT)。结果：电针胰俞穴可快速调节2型糖尿病大鼠升高的血糖，其长期疗效也较为可靠，且优于非穴组。同时，电针胰俞穴也可快速抑制2型糖尿病大鼠体重下降，但随着病程的进展，其调节体重的作用并不显著。而对于血脂各项指标而言，电针胰俞穴可有效降低2型糖尿病大鼠升高的TC、TG、LDL-C水平，且在调节TG、LDL-C上优于格列美脲灌胃；而在调节TC、LDL-C上优于电针非穴。此外，电针胰俞穴可有效降低2型糖尿病大鼠血清中升高的AST、ALT、GGT水平，且其作用优于电针非穴。结论：电针胰俞穴能有效调节2型糖尿病大鼠血糖，显著降低TC、TG、LDL-C水平，并进一步保护肝细胞。

电针;胰俞穴;2型糖尿病;肝损伤;转氨酶

2型糖尿病是一种糖代谢紊乱性疾病[1]，其特征为高血糖，而肝脏是人体葡萄糖贮存、转化、代谢的重要器官，因此糖尿病患者血糖控制不良可引起肝功能、肝组织发生改变，而肝功能受损时,糖代谢也受到影响,形成恶性循环，使糖尿病患者出现肝损伤的现象，进而出现糖尿病性肝病(DLD)。糖尿病肝损伤的早期临床症状较少，未被重视，但近几年随着糖尿病患者终末期肝病的死亡率增加，糖尿病肝损伤得到了人们的重视和研究。

转氨酶是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶，转氨酶的种类很多。其中，谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)参与的转氨基反应是机体内蛋白质、脂肪、碳水化合物三者相互转化过程中的重要环节[2]。而谷氨酰转移酶(GGT)主要在肝内胆管上皮细胞合成，由胆道排泌，故长期以来，血清中 GGT 的升高被认为主要与肝、胆疾患和酒精中毒有关，是胆汁淤积和肝细胞坏死相关疾病的生物性标志，但近期有学者发现：血清GGT的升高还与糖尿病、胰岛素抵抗、代谢综合征等有关[3]。

自古即有针灸治疗糖尿病(“消渴”)的相关记载，而近现代对于针灸治疗糖尿病的临床、实验研究也证实了其确切的疗效，且针灸治疗糖尿病已得到WHO的认可及推荐[4]。“胰俞”穴即是“胃脘下俞”穴，是治疗糖尿病的经验效穴，其位于胰腺同神经节段内，现代研究也证实了其对糖尿病的有效调节作用[5-8]，但其对糖尿病期间肝脏的功能影响少见报道。本实验通过观察电针“胰俞”穴对2型糖尿病大鼠血糖、血脂及肝脏相关转氨酶的影响，探究电针“胰俞”是否对2型糖尿病大鼠肝细胞具有保护作用。

1 材料与方法

1.1 动物及动物饲料

实验动物为清洁级雄性SD大鼠40只，体质量155～200 g，购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司，许可证号：SCXK(京)2011-004。饲养于空气流通、相对湿度60%、室温23℃、12 h/12 h循环光照/黑暗条件下，自由饮食饮水。饲料购自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK(京)2014-0008。

1.2 模型制备

适应性饲养1周后，随机取8只为空白组，给予普通饲料喂养。其余32只大鼠作为造模组，以高糖高脂饲料(含70%普通饲料、10%猪油、10%蔗糖、10%蛋黄粉)喂养50天后，以35 mg/kg质量比一次性腹腔注射2%的链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)溶液(STZ溶于PH为4.2的0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，注射需在30 min内结束，且越快越好，操作均在冰浴中进行)，72 h后测随机血糖，2周后行口服葡萄糖耐量实验(Oral Glucose Tolerance Test，OGTT)。成模标准：随机血糖≥16.7 mmol/L，OGTT实验2 h血糖≥11.1 mol/L。

1.3 动物分组及干预

模型制备成功后造模组大鼠随机分为模型组、胰俞组、非穴组和格列美脲组，每组各8只，此后以普通饲料喂养。各组干预如下。

空白组和模型组：套于鼠套固定20 min，不干预。

胰俞组：套于鼠套固定，使用中研太和无菌针灸针(Lot：031426)0.16 mm×7 mm斜刺双侧“胰俞”穴(位置：第8胸椎棘突下旁开7 mm)，针刺深度4 mm左右[4]。大鼠后足部黏贴以0.9%氯化钠溶液浸润的棉球，与每侧穴位同侧相连形成电针回路，电针参数：连续波，2 Hz，2 mA，20 min(英迪KWD-808电针)。

非穴组：同步同法固定，并直刺双侧非穴(位置：“环跳”和“后三里”连线的中点)，双侧接通电针形成回路，深度及电针参数同上。

格列美脲组:将化学纯格列美脲以双蒸水配成0.2 mg/ml溶液，将大鼠按体重10 ml/kg灌胃给药，与电针干预同步。

各组干预均为1次/天，6次/周，共4周。

1.4 指标检测

①大鼠体重、空腹血糖检测：干预前及干预后每7天进行1次体重称量和空腹血糖检测。以大鼠尾尖取血，使用罗氏血糖仪(Ser.No.GC12723032，试纸LOT24626232)测空腹血糖。②血脂及转氨酶检测：末次干预结束后，各组大鼠过夜禁食。第2日实施麻醉后，腹主动脉取血致死，血液于室温静置30min凝固后，离心(3000 rpm，4℃，15 min)取血清，以自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和谷氨酰转移酶(GGT)，指标检测部分由北京华英生物技术有限公司完成。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 各组大鼠血糖情况

表1 各组大鼠血糖情况

注：与空白组比较,△P<0.05；与模型组比较,▲P<0.05；与胰俞组比较,○P<0.05；与格列组比较,●P<0.05

由表1可知：干预前模型组、胰俞组、格列美脲组及非穴组血糖水平两两比较无显著性差异，即各组之间具有可比性。模型组各时间点血糖均高于空白组(P<0.05)。干预第1周末，与模型组相比，胰俞组的血糖显著降低(P<0.05)；格列美脲组和非穴组与之无显著差异;3个干预组之间血糖两两比较无显著差异。干预第2周末，模型组及3个干预组之间血糖水平无显著性差异。干预3周末，胰俞组及格列美脲组血糖水平显著低于模型组(P<0.05)；非穴组与之无显著性差异;而非穴组血糖水平显著高于胰俞组及格列美脲组(P<0.05)。干预4周末，各干预组血糖水平均显著低于模型组(P<0.05)，电针胰俞组显著低于非穴组(P<0.05)。

2.2 各组大鼠体重情况

表2 各组大鼠体重情况

注：与空白组比较,△P<0.05；与模型组比较,▲P<0.05；与胰俞组比较,○P<0.05；与格列组比较,●P<0.05

由表2可知:干预前各组体重比较，差异均无统计学意义(P>0.05),模型组及各干预组之间具有可比性。模型组干预期间各时间点体重均显著低于空白组(P<0.05)。干预第1周末，胰俞组体重显著高于模型组及其它干预组(P<0.05)；格列美脲组和非穴组与模型组比较，无显著性差异。干预第2周末胰俞组显著高于其他2个干预组(P<0.05)。干预第3周末至干预第4周末模型组及3干预组之间比较，差异无统计学意义。

2.3 各组大鼠血脂各指标比较

表3 各组大鼠血脂各指标比较

注：与空白组比较,△P<0.05；与模型组比较,▲P<0.05；与胰俞组比较,○P<0.05；与格列组比较,●P<0.05

由表3可知：模型组大鼠的TC、LDL-C、TG水平均显著高于空白组(P<0.05)，HDL-C显著低于空白组(P<0.05)，差异有统计学意义。与模型组相比：胰俞组TC、LDL-C、TG水平均显著降低(P<0.05)，HDL-C水平显著升高(P<0.05)；格列美脲组TC、LDL-C、TG水平亦均显著降低(P<0.05)，HDL-C水平与之差异无统计学意义。非穴组LDL-C、TG水平显著降低(P<0.05)，TC、HDL-C水平与之差异无统计学意义。与胰俞组相比：格列美脲组TC、LDL-C、TG水平显著升高(P<0.05)，HDL-C水平与之差异无统计学意义；非穴组TC、LDL-C水平显著升高(P<0.05)，HDL-C、TG水平与之差异无统计学意义。与格列美脲组相比：非穴组LDL-C、TG水平显著降低(P<0.05)，而TG、HOL-C水平与之无显著差异。

2.4 各组大鼠各转氨酶指标比较

表4 各组大鼠各转氨酶指标比较±s)

注：与空白组比较,△P<0.05；与模型组比较,▲P<0.05；与胰俞组比较,○P<0.05；与格列组比较,●P<0.05

由表4可知：模型组大鼠的AST、ALT、GGT水平均显著高于空白组(P<0.05)，差异有统计学意义。与模型组相比，胰俞组AST、ALT、GGT水平均显著降低(P<0.05)；格列美脲组AST、ALT显著降低(P<0.05)，GGT降低，但差异无统计学意义；非穴组AST、ALT、GGT水平亦有降低，但差异无统计学意义。与电针胰俞组相比，非穴组AST、ALT、GGT水平均显著升高(P<0.05)；格列美脲组AST、ALT、GGT水平与之差异无统计学意义。与格列美脲组相比，非穴组AST、ALT水平均显著升高(P<0.05)，GGT水平与之差异无统计学意义。

3 讨论

糖尿病是继心血管疾病、肿瘤之后威胁人类健康的第三大非传染性疾病，其中2型糖尿病占90%[9]。糖尿病肝病患者长期处于高血糖状态下，造成肝糖原大量沉积，使载脂蛋白糖基化，过量的糖被转化为脂质贮存，加重肝脏脂肪变性，是造成糖尿病肝损伤的重要原因，糖尿病患者不良的血糖控制造成肝功能的异常。相反，当肝功能损伤时,糖的代谢也受到影响,形成恶性循环，因此肝脏与血糖关系十分密切[10]。谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)都分布在干细胞中，其中谷丙转氨酶(ALT)主要存在于肝细胞浆内，在正常情况下其细胞内浓度远远高于血清中浓度，而只要有1%的肝细胞出现坏死，血清中该酶含量就会增高1倍。因此，谷丙转氨酶被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。谷草转氨酶(AST)主要存在于肝脏细胞线粒体内，当肝脏发生严重坏死或破坏时，就会引起AST在血清中浓度偏高[11]。故ALT、AST在临床中是诊断肝病最普遍的检测项目[12-13]。血清 GGT 的升高，长期以来被用作肝胆疾患诊断及鉴别诊断的1项指标[3],是临床用于反应肝细胞功能的指标之一[14]。有文献报道[15]，当脂肪变性越重，GGT升高越明显，其升高程度与肝脂肪变性呈正相关，并对不同脂肪变性程度的脂肪性肝病具有较高的诊断价值。

糖尿病属中医的“消渴病”范畴。《千金翼方》首载“消渴喉咙干，灸胃管下俞”，“胃管下俞”即“胰俞”， 位于第8胸椎棘突下旁开1.5寸处，膈俞与肝俞之间，属经外奇穴，是治疗糖尿病的重要穴位。古代医家常选用针刺胰俞或梅花针叩击胸椎T8～T10两侧部位，从阳引阴，使阴阳平衡，对阴虚内热的消渴有良好的治疗作用[16-17]。本实验研究结果显示：电针胰俞穴可快速调节2型糖尿病大鼠升高的血糖，其长期疗效也较为可靠，且优于电针非穴组。同时，电针胰俞穴也可快速抑制2型糖尿病大鼠体重下降，但随着病程的进展，其调节体重的作用并不显著。而对于血脂各项指标而言，电针胰俞穴可有效降低2型糖尿病大鼠升高的TC、TG、LDL-C水平，且在调节TG、LDL-C上优于格列美脲灌胃；而在调节TC、LDL-C上优于电针非穴。此外，电针胰俞穴可有效降低2型糖尿病大鼠血清中升高的AST、ALT、GGT水平，且其作用优于电针非穴。

综上所述：电针胰俞穴能有效调节2型糖尿病大鼠血糖，显著降低TC、TG、LDL-C水平，并进一步保护肝细胞。而其具体机制有待进一步研究。

本实验不足之处：未进行肝脏组织损伤的病理分析，有待进一步实验完善。

[1] 赵敬军.针刺对2型糖尿病的干预机制研究进展[J].针灸临床杂志,2015,31(7):93-96

[2] 吕晓玲,张文娟,周艳华,等.L-阿拉伯糖对2型糖尿病大鼠肝损伤的干预作用[J].天津科技大学学报,2013(1):1-4

[3] 李芸,白燕,刘生梅,等.血清γ-谷氨酰转移酶用于2型糖尿病早期诊断的分析[J].中国美容医学,2012(10):96-97

[4] 曹昺焱,李瑞,田环环,等.电针胃脘下俞穴降糖作用研究[J].中华中医药杂志,2016(6):2274-2276

[5] 孙志,韩海荣,马丽,等.针刺对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞形态学影响[J].中华中医药杂志,2010,25(12):1971-1974

[6] 李盛明.针灸治疗2型糖尿病68例临床观察[J].吉林医学,2010,31(14):2002

[7] 田环环.同神经节段“胰俞”“脾俞”对2型糖尿病大鼠作用机制的实验研究[D].北京:北京中医药大学,2014

[8] 高珊,李瑞,田环环.胃脘下俞穴的古今研究[J].上海针灸杂志,2014(12):1163-1166

[9] 刘舟,李月碧,张卫华,等.黄连温胆汤对2型糖尿病大鼠肝损伤的保护作用[J].现代中西医结合杂志,2016(2):119-151

[10] 邓婷婷.糖尿病性肝病26例临床研究[D].南宁：广西医科大学,2007

[11] 段妍慧,富丽娜,黄毅,等.转Bar基因稻谷对小鼠肝功能若干参数的影响[J].湖南农业科学,2012(11):4-7

[12] 廖云飞,陈璐璐,曾天舒,等.代谢综合征患者血清丙氨酸转氨酶相关因素分析[J].中国糖尿病杂志,2008(3):147-149

[13] 吕宁,单万水,黄慧谦.检测丙氨酸转氨酶及天门冬氨酸转氨酶在病毒性肝炎中的临床意义[J].中国现代药物应用,2009(24):73-74

[14] 蔡木发,高凤,符小芳,等.肝脏疾病血清AFU与ALT、AST、GGT相关性分析[J].吉林医学,2015(15):3244-3245

[15] 杜红梅,陈兆云,古丽娜尔·沙丁.血清5′-NT、TBA及GGT检测在肝脏疾病中的临床价值[J].安徽医药,2014(6):1082-1084

[16] 杨甲三.针灸腧穴学[M].上海:上海科学技术出版社,1985:505

[17] 陈佑邦.中国针灸治疗学[M].2版.北京:中国科学技术出版社,1990:660

Effect of Electroacupuncture at “Yishu”(EX-B3) Point on Post-Liver Injury Transaminases in Rats with Type 2 Diabetes Mellitus

WANG Yue-ying,LI Rui△,TIAN Huan-huan,CAO Bing-yan,MA Yan-jia，JIA Ning，HU Xiao-gang

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective：The protective effect of electroacupuncture at “Yishu” point on liver cells of T2DM rats was explored by observing its effect on blood glucose, blood lipids and liver transaminases in T2DM rats.Methods：40 healthy male SD rats were selected, including 8 rats as the blank controls feeding with conventional diet, and the rest 32 rats feeding with high-fat, high-sucrose diet and receiving intraperitoneal injection of streptozotocin to prepare the rat models of T2DM. After sucessful modeling, animals were randomly divided into model group, Yishu electroacupuncture group, glimepiride group and Fei-acupuncture point stimulation group,including 8 rats in each group. The Yishu electroacupuncture group and Fei-acupuncture point stimulation group received electroacupuncture stimulation at Yishu point and Fei point, respectively. The glimepiride group was given glimepiride solution by intragastric gavage. Weight and blood glucose were regularly measured for each group. Following 4 weeks of intervention, rats in each group were sacrificed by drawing blood from abdominal aorta, and serum was separated by centrifuge for the measurement of TG, TC, HDL, LDL, AST, ALT, and GGT by using automatic biochemical analyzer.Results：Electroacupuncture at Yishu point could quickly regulate the elevated blood glucose in T2DM rats with reliable long-term efficacy,which was better than the therapy in the Fei-acupuncture point stimulation group. In addition, electroacupuncture at Yishu point could also quickly suppress weight loss in T2DM rats. However, its weight regulatory role became less significant. With regard to various blood lipid indicators, electroacupuncture at Yishu point effectively suppressed the elevated TC, TG and LDL-C in T2DM rats, and was superior to glimepiride according to regulating TG and LDL-C, and superior to Fei-acupuncture point stimulation according to regulating TC and LDL-C. Moreover, electroacupuncture at Yishu point effectively suppressed the elevated serum AST, ALT and GGT,with a better effect than that of Fei-acupuncture point stimulation.Conclusion：In T2DM rats, electroacupuncture at Yishu point can effectively regulate blood glucose, significantly suppress TC, TG and LDL-C, and further protect liver cells.

Electro-acupuncture;EX-B3;T2DM;Liver damage;Transaminase

教育部科学技术研究重大项目,编号:313010。

王跃颖(1990-)，女，2014级针灸推拿专业硕士研究生。

△通讯作者：李瑞(1963-)，男，主任医师,教授，主要从事针灸推拿研究工作。

R246.1

A

1005-0779(2017)02-0041-04

2016-10-15