芜菁中氯原酸提取方法及定量分析研究

阿合提·阿巴斯

（新疆兵团农二师第五中学，新疆 喀什 844200）

芜菁中氯原酸提取方法及定量分析研究

阿合提·阿巴斯

（新疆兵团农二师第五中学，新疆 喀什 844200）

对不同来源的芜菁中提取氯原酸进行讨论，提出采用高效液相色谱法进行氯原酸含量的测定。建立Agilent HC-C18色谱柱（4.6×250mm,5-μm）,柱温30℃，流动相为甲醇70%～0.5%H2PO330%，检测波长327 nm，流速1.0 mL/min。结果证明，该方法简便易行、处理方便、重复性好，线性关系良好，且测定数据稳定。本法可作为芜菁中氯原酸的定量分析方法。

氯原酸；芜菁；提取；高效液相色谱；含量测定

芜菁为十字花科，又名大头菜、蔓青、圆根、台采、扁萝卜等。维吾尔等少数民族称芜菁为恰玛古（Qamagur）。芜菁的肉质形状有扁圆、圆、圆柱形，皮色有白色、紫红色，肉色有白色、淡金黄色[1]。芜菁在新疆南部种植非常广泛，一年四季都能吃到芜菁，开春下种，4—5月可食嫩叶和根茎，而主要食用季节为冬季至来年3月，肉质含有大量的VA，VB，VB1，VC及多种糖类、氨基酸、尼克酸、蛋白质、脂肪、纤维素、铁、钙、磷等矿物质[1-2]。同时，芜菁还是维吾尔医生常用药物，具有清热除湿、润肺解毒、清肝明目、消食下气、止咳止渴、补肾生精等功能，常用于治疗性功能减退等症[3]，主要含有黄酮类、苯丙素类及氯原酸等化学成分，这些也是氯原酸的主要来源。

氯原酸是由咖啡糅酸与奎尼酸（鸡纳酸）组成的缩酚酸，异名为咖啡糅酸，化学名称为3-O-咖啡酰奎尼酸，分子式为C16H18O9，分子量345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，呈半水状或微黄色针壮晶体[4]。绿原酸是一种具有广泛活性和药理活性的物质，具有抗菌、抗病毒、止血、增高白血球数、降血压、保肝利胆、降血脂的功效，对急性咽喉炎、皮肤病有显著疗效，有清除自由基和兴奋中枢神经系统等药理作用[5]；对消化系统、血液系统和生殖系统疾病均有疗效；对金葡萄球菌、溶血性键球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌有抑制作用[6]，因此，氯原酸在制剂上应用越来越广泛。目前，有关氯原酸生物活性的研究已经深入到食品、保健品、医药等多个领域。

氯原酸是一种广泛存在于中草药、高等双子叶植物的化学成分，含量较高的植物有杜仲、向日葵、金银花、端木、可可树、咖啡等。另外，水果、蔬菜、大豆、小麦、绿茶等食品中都有氯原酸类物质，尽管氯原酸在植物界广泛存在，但含量较高的植物并不多见。高纯度氯原酸价格昂贵，是目前国际公认的“植物黄金”[7]，因此，氯原酸提取受到国内外学者的普遍关注。所以，进一步研究和优化测定氯原酸含量的方法十分重要。

随着科学技术的发展，国内外产生了很多测定方法。关于氯原酸的测定主要有纸层析-紫外分光光度法、薄层层析法、薄层扫描法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等。其中高效液相色谱法是使用最为广泛的方法。虽然关于用HPLC法分别或同时测定氯原酸的含量有较多报道，但是用HPLC法来测定芜菁中氯原酸的含量还没报道。新疆维吾尔药食物芜菁中氯原酸的测定成为食品分析的重要项目之一。为了提高测定效率，节省溶剂，评价和比较药食物芜菁中氯原酸的含量，试验建立HPLC法测定氯原酸含量，用不同提取法比较不同产地芜菁中氯原酸的含量，为新疆维吾尔药食物芜菁的全面分析、鉴定提供试验依据。该法能快速测定，灵敏度高、选择性好、方法简便易行，是测定芜菁中氯原酸的理想方法。

1 实验部分

1.1 仪器和药品

1.1.1 实验仪器

北京LC981高效液相色谱仪器，包括P981高压输液泵、UV981可变波紫外可见分光检测器、T98柱温箱，101A-1型干燥箱（上海市实验仪器总厂），FA2104N型电子天平 （上海民桥精密科学有限公司），FW100型高速粉碎机（北京市永光明区疗仪器厂），KQ3200ED型数控超声波清洗器（昆市超声仪器有限公司）。

1.1.2 实验药品

氯原酸（分析纯）对照品由上海晶纯试剂有限公司提供，批号7572；甲醇（色谱纯）；无水乙醇（分析纯）、磷酸（分析纯）。

1.1.3 样品来源

芜菁原料来源于喀什色满和伽师县等地。

1.2 实验方法

1.2.1 对照品溶液的制备

紧密称取对照品氯原酸0.005 0 g，用甲醇溶解并定容至25 mL容量瓶中，配制成浓度为200 ug/mL的对照品溶液，备用。

1.2.2 样品溶液的制备

将新鲜芜菁切成片，在干燥箱中70℃干燥8 h，在超速粉碎机粉碎后，准确称取芜菁粉末2.000 0 g，置25 mL容量瓶中，加乙醇至定容，浸泡48 h，超声波提取3次，每次15 min，用0.45 ug滤膜过滤，备用。

1.2.3 色谱条件

色谱柱：Agilent HC-C18色谱柱 （4.6×250 mm，5-μm）；流动相为甲醇-0.5%H2PO330%；柱温30℃；检测波长327 nm；流速1.0 mL/min；进样量20 uL。按上述色谱条件下测定氯原酸，色谱图见图1和图2。

图1 对照品的色谱图

图2 样品的色谱图

2 结果与讨论

2.1 样品含量的测定

分别紧密称取芜菁样品的叶、根、茎各2.000 0 g，按“1.2.2”所述方法制备样品溶液注入高效液相色谱仪,测定氯原酸的峰面积，按外表法计算，测定结果见表1。

从表1可以看出，不同地区芜菁中氯原酸的含量存在着一定的差异，叶子中所占氯原酸的含量比根茎中的较大，超声后得到氯原酸效果好，且含量高。

表1 样品测定结果（mg/g）

3 结论

本实验以不同地区的芜菁为原料，用高效液相色谱-紫外可见分光检测器进行色谱分析，采用外表法测定氯原酸的含量。结果表明，不同地区芜菁中氯原酸的含量存在着一定的差异，原因可能是由于土壤质量不同而造成的。

叶子中所占氯原酸的含量比根茎中的较大，超声后得到氯原酸效果好，且含量高。原因是超声波能击碎细胞壁，使细胞内组分化，渗透至溶液中，从而达到充分分离，提取率高的目的。本实验中采用的方法，操作简单，处理方便，测定迅速，数据准确，结果可靠，适合于测定芜菁中氯原酸的含量。

[1]谢英彪，颜培增，刘光隆.食物营养与食疗宝典[M].北京:人民军医出版社，2007.

[2]方韬万.芜菁[J].食品与生活，2005(5):46.

[3]马龙，邓淑文，屈卫东.新疆芜菁抗衰老作用的实验研究[J].新疆医科大学学报，1998,21(4):62.

[4]尉芹，马稀汉，景谦平.杜仲叶中氯原酸提取工艺条件研究[J].林产化学与产业，2001，21(4):27～32.

[5]黄绍重.氯原酸的提取及应用[J].应用化工，2006，35(6):467.

[6]任键，刘晓兰.葵花籽仁酶解体系中氯原酸的分离纯化技术[J].中国油脂，2007,32(1):59.

[7]刘军海，任惠兰.氯原酸提取与纯化分离方法研究进展[J].粮食与油脂，2007，(7):42.

1005-2690（2016）06-0116-02

：S631.3

：A

2016-04-25）