地锦草抗皮肤癣菌活性部位化学成分研究△

李鹤，赵宁，古力娜·达吾提，李治建，斯拉甫·艾白，潘瑞乐*

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.新疆维吾尔自治区维吾尔医医院，新疆 乌鲁木齐 830049；3.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所，新疆 乌鲁木齐 830049；4.新疆维吾尔医方剂学实验室，新疆 乌鲁木齐 830049)

·基础研究·

地锦草抗皮肤癣菌活性部位化学成分研究△

李鹤1，赵宁1，古力娜·达吾提2，李治建3，4*，斯拉甫·艾白3，4，潘瑞乐1*

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.新疆维吾尔自治区维吾尔医医院，新疆 乌鲁木齐 830049；3.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所，新疆 乌鲁木齐 830049；4.新疆维吾尔医方剂学实验室，新疆 乌鲁木齐 830049)

目的：研究地锦草抗皮肤癣菌活性部位化学成分。方法：采用硅胶、凝胶、MCI GEL CHP 20P、制备液相等技术对地锦草活性部位化学成分进行分离纯化，用NMR、MS等波谱技术进行结构鉴定。结果：从地锦草抗皮肤癣菌活性部位中分到11个化合物，其中8个黄酮醇类化合物，3个酚酸类个化合物。结构分别为山柰酚(1)，槲皮素(2)，山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)，槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(4)，槲皮素-3-O-(6″-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖苷(5)，山柰酚-3-O-α-D-吡喃阿拉伯糖苷(6)，山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖苷(7)，山柰酚-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(8)，没食子酸乙酯(9)，反式阿魏酸(10)，原儿茶酸乙酯(11)。结论：地锦草抗皮肤癣菌活性部位主要含黄酮醇及酚酸类化合物。化合物5、10、11为首次从该植物中分离得到。

地锦草；活性部位；皮肤癣菌；黄酮醇类化合物；酚酸类化合物

地锦草为大戟科(Euphorbiaceae)大戟属植物地锦EuphorbiahumifusaWilld.或斑地锦EuphorbiamaculataL.的干燥全草[1]，广泛应用于中、蒙、维医药中，在《中华人民共和国药典》、《内蒙古药材标准》和《维吾尔药材标准》上册均有记载。临床上多用于治疗皮肤感染、菌痢、病毒性肝炎、各种出血症等。以地锦草为君药的维药“百癣夏塔热片”用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣、过敏性皮炎和痤疮均有良好效果[2]。本课题组前期研究证明，地锦草的醇提物[3]及醇提物大孔树脂吸附后40%乙醇水洗脱部位(EHEF)具有较好的抗皮肤癣菌活性[4]。但是，地锦草抗皮肤癣菌活性部位的化学成分并不清楚。本文采用硅胶、凝胶、MCI GEL CHP 20P、制备液相等技术对地锦草活性部位EHEF进行了系统的分离纯化，共得到11个化合物。通过其理化性质和NMR、MS等波谱数据进行结构鉴定，其中有8个黄酮醇类化合物、3个酚酸类化合物，分别为：山柰酚(1)，槲皮素(2)，山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)，槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(4)，槲皮素-3-O-(6″-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖苷(5)，山柰酚-3-O-α-D-吡喃阿拉伯糖苷(6)，山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖苷(7)，山柰酚-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(8)，没食子酸乙酯(9)，反式阿魏酸(10)，原儿茶酸乙酯(11)，化合物5、10、11为首次从该植物中分离得到。研究结果表明，地锦草抗皮肤癣菌活性部位主要含黄酮醇及酚酸类化合物。

1 仪器与材料

梅特勒电子天平MS105DU(瑞士METTLER TOLEDO公司)，四孔电热恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)，JR-360D超声清洗器(北京精锐泽祥实验仪器有限公司)，薄层色谱硅胶板HSGF254(烟台市化学工业研究所)，2435型分析液相色谱仪系统(美国WATERS公司)，2535型半制备液相色谱仪系统(美国WATERS公司)，AVANCE Ⅲ 600MHz核磁共振仪(德国BRUKER公司)，赛默飞世尔(Thermofisher)LTQ-Obitrap XL液质联用仪。AB-8大孔树脂(河北宝恩吸附材料有限公司)，Sephadex LH-20(美国 Pharmacia公司)，MCI GEL CHP 20P(75～150 μm，日本三菱化学公司)，所用化学试剂均为分析纯(北京化学试剂厂)。

地锦草药材购于新疆奇康哈博中维药饮片有限公司(批号：15010301)，经中国医学科学院药用植物研究所张本刚教授鉴定为大戟科大戟属植物地锦EuphorbiahumifusaWilld.的全草。

2 提取与分离

活性部位的制备方法参考文献[4]，将地锦草生药8390 g剪段，加入12倍量的70%乙醇水回流提取3次，每次1 h，合并滤液，减压回收，得到乙醇提取物(DC，2500 g)。将DC(2400 g)用35倍量去离子水分散，搅拌均匀后静置12 h，离心，上清液(DS，2000 g)上样于AB-8大孔吸附树脂 (4200 g)，乙醇-水梯度(水，20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇水)洗脱，收集40%乙醇水洗脱部位(EHEF，180 g)，对EHEF部位进行分离。

EHEF部位用硅胶柱层析进行分离，以二氯甲烷-甲醇(200∶5，100∶5，100∶10，100∶15，100∶20，100∶50，甲醇)进行梯度洗脱得到61个馏分(Fr.1～61)。Fr.6～8合并后经制备液相分离得到化合物10(15 mg)、化合物11(5 mg)。Fr.10～19合并后经凝胶、硅胶柱层析得到化合物9(100 mg)。Fr.27～43合并后经硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(100∶5，100∶8，100∶10，100∶20，100∶50，1∶1，甲醇)进行梯度洗脱得到63个馏分(Fr.1.1～1.63)。Fr.1.19～1.26合并后经凝胶分离得到化合物1(3 mg)、化合物4(200 mg)。Fr.1.37～1.39经重结晶得到化合物3(300 mg)。Fr.43～60合并后用MCI GEL CHP 20P进行分离，以甲醇-水(0∶100，40∶60，80∶20)进行梯度洗脱得到5个馏分(Fr.2.1～2.5)。Fr.2.2经硅胶、凝胶柱层析，最后用制备液相分离得到化合物5(10 mg)。Fr.2.3经凝胶柱层析，最后用制备液相分离得到化合物6(7 mg)、化合物7(7 mg)、化合物8(3 mg)。Fr.2.4经硅胶柱层析得到化合物2(550 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色针晶。ESI-MS m/z 285[M-H]-。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)，δ8.09 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.91 (2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，5′)，6.39 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.18 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ177.3 (C-4)，166.2 (C-7)，162.5 (C-5)，160.6 (C-4′)，158.3 (C-9)，148.0 (C-2)，137.1 (C-3)，130.7 (C-2′，6′)，123.8 (C-1′)，116.3 (C-3′，5′)，104.4 (C-10)，99.5 (C-6)，94.6 (C-8)。以上数据与文献对照一致[5]，确定该化合物为山柰酚(kaempferol)。

化合物2：黄色粉末。ESI-MS m/z 301[M-H]-。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)，δ7.72 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.62 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6′)，6.87 (1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，6.37 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.17 (1 H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ177.2 (C-4)，165.8 (C-7)，162.5 (C-5)，158.2 (C-9)，148.8 (C-4′)，148.0 (C-3′)，146.2 (C-2)， 137.2 (C-3)，124.1 (C-1′)，121.7 (C-6′)，116.2 (C-5′)，116.0 (C-2′)，104.4 (C-10)，99.3 (C-6)，94.5 (C-8)。以上数据与文献对照一致[6]，确定该化合物为槲皮素(quercetin)。

化合物3：黄色针晶。ESI-MS m/z 447[M-H]-。1H-NMR (DMSO-d6，600 MHz)，δ12.62 (1H，s，H-5)，8.04 (2H，d，J=8.9 Hz，H-2′，6′)，6.88 (2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，5′)，6.43 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.46 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，2.90～3.57 (6H，m，H-2″-6″)；13C-NMR (DMSO-d6，150 MHz)，δ177.5 (C-4)，164.2 (C-7)，161.3 (C-5)，160.0 (C-4′)，156.4 (C-9)，156.3 (C-2)，133.2 (C-3)，130.9 (C-2′，6′)，120.9 (C-1′)，115.1 (C-3′，5′)，104.0 (C-10)，100.9 (C-1″)，98.7 (C-6)，93.7 (C-8)，77.5 (C-3″)，76.4 (C-5″)，74.2 (C-2″)，69.9 (C-4″)，60.9 (C-6″)。以上数据与文献对照一致[7]，确定该化合物为山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物4：黄色粉末。ESI-MS m/z 433[M-H]-。1H-NMR (DMSO-d6，600 MHz)，δ12.64 (1H，s，H-5)，7.56 (1H，dd，J=2.2，8.4 Hz，H-6′)，7.48 (1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，6.85(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.41 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.59 (1H，d，J=1.1 Hz，H-1″)，3.16～4.16 (5H，m，H-2″-5″)；13C-NMR (DMSO-d6，150 MHz)，δ177.7 (C-4)，164.3 (C-7)，161.3 (C-5)，157.0 (C-9)，156.4 (C-2)，148.5 (C-4′)，145.1 (C-3′)，133.4 (C-3)，121.8 (C-6′)，121.0 (C-1′)，115.6 (C-5′)，115.5 (C-2′)，107.9 (C-1″)，104.0 (C-10)，98.7 (C-6)，93.6 (C-8)，85.9 (C-4″)，82.2 (C-2″)，77.0 (C-3″)，60.6 (C-5″)。以上数据与文献对照一致[5]，确定该化合物为槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(quercetin-3-O-α-L-arabinofuranoside)。

化合物5：黄色粉末。ESI-MS m/z 615[M-H]-。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)，δ7.56 (1H，dd，J=2.2，8.4 Hz，H-6′)，7.54 (1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.01 (2H，s，H-2‴，6‴)，6.71 (1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.33 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.17 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.19 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，4.33 (1H，dd，J=1.9，11.8 Hz，H-6″a)，4.27 (1H，dd，J=5.1，11.8 Hz，H-6″b)，3.45～4.60 (4H，m，H-2″-5″)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ179.3 (C-4)，168.2 (C-7‴)，166.0 (C-7)，162.9 (C-5)，159.3 (C-9)，158.4 (C-2)，149.7 (C-4′)，146.3 (C-3‴，5‴)，145.8 (C-3′)，139.8 (C-4‴)，135.3 (C-3)，123.5 (C-6′)，123.0 (C-1′)，121.2 (C-1‴)，117.2 (C-5′)，115.9 (C-2′)，110.0 (C-2‴，6‴)，105.4 (C-10)，104.3 (C-1″)，100.1 (C-6)，94.8 (C-8)，78.0 (C-3″)，75.9 (C-5″)，75.7 (C-2″)，71.4 (C-4″)，64.4 (C-6″)。以上数据与文献对照一致[8]，确定该化合物为槲皮素-3-O-(6″-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖苷 (quercetin-3-O-(6″-O-galloyl)-β-glucopyranoside)，为首次从该植物中分离得到。

化合物6：黄色粉末。ESI-MS m/z 417[M-H]-。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)，δ8.05 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.88 (2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，5′)，6.39 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.14 (1H，d，J=6.3 Hz，H-1″)，3.39～3.90 (5H，m，H-2″-4″，H-5″a，5″b)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ179.6 (C-4)，166.2 (C-7)，163.1 (C-5)，161.6 (C-4′)，158.8 (C-2)，158.5 (C-9)，135.5 (C-3)，132.3 (C-2′，6′)，122.6 (C-1′)，116.2 (C-3′，5′)，105.6 (C-10)，104.4 (C-1″)，100.6 (C-6)，94.8 (C-8)，δ74.0 (C-3″)，δ72.8 (C-2″)，δ68.9 (C-4″)，δ66.7 (C-5″)。以上数据与文献对照一致[9]，确定该化合物为山柰酚-3-O-α-D-吡喃阿拉伯糖苷(kaempferol-3-O-α-D-arabinopyranoside)。

化合物7：黄色粉末。ESI-MS m/z 417[M-H]-。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)，δ8.03 (2H，d，J=8.9 Hz，H-2′，6′)，6.88 (2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，5′)，6.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.18 (1H，d，J=7.3 Hz，H-1″)，3.08～3.78 (5H，m，H-2″-4″，H-5″a，5″b)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ179.4 (C-4)，166.4 (C-7)，163.1 (C-5)，161.7 (C-4′)，158.9 (C-2)，158.5 (C-9)，135.3 (C-3)，132.3 (C-2′，6′)，122.7 (C-1′)，116.1 (C-3′，5′)，105.6 (C-10)，104.6 (C-1″)，100.0 (C-6)，94.8 (C-8)，77.5 (C-3″)，75.3 (C-2″)，71.0 (C-4″)，67.2 (C-5″)。以上数据与文献对照一致[10]，确定该化合物为山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖苷(kaempferol-3-O-β-D-xylopyranoside)。

化合物8：黄色粉末。ESI-MS m/z 417[M-H]-。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)，δ7.96 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.92 (2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，5′)，6.39 (1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.48 (1H，s，H-1″)，3.48～4.32 (5H，m，H-2″-4″，H-5″a，5″b)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ179.9 (C-4)，166.7 (C-7)，163.1 (C-5)，161.6 (C-4′)，159.3 (C-9)，158.6 (C-2)，134.9 (C-3)，132.0 (C-2′，6′)，122.8 (C-1′)，116.5 (C-3′，5′)，109.7 (C-1″)，105.5 (C-10)，100.1 (C-6)，94.9 (C-8)，88.0 (C-4″)，83.2 (C-2″)，78.6 (C-3″)，62.5 (C-5″)。以上数据与文献对照一致[11]，确定该化合物为山柰酚-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(kaempferol-3-O-α-L-arabinofuranoside)。

化合物9：白色粉末。ESI-MS m/z 197[M-H]-。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)，δ7.08 (2H，s，H-2，6)，4.28 (2H，q，CH2)，1.34 (3H，t，CH3)；13C-NMR (CD3OD，150MHz)，δ168.5 (C-7)，146.4 (C-3，5)，139.6 (C-4)，121.7 (C-1)，110.0 (C-2，6)，61.7 (CH2)，14.6 (CH3)。以上数据与文献对照一致[12]，确定该化合物为没食子酸乙酯(ethyl gallate)。

化合物10：褐色粉末。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)。δ7.59 (1H，d，J=15.8 Hz，H-β)，7.17 (1H，d，J=1.5 Hz，H-2)，7.06 (1H，dd，J=1.5，8.1 Hz，H-6)，6.81 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.31 (1H，d，J=15.8 Hz，H-α)，3.89 (3H，s，OCH3)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ171.4 (C=O)，150.6 (C-3)，149.5 (C-4)，146.9 (C-β)，128.0 (C-1)，124.1 (C-6)，116.6 (C-5)，115.8 (C-α)，111.8 (C-2)，56.6 (OCH3)。以上数据与文献对照一致[13]，确定该化合物为反式阿魏酸(trans-ferulic acid)，为首次从该植物中分离得到。

化合物11：红褐色粉末。1H-NMR (CD3OD，600 MHz)。δ7.41 (2H，m，H-2，6)，6.79 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，4.29 (2H，q，J=7.1 Hz，CH2)，1.34 (3H，t，J=7.1 Hz，CH3)；13C-NMR (CD3OD，150 MHz)，δ168.6 (C=O)，151.9 (C-4)，146.4 (C-3)，123.8 (C-1)，123.1 (C-2)，117.6 (C-5)，116.0 (C-6)，61.8 (CH2)，14.8 (CH3)。以上数据与文献对照一致[14]，确定该化合物为原儿茶酸乙酯 (ethyl protocatechuate)，为首次从该植物中分离得到。

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StudyonChemicalConstituentsfromAnti-dermatophytesFractionofEuphorbiahumiusa

LI He1，ZHAO Ning1，DAWUTI Gulnar2，LI Zhijian3，4，AIBAI Silafu3，4，PAN Ruile1*

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience，PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.UighurMedicineHospitalofXinjiangAutonomousRegion，Urumqi830049，China；3.XinjiangInstituteofTraditionalUighurMedicine，Urumqi830049，China；4.KeyLaboratoryofTraditionalUighurMedicinePrescription，Urumqi830049，China)

Objective：To study the chemical constituents from the anti-dermatophytes fraction ofEuphorbiahumifusa.Methods：The chemical constituents were isolated and purified by combination of silica gel，MCI GEL CHP 20P，Sephadex LH-20 column，and preparative HPLC chromatography.Elucidation of the structures of the isolated compounds was mainly based on the spectroscopic date.Results：Eight flavonols and three phenolic acids were isolated and their structures were elucidated as kaempferol (1)，quercetin (2)，kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside (3)，quercetin-3-O-α-L-arabinofuranoside (4)，quercetin-3-O-(6″-O-galloyl)-β-glucopyranoside (5)，kaempferol-3-O-α-D-arabinopyranoside (6)，kaempferol-3-O-β-D-xylopyranoside (7)，kaempferol-3-O-α-L-arabinofuranoside (8)，ethyl gallate (9)，trans-ferulic acid (10)，ethyl protocatechuate (11).Conclusion：Flavonols and phenolic acids were main chemical constituents of the anti-dermatophytes fraction ofE.humifusa.Compounds5，10and11were obtained from this genus for the first time.

EuphorbiahumifusaWilld.；active fraction；dermatophytes ；flavonols；phenolic acids

新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目(201517112)

] 潘瑞乐，研究员，研究方向：天然产物化学，Tel：(010)57833286，E-mail：rlpan@implad.ac.cn；李治建，副研究员，研究方向：药理毒理学，Tel：(0991)2509733，E-mail：lizhijian0220@ sina.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.5.008

2016-11-24)

*[