柚皮苷对胃溃疡大鼠血清及胃黏膜组织中SOD和NO水平的影响*

贺 敏，秦建设，吕武宾,姜兴鹏△

(1.重庆三峡医药高等专科学校中医系 404120;2.重庆三峡医药高等专科学校附属医院针灸科，重庆 404100)

柚皮苷对胃溃疡大鼠血清及胃黏膜组织中SOD和NO水平的影响*

贺 敏1，秦建设1，吕武宾2,姜兴鹏2△

(1.重庆三峡医药高等专科学校中医系 404120;2.重庆三峡医药高等专科学校附属医院针灸科，重庆 404100)

目的 观察柚皮苷对乙酸型胃溃疡大鼠血清及胃黏膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影响，探讨柚皮苷对胃溃疡的治疗作用。方法 60只SPF级SD大鼠分成6组，即正常组，模型组，柚皮苷低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组和兰索拉唑组(3mg/kg)。采用改良Okabe法制作乙酸型胃溃疡模型。造模后次日开始给药，每天1次，连续给药1周后处死大鼠，采集标本，检测血清与胃黏膜组织液中SOD和NO水平。结果 柚皮苷具有明显的抗溃疡作用。与模型组相比，柚皮苷中、高剂量组大鼠血清及胃黏膜组织液中SOD和NO水平明显升高(P<0.05)，相比柚皮苷低剂量组与兰索拉唑组，柚皮苷高剂量组效果更明显(P<0.05)。结论 柚皮苷具有显著的抗胃溃疡作用，其作用机制可能与提高血清及胃黏膜组织中SOD和NO的水平有关。

橙皮苷；胃溃疡；超氧化物歧化酶;一氧化氮

柚皮苷(naringin)即柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，又称柚苷、柚皮素，是一种双氢黄酮类化合物，是骨碎补、陈皮、枳实、青皮等中药的主要有效成分之一。现有研究发现其具有抗病毒、镇痛、抗过敏及改善局部微循环和营养供给的性能，其较强的抗炎、抗氧化能力已被证实[1]。2013年，柚皮苷被国家批准作为一类新药进入临床试验。大量药物成分分析研究显示，对胃溃疡有治疗作用的很多中成药，如健脾舒胃凝胶、胃苏颗粒、胃炎灵颗粒等中均检测出含有大量的柚皮苷成分[2-4]。但是，有关柚皮苷对胃溃疡的治疗作用研究文献比较少见。本文旨在研究柚皮苷对胃溃疡大鼠胃黏膜损伤的保护作用，特别是对超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影响，进一步阐明柚皮苷的药理作用，为治疗胃溃疡提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料 柚皮苷(编号：101291319，Sigma公司)，兰索拉唑片(规格：15mg，批号：120623，重庆科瑞制药有限公司)，柚皮苷用羚甲基纤维素纳(CMC)制成100%柚皮苷悬浊液。Bio-TekELX800多功能酶标仪(美国)，H-1850R湘仪高速离心机。

1.2 方法

1.2.1 分组 清洁级4月龄SD大鼠60只，雌雄各半，体质量180～200g，由第三军医大学大坪医院野战外科研究所医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(渝)2012-0005。将大鼠分为正常组，模型组，柚皮苷低剂量、中剂量、高剂量组，兰索拉唑组，每组10只。

1.2.2 模型制备 用改良Okabe法制作乙酸型胃溃疡模型[5-6]。大鼠适应性饲养1周后禁食不禁水24h。以10%的水合氯醛腹腔注射进行麻醉，在剑突下沿正中线作2～3cm的正中切口，打开腹腔，将胃轻轻拉出，用1.0mL注射器在胃前壁胃小弯角切迹下方刺入浆膜下注入0.1mL100%的乙酸，以出现白点为度，然后用细棉签将溢出乙酸吸净，用含生理盐水清洗，将胃小心地纳入腹腔，逐层缝合创口。术后当日给大鼠自由饮水，次日开始自由饮食。

1.2.3 给药方法 造模次日开始给药：模型组给予生理盐水1mL/100g灌胃；柚皮苷低剂量组给予50mg/kg灌胃；柚皮苷中剂量组给予100mg/kg灌胃；柚皮苷高剂量组给予200mg/kg灌胃；兰索拉唑组给予3mg/kg兰索拉唑。每天 1 次，连续给药 1 周。正常组正常饮食。

1.2.4 标本采集与处理 给药1周后，所有组别大鼠禁食24h后，进行腹腔麻醉，开腹采用腹主动脉取血方法收集血液标本，取血后室温静置1h后3 500r/min离心10min，吸出上层血清存放在-85 ℃冰箱保存。胃黏膜用组织匀浆器匀浆后离心，吸出上层澄清液存放在-85 ℃冰箱保存。

1.2.5 观测指标与方法

1.2.5.1 血清SOD水平检测 采用WST-1法检测血清SOD水平。按试剂盒要求设定对照孔、对照空白孔、测定孔和测定空白孔，分别加样品、双蒸水、酶工作液、酶稀释液、底物应用液后，37 ℃孵育反应20min。用多功能酶标仪(Bio-TekELX800，美国)在450nm波长测定光密度值(OD值)。依据公式计算样品中SOD水平。

1.2.5.2 血清NO水平检测 采用一步法，按试剂盒要求设定空白孔、标准孔和测定孔，分别加双蒸水，20mol/L亚硝酸钠标准液，样品，显色剂后，静置15min。用多功能酶标仪(Bio-TekELX800，美国)在550nm波长测定各孔吸光度值(A值)，依据计算公式得出各样本NO水平。

2 结 果

2.1 胃溃疡大鼠血清及胃黏膜组织SOD的变化 与模型组相比，柚皮苷低、中、高剂量给药组与兰索拉唑组大鼠血清及胃黏膜组织中SOD水平均升高，但柚皮苷中剂量、高剂量组效果明显(P<0.05)。相比柚皮苷低剂量组与兰索拉唑组，柚皮苷高剂量组效果更明显(P<0.05)，见表1。

表1 各组大鼠血清及胃黏膜组织液中SOD水平的变化

a：P<0.01，与正常组比较；b：P<0.05，与模型组比较；c：P<0.05，与兰索拉唑组比较；d：P<0.05，与柚皮苷低剂量组比较。

2.2 胃溃疡大鼠血清及胃黏膜组织NO的变化 与模型组相比，柚皮苷中、高剂量组与兰索拉唑组大鼠血清及胃黏膜组织中NO水平均升高，但柚皮苷中、高剂量组效果明显(P<0.05)。相比柚皮苷低剂量组与兰索拉唑组，柚皮苷高剂量组效果更明显(P<0.05)，见表2。

表2 各组大鼠血清及胃黏膜组织液中NO水平

a：P<0.01，与正常组比较；b：P<0.05，与模型组比较；c：P<0.05，与兰索拉唑组比较；d：P<0.05，与低剂量组比较。

3 讨 论

胃溃疡是临床常见的消化道疾病，各种物理和化学因素刺激、机体应激状态及病原菌的感染导致胃黏膜损伤，诱发或加剧溃疡病的发生[7-8]。大量研究表明，胃溃疡产生与修复是一个非常复杂的过程，是多种细胞、生长因子及细胞外基质相互作用的结果，而胃黏膜防御屏障功能下降，防御保护因子减少是形成胃溃疡的重要病理基础之一。SOD是存在于体内抑制和防御自由基损伤的重要抗氧化酶之一，胃溃疡发生过程中氧自由基损伤是重要因素之一，大量试验研究表明，SOD活性下降、抗氧化能力降低，导致机体出现氧化应激反应，是胃溃疡产生的重要机制[9]。本实验研究结果表明，柚皮苷能明显提升胃溃疡大鼠血清及胃黏膜中SOD水平，随着用药剂量的增加，其作用效果愈明显，相比柚皮苷低剂量组与兰索拉唑组，柚皮苷高剂量组效果更明显。

NO不仅具有抗氧化作用，还是重要的胃黏膜保护因子，其主要通过以下机制发挥作用：(1)舒张血管平滑肌直接扩张血管，增加胃黏膜血流，从而改善胃黏膜微循环；(2)改善受损胃黏膜的血管通透性，维持血管壁的完整性[10]；(3)拮抗内皮素-1(ET-1)的缩血管作用[11]。本实验结果表明，柚皮苷能明显提升胃溃疡大鼠血清及胃黏膜中NO的水平，随着用药剂量的增加，其作用效果愈明显，相比柚皮苷低剂量组与兰索拉唑组，柚皮苷高剂量组效果更明显。

柚皮苷是一种在植物界广泛存在的天然单体化合物，现有研究发现其具有抗病毒、镇痛、抗过敏、改善局部微循环和营养供给的性能。其较强的抗炎、抗氧化能力已被证实[1]。本实验结果显示，柚皮苷具有明显的促进胃溃疡愈合作用，且治疗效果与兰索拉唑无明显差异。柚皮苷的作用机制可能是通过刺激胃黏膜细胞，促进黏膜保护因子SOD及NO分泌，提高SOD及NO水平，加快胃黏膜的增殖与修复，从而达到保护胃黏膜，预防和治疗胃溃疡的作用。

[1]时雪峰．柚皮苷提取纯化及其降血糖活性研究[D]．南宁：广西医科大学，2008．

[2]牛晓静，鲁静，段晓颖，等．HPLC同时测定健脾舒胃凝胶中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、甘草酸铵5种成分水平[J]．中国实验方剂学杂志，2015，21(2)：77-79．

[3]杨佳静，薛佳，周华方，等．HPLC法同时测定胃苏颗粒中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的水平[J]．中国药房，2014，25(4)：372-374．

[4]张咏梅，陈晓峰，姚莉萍．HPLC法测定无糖型胃炎灵颗粒中柚皮苷的水平[J]．安徽医药，2014，18(6)：1045-1047．

[5]OkabeS,AmagaseK.Anoverviewofaceticacidulcermodels-thehistoryandstateoftheartofpepticulcerresearch[J].BiolPharmBull,2005,28(8):1321-1341.

[6]才丽平，蒋宁，曲怡，等．“毒热证”胃溃疡大鼠模型的制备与评价[J]．中华中医药杂志，2011，26(3)：501-504．

[7]LiuXH,ZhaoLG,LiangJ,etal.Componentanalysisandstructureidentificationofactivesubstancesforanti-gastriculcereffectsinradixastragalibyliquidchromatographyanntandemmassspectromeltry[J].JChromatogrBAnalytTechnolBiomedLifeSci,2014(960):43-51.

[8]陈月，曲连悦，李晓赫，等．兰索拉唑治疗胃溃疡4周和8周愈合率的疗效评价[J]．中国医院药学杂志，2011，31(23)：1956-1960．

[9]王海燕，刘亚明，李海燕，等．高良姜对胃溃疡小鼠模型血清NO,SOD及MDA的影响[J]．中华中医药杂志，2011，26(7)：1640-1642．

[10]杜勇，赵伟春，沈文文，等．腹水草抗大鼠乙酸型胃溃疡的作用及其对NO,iNOS和VEGF表达的影响[J]．浙江中医药大学学报，2013，10(37)：1151-1155．

[11]林洁，文颖娟．加味左金汤对胃溃疡大鼠血清NO及胃黏膜EGF,EGFR表达的影响[J]．中国中医急症，2013，11(22)：1836-1838．

�验交流·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.02.026

重庆市教育委员会科学技术研究资助项目(KJ131805)。

贺敏(1980-)，讲师，硕士，主要从事中医药治疗脾胃疾病方面研究。△

E-mail：657537946@qq.com。

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1671-8348(2017)02-0230-03

2016-07-10

2016-10-11)