山东地区淋病奈瑟菌临床菌株常用抗生素的耐药性分析*

赵立红

(泰山医学院附属泰山医院检验科，山东 泰安 271000)

山东地区淋病奈瑟菌临床菌株常用抗生素的耐药性分析*

赵立红

(泰山医学院附属泰山医院检验科，山东 泰安 271000)

目的 对2014年6月—2016年6月从山东济南、青岛、泰安地区分离的189株淋病奈瑟菌(neisseria gonorrhoeae,NG)临床菌株，对环丙沙星、青霉素、四环素、头孢曲松、阿奇霉素，以及大观霉素等6种常用抗生素的耐药性进行分析，为临床淋病的治疗提供依据。方法 采用琼脂稀释法测定189株临床分离菌株对6种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)值。采用产色头孢硝噻吩纸片法检测产β-内酰胺酶NG菌株(PPNG)。结果 NG对头孢曲松、阿奇霉素、和大观霉素的敏感率分别为98.41%、97.88%、98.94%；对环丙沙星、青霉素、四环素等几种传统抗生素的耐药率分别为95.77%、96.3%、96.83%。检出PPNG 75 株(39.7%)，TRNG77 株(40.7%)。结论 青霉素、环丙沙星及四环素等药物已不适用于本地区淋病的治疗，头孢曲松可作为治疗的首选药物，可同时用阿奇霉素进行联合治疗，三代头孢类药物过敏时可用大观霉素。

淋病奈瑟菌； 耐药性； 最小抑菌浓度

近年来，中国淋病发病率在性传播疾病中仅次于梅毒，居于第二位，是国家重点防治的性传播疾病之一[1]。淋病奈瑟菌是引起淋病(gonorrhea)的病原体，人类是淋病奈瑟菌的唯一天然宿主。随着抗生素的广泛应用及细菌染色体基因突变和耐药质粒的转移，应对淋病奈瑟菌的耐药性已成为全球化的难题[2-4]。本研究报告山东地区2014年6月—2016年6月分离的189株淋病奈瑟菌临床菌株，对环丙沙星、青霉素、四环素、头孢曲松、阿奇霉素、大观霉素等6种常用抗生素的耐药情况进行分析，给临床淋病治疗提供及时准确的依据。

1 材料和方法

1.1 菌株来源 189株淋病奈瑟菌菌株分离自山东济南、青岛、泰安地区2014年6月—2016年6月确诊的淋病患者的尿道或宫颈分泌物。将取得的分泌物接种于TM培养基上，立即置36 ℃、85%湿度，5% CO2培养箱培养24～48 h，然后根据菌落的形态、氧化酶实验、革兰染色及糖发酵试验证实为NG后，再在NG营养培养基中纯培养，于液氮中冻存备用。标准质控菌株WHO A、B、C、D、E均由中国医学科学院皮肤病研究所提供。

1.2 抗生素及平板 青霉素、四环素、阿奇霉素、头孢曲松、大观霉素以及TM和巧克力平板均购自英国OXOID公司，环丙沙星购自德国拜耳公司。抗生素稀释溶液由中国医学科学院皮肤病研究所提供。

1.3 抗生素敏感性试验 采用琼脂稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)，并统计MIC 50和MIC 90。药敏试验操作及药敏结果解释严格按照指南(CLSI M100-S21)进行[5]。各抗生素耐药的具体判断标准如下：青霉素MIC≤0.06mg/L为敏感，0.12 mg/L

1.4 产β-内酰胺酶NG(PPNG)测定 采用产色头孢硝噻吩法，将头孢硝噻吩纸片置于干净的平皿内，用无菌接种环挑取细菌涂抹于纸片上，1 min后观察纸片有无颜色变化，颜色由黄色变为红色为阳性，不变色为阴性。每次检测均以β-内酰胺酶阳性的WHO 标准菌株做对照。

1.5 质粒介导的四环素高度耐药NG(TRNG)测定 采用琼脂稀释法，当四环素MIC≥16 mg/L，判为TRNG株。

2 结 果

2.1 抗生素敏感性试验测定结果 189株淋病奈瑟菌临床菌株对环丙沙星、青霉素及四环素耐药率分别为95.77%、 96.3%和96.83%，均未发现敏感菌株；对阿奇霉素、头孢曲松及大观霉素的敏感率分别97.88%、98.41%、98.94%，均未发现耐药菌株。见表1。

表1 189株中国山东地区淋病奈瑟菌对6种抗生素的敏感性

注:环丙沙星：CIP；青霉素：PEN；头孢曲松：CRO；四环素：TET；大观霉素:SPT。敏感：S,sensitive；中介：I, intermediate；耐药：R, resistant。

2.2 PPNG 及TRNG 测定结果 189 株NG 共检出PPNG 75 株(39.7%)，TRNG77 株(40.7%)。

3 讨 论

青霉素和四环素是治疗淋病的经典药物，由于20世纪80年代淋病奈瑟菌对青霉素和四环素普遍耐药，WHO于当时提出将第三代头孢菌素及氟喹诺酮类药物推荐为治疗淋病的一线药物[6]。但淋病奈瑟菌对氟喹诺酮类药物的敏感性下降于1992年在西太平洋地区首次发现，很快蔓延至世界各地[2-4，7]。在中国，淋病奈瑟菌对氟喹诺酮类药物的耐药率因不同的地区而有所不同。本研究显示对环丙沙星、青霉素及四环素耐药率分别为95.77%， 96.3%和96.83%，均未发现敏感株。四环素耐药率基本与广州地区2010高达98.8%的耐药率一致[8]，而明显高于湖北武汉地区2010年80.75%的耐药率[9]。所以氟喹诺酮类药物以及青霉素和四环素均不能作为本地区治疗淋病的一线药物。目前WHO推荐第三代头孢菌素仍作为淋病奈瑟菌感染的一线治疗药物，单独用药或者同时使用阿奇霉素联合用药治疗淋病奈瑟菌感染。因本地区流行NG株对头孢曲松未发现耐药菌株，所以头孢曲松仍可作为本地区治疗淋病奈瑟菌感染的首选药物使用，可以单独用药或者同时使用阿奇霉素联合用药，但应持续监测NG对第三代头孢菌素的敏感性。目前大观霉素因在中国供应紧缺而长时间未在该地区使用，因而大观霉素在本地区对淋病奈瑟菌的敏感率高达98.94 %，对包括 PPNG和 TRNG在内的淋病奈瑟菌菌株均具有很强的活性，因此，在第三代头孢菌素过敏的情况下，可以使用大观霉素治疗本地区淋病奈瑟菌感染。

[1] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会规划与信息司：2012年我国卫生和计划生育事业发展统计公报.

[2] Allen VG, Farrell DJ, Rebbapragada A, Tan J, et al. Molecular analysis of antimicrobial resistance mechanisms in Neisseria gonorrhoeae isolates from Ontario[J]. Antimicrob Agents Chemother,2011,55:703-712.

[3] Ison CA, Town K, Obi C, et al.GRASP Collaborative group: Decreased susceptibility to cephalosporins among gonococci: data from the Gonococcal Resistance to Antimicrobials Surveillance Programme (GRASP) in England and Wales, 2007 2011[J]. Lancet Infect Dis,2013, 13:762-768.

[4] Zhao LH, Zhao SP. Molecular basis of high-level ciprofloxacin resistance in Neisseria gonorrhoeae strains from Shandong Province, China[J]. Braz J Microbiol,2013,44:273-276.

[5] Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-First Informational Supplement[M].Wayne, 2011.

[6] Campos-Outcalt D.CDC update: guidelines for treating STDs[J].J Fam Pract， 2011, 60( 3) : 143-146.

[7] Allen VG, Farrell DJ, Rebbapragada A, et al. Molecular Analysis of Antimicrobial Resistance Mechanisms in Neisseria gonorrhoeae Isolates from Ontario, Canada[J]. Antimicrob Agents Chemother,2011,55(2): 703-712.

[8] 黎小东，曹文苓，宋卫忠，等.2010年广州地区淋球菌耐药监测结果分析[J].中国微生态学杂志, 2012, 24(6): 554-560.

[9] 代淑兰.综合医院妇产科医院感染病原菌及耐药情况分析[J].中国病原生物学杂志, 2013, 8(5): 462-464.

Analysis of antimicrobial resistance in Neisseria gonorrhoeaeisolated from Shandong against six antimicrobial agents

ZHAO Li-hong

(Department of Laboratory, Tai'an Central Hospital, Taian 271000, China)

Objective: To analyze the antimicrobial susceptibility tests of the 189 N. gonorrhoeae isolates for clinical determination of optimal treatment regimens. Methods: 189 N. gonorrhoeae isolates were randomly selected from the hospitals in Tai'an, Qingdao and Jinan of Shandong Province during June, 2014-June, 2016. Antimicrobial susceptibility testing was performed using the agar dilution method. All the isolates were tested against penicillin (PEN), ceftriaxone (CRO), tetracycline (TET), azithromycin (AZM), ciprofloxacin (CIP), and spectinomycin (SPT) .The beta-lactamase producing of PPNG isolates were determined using the nitrocefin test (Oxoid). Results: The resistance rate of N. gonorrhoeae against CIP, PEN, and TET were 95.77%, 96.3%, and 96.83%, respectively. At the same time, the susceptibility rate of N. gonorrhoeae against CRO, AZM, and SPE were 98.41%, 97.88% and 98.94%, respectively. The PPNG and TRNG accounted for 39.7% and 40.7% of the N. gonorrhoeae isolates, respectively. Conclusion: Ceftriaxone only or combined with azithromycin remain to be the first line therapy for N. gonorrhoeae infections in this district in China. When available, spectinomycin is an effective alternative for the treatment of N. gonorrhoeae infections in the presence of cephalosporin allergy.

Neisseria gonorrhoeae; resistance; MIC

赵立红(1970—)，女，山东泰安人，副主任技师，博士，主要从事临床检验工作。

R446.5

A

1004-7115(2017)01-0030-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.01.009

2016-09-12)