萌芽鹰嘴豆主要异黄酮变化规律及分布研究

陈有军，严群超，李 杰

(1广州宏韵医药科技股份有限公司，广州 510663；2暨南大学医学院，广州 510632；3新疆丝路弘毅农业科技有限公司，乌鲁木齐 830011)

萌芽鹰嘴豆主要异黄酮变化规律及分布研究

陈有军1，严群超2，李 杰3

(1广州宏韵医药科技股份有限公司，广州 510663；2暨南大学医学院，广州 510632；3新疆丝路弘毅农业科技有限公司，乌鲁木齐 830011)

目的：考察鹰嘴豆萌芽过程中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量的变化规律及豆芽不同部位2种成分含量的差异。方法：将鹰嘴豆在22 ℃萌芽，分别于萌芽的0、1、2、3、5、7、9d取样品测定鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量，取萌芽7d鹰嘴豆，分别取其子叶、胚根和胚芽测定上述2种成分含量，分析2种成分含量变化规律和豆芽不同部位含量差异。 结果：鹰嘴豆芽素A 和芒柄花素含量自发芽后呈现不断增长的趋势，第3～7d增长迅速、第7～9d后增速放缓，不同部位含量大小依次为胚根>胚芽>子叶。结论：鹰嘴豆萌芽过程中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量呈不断上升趋势，成分主要集中在胚根和胚芽中。

鹰嘴豆；萌芽；鹰嘴豆芽素A；芒柄花素

鹰嘴豆(Cicerarietinum)是世界上栽培面积较广的食用豆类之一，中医认为，鹰嘴豆味甘、性平、无毒，具有补中益气、温肾壮阳、消渴、解血毒、强身健体和增强记忆力等功效。鹰嘴豆富含多种蛋白质和氨基酸、异黄酮、皂苷类、黄烷酮类、有机酸、糖类、维生素、粗纤维及微量元素等成分[1]，具有显著的降血糖、降血脂和抗癌等活性，其主要活性成分为异黄酮类成分[1，2]。鹰嘴豆中所含异黄酮类主要包括鹰嘴豆芽素A和芒柄花素类等，研究发现，这些异黄酮类成分在发芽过程中处于动态变化的状态，发芽后含量显著增长[1，3]，但其在发芽周期的变化规律，以及鹰嘴豆芽不同部位异黄酮类含量差异尚未见报道。本试验拟通过考察其不同发芽周期及不同部位异黄酮含量，进一步探索其萌芽周期的变化规律和异黄酮的分布规律，为针对功能性筛选或富集成分等提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料与试剂

鹰嘴豆种子，购自新疆木垒县，经新疆木垒县农业局鉴定为鹰嘴豆的干燥种子。鹰嘴豆芽素A对照品，购自中国药品生物药品检定所(批号：111708-200501)；芒柄花素对照品，购自上海永恒生物科技有限公司(批号：20140506)；甲醇为色谱纯、乙醇和磷酸为分析纯，均购自天津市致远化学试剂有限公司。

1.2 试验仪器

岛津液相色谱仪，包括LC-15C 送液泵、 SPD-15C 紫外可见双波长检测器和 SIL-10AF 自动进样器；分析天平(常州市衡正电子仪器有限公司)；超声波清洗机。

1.3 试验方法

1.3.1 色谱条件 Wondasil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-0.1mol/L磷酸(80：20)，流速：1.0mL/min，检测波长：254nm；柱温：25℃。

1.3.2 样品制备

(1)对照品溶液：分别精密称取P2O5减压干燥器中干燥12h的鹰嘴豆芽素A对照品和芒柄花素对照品，加乙醇配制成每1 mL含鹰嘴豆芽素A 0.144mg和含芒柄花素0.119mg的混合溶液，即得。

(2)萌芽鹰嘴豆：取干燥饱满的鹰嘴豆样品，加适量水浸泡后，置22℃温度下发芽，分别于发芽0、1、2、3、5、7、9d取样品，漂洗后80℃干燥，备用。

(3)供试品溶液：取干燥好的萌芽鹰嘴豆，粉碎过80目筛，取细粉0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇溶液25mL，称定重量，超声处理30min，放至室温后，称定重量，加溶剂补足减失的重量，摇匀，用 0.45μm 微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

1.3.3 检测方法建立

(1)标准曲线绘制：精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20μL测定吸收峰面积。以吸收峰面积为纵坐标，以对照品进样量(μg)为横坐标作图，进行线性回归，鹰嘴豆芽素 A和芒柄花素的回归方程分别为：y=43.163x+0.4754(R2=0.999 4)、y=71.214x+0.323 9(R2=0.999 8)，结果表明鹰嘴豆芽素 A在0.288～2.88μg 范围内线性关系良好、芒柄花素在0.238～2.38μg范围内线性关系良好。

(2)精密度试验：精密吸取对照品溶液 10μL，重复进样6次，按上述色谱条件，测定吸收峰面积，计算得鹰嘴豆芽素A 的RSD为0.69%、芒柄花素的RSD为1.49%，表明该方法精密度较好。

(3)重复性试验：取同一样品6 份，每份0.8g，精密称定，按“2.2.3”项下的方法操作制备溶液，进样10μL，测定吸收峰面积，计算得鹰嘴豆芽素A 的RSD为1.87%、芒柄花素的RSD为2.12%，说明该方法重复性较好。

(4)稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液10μL，分别于第0、1、2、4、6、8h进样，测得峰面积，计算得鹰嘴豆芽素A 的RSD为0.79%，芒柄花素的RSD为2.13%，说明供试品溶液在8h内稳定。

(5)回收率试验：取已知浓度的萌芽鹰嘴豆粉6份(鹰嘴豆芽素A 和芒柄花素含量分别为0.308%和0.217%，每份0.6g，精密称定，依次精密加入鹰嘴豆芽素A对照品和芒柄花素对照品1.71μg和1.20μg，依照“2.2.3”项下的方法操作制备溶液。按上述色谱条件测定，计算回收率。结果鹰嘴豆芽素A平均回收率(n=6)为98.71%、RSD为1.05%；芒柄花素平均回收率(n=6)为99.87%、RSD为1.09%。

2 结果与分析

2.1 不同萌芽期鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量变化

分别取不同发芽期的萌芽鹰嘴豆样品依据“2.2.3”制备供试品溶液，测定鹰嘴豆芽素A 和芒柄花素含量，结果见图1。结果显示，鹰嘴豆芽素A 和芒柄花素含量自发芽后一直呈现不断增长的趋势，0～3d增长速度较缓慢、第3～7d增长迅速、第7d后至第9d增速放缓。

2.2 不同部位对鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量的影响

取干燥好的萌芽鹰嘴豆，分别剥取其子叶、胚根和胚芽，依据“2.2.3”制备供试品溶液，其中胚根和胚芽供试品溶液稀释10倍后作供试品溶液，进样测定鹰嘴豆芽素A 和芒柄花素含量，结果见图2和图3。结果显示，萌芽鹰嘴豆不同部位中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量相关较大，含量大小依次为胚根>胚芽>子叶。

图1 不同萌芽期鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量

图2 萌芽鹰嘴豆不同部位鹰嘴豆芽素A含量

图3 萌芽鹰嘴豆不同部位芒柄花素含量

3 讨论

本文建立了HPLC高效液相色谱测定鹰嘴豆中豆芽素A和芒柄花素含量的方法，方法简便、快速、准确度高、重复性好，可用于鹰嘴豆的含量测定和质量控制。但在成分测定过程中本试验亦参考文献报道考察了染料木素[4]，但并未发现该成分，在萌芽0d时，各成分含量极低，与文献报道存在一定的差异，这可能与样品的不同采收期或不同产地有关。

种子在发芽过程中，可以引起多种酶类发生变化及蛋白组学发生改变，进而引起成分含量变化[5，6]。鹰嘴豆在萌发过程中各营养成分和植酸的含量亦发生了较显著的变化，其中淀粉、可溶性糖、部分氨基酸及植酸和总酚等含量明显下降，而蛋白质含量则有上升趋势，萌芽鹰嘴豆总异黄酮含量则远高于鹰嘴豆中异黄酮含量[3，7]。本试验结果显示，鹰嘴豆萌芽后其主要异黄酮成分鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量均大幅度增加，萌芽第3～7d增长速度迅速，第7d含量增长速度放缓。萌芽鹰嘴豆2种主要异黄酮主要存在于胚根部位。本试验可为以萌芽方式筛选功能原料或富集鹰嘴豆异黄酮提供参考。◇

[1]李朋收，刘洋洋，范冰舵，等.鹰嘴豆化学成分及药理作用研究进展[J]，中国实验方剂学杂志，2014，6，20(11)：235-238.

[2]赵堂彦，孟茜，瞿恒贤，等.鹰嘴豆营养功能特性及其应用[J]. 粮油食品科技，2014，22(4)：38-41.

[3]Yue Gao,Yang Yao,Yingying Zhu，et al.Isoflavone Content and Composition in Chickpea (Cicer arietinum L.)Sprouts Germinated under Different Conditions[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2015，63(10)：2701-2707.

[4]邢江浩，孙晓莉，周军.HPLC同时测定鹰嘴豆中染料木素、刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量[J]. 药物分析杂志，2009，29(1)：73-75.

[5]李新华，刘星波.大豆发芽过程中酶的含量变化及营养变化研究[J]. 食品工业科技，2010，10(31)：149-151.

[6]刘宝祥，朴永哲，翟明昌，等.大麦发芽过程中蛋白质组的变化研究[J]. 食品工业科技，2013，11(34)：108-111.

[7]肖俊松，吴华，张亚歌.鹰嘴豆萌发过程中营养成分和抗营养因子的变化规律[J]. 食品科学，2011，32(23 )：134-138.

(责任编辑 李燕妮)

Change Rule and Distribution of Main Isoflavones During Germination Process of Cicer arietinum

CHEN You-jun1，YAN Qun-chao2，LI Jie3

(1Guangzhou Hongyun Medical Scientific and Technological Co.Ltd，Guangzhou 510663，China；2School of Medicine Jinan University，Guangzhou 510632，China；3Xinjiang Dooou Agricultural Science and Technology Co.Ltd，Wulumuqi 830011，China)

【Objective】To observe the changing rule and distribution of main isoflavones including biochanin A and fermononetin during the germination process ofCicerarietinum.【Method】 Chickpeas germinated at 22 ℃ for 9 days，biochanin A and fermononetin were determined at 0，1，2，3，5，7，9 days，and them in cotyledons，radicals and plumules of germinated chickpea at the 7 day were also determined,then the change rule and distributions in different parts of the two isoflavones were evaluated.【Result】The contents of biochanin A and fermononetin were increased continually during the germination process，the increase speed was faster during 3 d to 7 d，and the increased speed were slower during 7 d to 9 d.The content of two main isoflavones in different parts was in the order of radicals,plumules,cotyledons.【Conclusion】The content of biochanin A and fermononetin were increased continually during the germination process，and they distributed mainly in the radicals and plumules.

chickpea；germination；biochanin A；fermononetin

陈有军(1979— )，硕士，制药工程师，研究方向：中药研发等。