地黄饮子治疗对脑缺血大鼠行为学评分的影响

刘恒涛

地黄饮子治疗对脑缺血大鼠行为学评分的影响

刘恒涛

目的 观察地黄饮子治疗对脑缺血大鼠的行为学评分的影响。方法 选取清洁级大鼠80只，随机分为地黄饮子组、尼莫地平组、缺血组、对照组，各20只。10%水合氯醛麻醉，暴露并钳夹双侧颈总动脉40 min，造模使大鼠急性脑缺血。地黄饮子组：造模后每日灌服地黄饮子汤36 g/kg。尼莫地平组：造模后每日灌服尼莫地平12.5 mg/kg，缺血组：造模后每日灌服生理盐水1次。对照组：正常饮食。连续3周。分别在实验的第1周、第2周、第3周检测Longa评分、Berderson评分和脑脑梗死面积。结果 对照组Longa评分、Berderson评分和梗死面积为0分。地黄饮子组Longa评分、Berderson评分和脑梗死面积均明显低于缺血组，差异有统计学意义(P<0.05)，尼莫地平组Longa评分、Berderson评分和梗死面积与缺血组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 地黄饮子能够修复脑缺血再灌注损伤，抗氧化作用，减少细胞凋亡，修复神经元，提高学习记忆功能。

脑缺血；地黄饮子；行为学；中风

脑缺血在临床上较为常见，若控制不好，发展为脑缺血性中风常导致残疾和死亡，直接影响病人的生活质量。脑缺血时大脑神经受到损伤，神经生长因子受到抑制，缺血区的神经细胞减少，神经功能缺失[1-2]。“毒损脑络”是中医对中风理论的新学说，认为由于毒邪损伤了脑络导致中风发作，络脉破损或拘挛瘀闭，由气血渗灌失常导致[3]。中药地黄饮子具有驱毒化瘀、滋肾阴、补肾阳的功效。近年来，缺血性脑血管病发病率极高，在脑血管病中约占80%[4]，地黄饮子在临床上治疗缺血性脑血管病、中风及后遗症、血管性痴呆等取得一定疗效。本研究观察地黄饮子对脑缺血大鼠行为学的影响，进一步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物分组 健康清洁级Wistar大鼠80只，雌雄不限，体重250 g～280 g，由中国医科大学动物部提供，动物合格证号：SCXK-LN2013-0009。随机分为地黄饮子组、尼莫地平组、缺血组、对照组，各20只。地黄饮子组：造模后每日灌服地黄饮子汤36 g/kg，连续3周。尼莫地平组：造模后每日灌服尼莫地平(天津中央药业公司生产，生产批号：20130067，规格：每片20 mg。用注射用水溶解)12.5 mg/kg，连续3周。缺血组：造模后每日灌服生理盐水1次。对照组：正常饮食。连续治疗3周。

1.2 造模方法 用10%水合氯醛麻醉大鼠，固定后颈部正中切开，分离出双侧颈总动脉并用动脉夹钳夹40min，用温盐水纱布保护切口创面，松开动脉夹40 min后，再次用动脉夹钳夹40 min，使大鼠处于急性脑缺血状态，造模成功。

1.3 药物 按照《黄帝素问宣明论方》记载的地黄饮子配制：熟地黄12 g，巴戟天15 g，白茯苓12 g，山茱萸15 g，石斛15 g，菖蒲12 g，炮附子15 g，麦门冬15 g，肉苁蓉15 g，五味子10 g，官桂10 g，远志10 g。用12倍量和10倍量水煎煮2次，每次1 h，将两次药液混合，用旋转仪蒸发浓缩，干燥密封备用。

1.4 行为学Longa评分评定 分别在动物实验的第1周、第2周、第3周检测，神经行为学检查分为5等级：①正常行为，无神经功能缺损为0分；②大鼠左前爪不能完全伸展开，有轻度的神经功能缺损为1分；③大鼠行走时，向一侧转圈，有中度的神经功能缺损为2分；④大鼠行走时，向一侧倾倒，有重度的神经功能缺损为3分；⑤大鼠不能自主行走，或者意识丧失为4分。

1.5 Berderson评分评定 分别在动物实验的第1周、第2周、第3周检测。方法：提尾悬空时姿势反应测试，将大鼠提尾悬空1 m，观察它的前肢变化，正常大鼠四肢向四周伸展抓向地面，整个检查需要3 min～5 min完成。①正常(0分)：双前肢不完全伸展，没有神经功能缺损；②中度(1分)：一侧肢体长时间弯曲，如屈腕、肘部屈曲、肘部伸直时腕部屈曲、肩内收；③重度(2分)：将大鼠放在垫子上，抓住它尾巴向不同方向拖拽滑动，大鼠瘫痪侧抵抗力严重下降，不伴有自主转圈。④3分：同重度2分的行为，伴有自主转圈动作。

1.6 脑梗死面积测量 实验3周后，断头取脑，盐水冲洗大脑并吸干，将大脑冠状切片，加入1%2.3.5-三苯基四氮唑的磷酸缓冲液中，避光30 min，间隔6 min转动1次，把脑片放在电镜图像分析系统中，计算脑梗死面积，计算公式：脑梗死面积=(白色的梗死面积/片子的总面积)×100%。

1.7 统计学处理 采用SPSS17.0进行统计分析，多组间用单因素方差分析比较，组间两两比较用q检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠Longa评分比较 对照组Longa评分为0分。在第1周、第2周、第3周，地黄饮子组Longa评分明显低于缺血组，差异有统计学意义(P<0.05)，尼莫地平组Longa评分与缺血组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

分

2.2 各组大鼠Berderson评分比较 对照组Berderson评分为0分。在第1周、第2周、第3周，地黄饮子组Berderson评分明显低于缺血组，差异有统计学意义(P<0.05)，尼莫地平组Berderson评分与缺血组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

分

2.3 各组大鼠脑梗死面积比较 对照组脑梗死面积为0。地黄饮子组脑梗死面积明显低于缺血组，差异有统计学意义(P<0.05)，尼莫地平组脑梗死面积与缺血组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 各组大鼠脑梗死面积比较 %

3 讨 论

正常状态下，保持氧化与抗氧化间的平衡，使机体免受损伤，若平衡被打破，机体损伤疾病发生。本研究通过夹闭大鼠的颈总动脉，使大鼠脑处于急性缺血缺氧状态，通过不同的治疗方法，观察大鼠的行为学Longa评分和Berderson评分，测量脑梗死面积，结果显示：地黄饮子治疗效果明显优于尼莫地平，行为Longa评分、Berderson评分和脑梗死面积明显低于缺血组。有研究证实：地黄饮子能明显降低脑细胞的过氧化反应，提高神经细胞神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性和含量，提高机体清除过多的氧自由基能力，减少过氧化造成的损伤，维持细胞正常功能，因此地黄饮子治疗脑缺血损伤的主要保护机制是增加SOD活性，降低氧自由基含量[5-6]。有研究发现：地黄饮子可以显著提高脑组织中氧化应激的能力和学习记忆的功能，通过不同剂量的地黄饮子临床研究显示，高剂量的地黄饮子明显提高大鼠脑内抗氧化酶的活性，减少细胞凋亡和氧化损伤，延缓大脑老化，保护脑细胞的功能[7-8]。

有研究发现[9-10]：地黄饮子在治疗脑梗死时，可以明显减轻脑水肿，减轻脑缺血损伤造成的神经功能缺失症状，同时改善大鼠脑缺血后再灌注造成的损伤。李文英等[11-12]研究证实地黄饮子能够使SDF1蛋白表达增高，SDF1/CXCR4信号传导增强，加快海马区神经干细胞的增殖、迁移，并在缺血区进一步分化为神经元，弥补神经元缺失造成的损伤。

用地黄饮子治疗脑缺血、阿尔茨海默病、老年病等已经取得明显的治疗效果，实验研究也证实了地黄饮子能够修复脑缺血再灌注时的损伤，具有抗氧化，减少氧自由基含量，减少细胞凋亡，提高学习记忆能力，修复神经元功能缺失等作用。为临床上治疗老年病提供了更有力的理论依据。

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[10] 白黎明，闫咏梅，张晓双．地黄饮子对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J]．辽宁中医药大学学报，2012，14(1)：84-85．

[11] 李文英，段新芬，谢宁．加减地黄饮子对局灶性脑缺血大鼠脑组织bFGF和FGFR1表达的影响[J]．辽宁中医药大学学报，2007，9(2)：148．

[12] 王倩，范文涛，贺又舜．地黄饮子对大鼠局灶性脑缺血后SDF-1蛋白的影响[J]．陕西中医，2014，35(11)：1564-1566．

(本文编辑郭怀印)

辽宁省沈阳市第九人民医院(沈阳 110024)，E-mail：ly200920516@sina.com

引用信息：刘恒涛.地黄饮子治疗对脑缺血大鼠行为学评分的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2017，15(2)：168-170.

R743 R2555.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.02.012

1672-1349(2017)02-0168-03

2016-06-12)