153例汉族哮喘患者GLCCI1基因rs37973位点多态性及吸入糖皮质激素治疗反应

邱玉明，李剑雄，李慧

(深圳市宝安区人民医院，广东深圳518100)



153例汉族哮喘患者GLCCI1基因rs37973位点多态性及吸入糖皮质激素治疗反应

邱玉明，李剑雄，李慧

(深圳市宝安区人民医院，广东深圳518100)

目的 观察中国汉族哮喘患者糖皮质激素诱导转录因子1(GLCCI1)基因rs37973位点的多态性，并比较不同基因型患者吸入糖皮质激素(ICS)的治疗反应。方法 选择中国汉族哮喘患者153例，给予吸入布地奈德200μg、2次/d，治疗12周。治疗前采集静脉血，采用PCR法观察GLCCI1基因rs37973位点多态性。对所有患者进行哮喘控制测试评分(ACT)。分别于治疗前及治疗后12周进行肺功能检测，记录第一秒用力呼气容积(FEV1)、第一秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1/Pred%)、第一秒用力呼气容积占用力肺活量的百分比(FEV1/FVC%)，计算FEV1改善率与ΔFEV1/预计值%。结果 纳入患者GLCCI1基因rs37973位点存在多态性现象，包括AA基因型36例(23.5%)、AG基因型91例(59.5%)、GG基因型26例(17.0%)。三种基因型患者年龄、性别、体质量指数差异无统计学意义，治疗前ACT评分、FEV1、FEV1/Pred%、FEV1/FVC%差异均无统计学意义。GLCCI1基因rs37973位点AA、AG、GG型患者ICS治疗后FEV1改善率、ΔFEV1/预计值%逐渐降低，三组两两相比，P均<0.05。结论 汉族哮喘患者存在GLCCI1基因rs37973位点多态性现象，其中AA基因型哮喘患者ICS治疗后肺功能改善情况优于AG、GG基因型哮喘患者。GLCCI1基因rs37973位点多态性可能与哮喘患者ICS治疗反应存在一定相关性。

支气管哮喘；糖皮质激素诱导转录因子1基因；基因多态性；吸入糖皮质激素

支气管哮喘(以下简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病，以气道高反应性(AHR)为特征。目前支气管哮喘的发病原因及机制尚未完全明确，但哮喘发病具有家族聚集性特点和明显的遗传倾向。全基因组关联分析(GWAS)为哮喘相关基因的研究提供了新手段。

Tantisira等[1]研究发现，对吸入糖皮质激素(ICS)治疗反应下降的哮喘患者可伴糖皮质激素诱导转录因子1基因(GLCCI1基因)rs37973位点变异。本研究观察了我国汉族人群GLCCI1基因rs37973位点多态性情况，并比较不同基因型患者ICS的治疗反应，以期通过GLCCI1基因型为哮喘患者的个体化治疗方案选择提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年7月～2015年6月就诊的汉族哮喘患者153例纳入研究，男91例、女62例，年龄18～70岁。所有患者均根据《支气管哮喘防治指南》确诊，均为初诊病例或既往诊断哮喘但未规范治疗，近4周内未全身使用激素或吸入糖皮质激素，近2周未使用白三烯调节剂类药物，入选前4周无呼吸道感染。给予吸入布地奈德200 μg、2次/d，共治疗12周，期间可根据病情按需吸入快速缓解药沙丁胺醇气雾剂。患者均签署知情同意书。

1.2 GLCCI1基因rs37973位点多态性观察 治疗前采集患者抗凝静脉血2 mL、离心、吸取白细胞层，提取基因组DNA。GLCCI1基因上游引物序列为5′-TGTACGTGAAAGTGACCCCTG-3′，下游引物序列为5′-AGCTGAGTTTTCGTGACCAGT -3′，产物扩增长度为576 bp。PCR反应总体系为50 μL，含提取基因组DNA 1 μL、10×Buffer缓冲液25 μL、Tap DNA聚合酶1.25 U、2.5 mmol/L的脱氧核糖核苷酸(dNTP)混合物10 μL、上游引物和下游引物各1 μL。PCR反应条件：94 ℃预变性5 min，98 ℃变性10 s，60 ℃退火30 s，68 ℃延伸40 s，共38个循环，72 ℃终末延伸10 min。使用3730测序仪进行双向PCR产物测序反应，并将测序结果用BLAST软件与数据库中已登录的序列进行同源性分析。

1.3 哮喘控制测试评分(ACT)方法 询问患者过去4周内哮喘控制情况(包括哮喘发作次数、夜间哮喘、哮喘对日常生活的影响等多个方面)并进行计分，总分25分，分数越高表明哮喘控制越好，症状越轻。ACT 25分为完全控制，ACT 20～24分为良好控制，ACT<20分为未控制。

1.4 肺功能检测 治疗前及治疗后12周进行肺功能检测，记录第一秒用力呼气容积(FEV1)、第一秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1/Pred%)、第一秒用力呼气容积占用力肺活量的百分比(FEV1/FVC%)。根据公式计算FEV1改善率与ΔFEV1/预计值%：FEV1改善率=(ΔFEV1治疗后数值-治疗前数值/FEV1治疗前数值)×100%；ΔFEV1/预计值%=治疗后数值-治疗前数值。

1.5 统计学方法 采用SPSS19.0软件进行统计学处理。组间等位基因型或等位基因频率比较采用χ2检验；计量资料用表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1GLCCI1基因rs37973位点多态性 纳入患者GLCCI1基因rs37973位点存在多态性现象，包括AA基因型36例(23.5%)，男21例、女15例，年龄(43.5±2.9)岁；AG基因型91例(59.5%)，男55例、女36例，年龄(43.3±4.0)岁；GG基因型26例(17.0%)，男15例、女11例，年龄(46.7±5.0)岁。三种基因型患者年龄、性别、BMI相比，P均>0.05；治疗前ACT评分、FEV1、FEV1/Pred%、FEV1/FVC%，P均>0.05。详见表1。

表1 不同基因型哮喘患者治疗前BMI、ACT评分、FEV1、FEV1/Pred%、FEV1/FVC%比较

2.2 不同基因型哮喘患者ICS治疗反应比较 GLCCI1基因rs37973位点AA、AG、GG型患者ICS治疗后FEV1改善率、ΔFEV1/预计值%逐渐降低，三组两两相比，P均<0.05。详见表2。

表2 不同基因型哮喘患者肺功能改变情况比较

3 讨论

ICS是最常用的、有效的控制哮喘发作的药物[2]。哮喘患者对糖皮质激素的反应有个体差异性。部分患者尽管规范使用ICS甚至使用高剂量ICS，病情仍迁延反复，肺功能逐渐下降，研究[3～6]表明这些个体差异性与遗传因素相关。GLCCI1基因位于7p21.3，包含8个外显子。GLCCI1的功能目前还不完全清楚。Tantisira等[1]通过全基因组关联分析和药物基因组学研究得出：在白种人中，GLCCI1基因的启动子rs37972位点与rs37973位点存在完全连锁不平衡。rs37973位点存在基因多态性，表现为AA、AG、GG三种基因型。表型为AA型的哮喘患者在经过4～8周ICS治疗后FEV1/预计值%的改善值比GG型明显升高。在体外实验中发现rs37973位点突变型GG与荧光素酶活性显著下降相关，即与GLCCI1的表达减少相关。因此，可能正是GLCCI1表达的减少，减弱了哮喘患者对糖皮质激素的反应。本研究结果表明，我国汉族哮喘患者也存在GLCCI1基因rs37973位点多态性，我们分析文献[7]数据发现，我国汉族哮喘患者与非西班牙裔白人哮喘患者GLCCI1基因rs37973位点的3种基因型频率分布差异无统计学意义，提示rs37973位点多态性存在于不同地域和不同种群的哮喘患者中。我们发现，哮喘组3种基因型患者的治疗前ACT评分、FEV1、FEV1/Pred%、FEV1/FVC%差异无统计学意义，提示rs37973位点多态性可能与哮喘发病无相关性。

有学者[8]通过对哮喘进行患者研究得出，GLCCI1基因rs37973位点多态性与哮喘患者对ICS的治疗反应相关。2014年Izuhara等[9]研究发现，GLCCI1基因rs37973多态性与长期接受ICS治疗的哮喘患者肺功能下降有关，认为GLCCI1基因rs37973多态性有助于预测哮喘患者对ICS治疗的反应。而有学者[10]通过对来自7个临床研究的1 916例哮喘患者进行研究发现，在白种人群中，GLCCI1基因rs37973位点多态性与ICS的治疗反应无相关性。

Tantisira等[1]研究显示，GLCCI1基因rs37973位点表型为野生纯合型(AA)患者在ICS治疗后FEV1/预计值%的变化为9.4%±0.26%，而突变纯合型(GG)变化值仅是野生纯合型的三分之一(3.2%±1.6%)。本研究结果显示rs37973位点表型为AA型患者ICS治疗后ΔFEV1/预计值%为9.10%±1.10%，GG型患者为4.10%±0.14%。我们还对不同rs37973位点基因型的哮喘患者的ΔFEV1、FEV1改善率、ΔFEV1/预计值%进行比较，结果发现AA、AG、GG型患者ICS治疗后FEV1改善率、ΔFEV1/预计值%逐渐降低，三组两两相比，差异均有统计学意义，表明AA基因型哮喘患者ICS治疗后肺功能改善情况优于AG及GG基因型患者，提示在中国汉族人群，GLCCI1基因rs37973位点多态性也有助于预测哮喘患者对ICS治疗的反应。该位点变异可能通过GLCCI1的表达减少，而起到减弱ICS改善肺功能的作用。GLCCI1可能是糖皮质激素诱导炎症细胞凋亡的早期信号[11]，该位点变异可能通过抑制炎症细胞凋亡，减弱了ICS治疗效果。值得注意的是，本研究样本量较小，可能导致统计效力不强，仍需扩大样本量做进一步研究，证实GLCCI1基因rs37973位点多态性与ICS治疗反应的关系。

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深圳市宝安区科技局课题(2014018)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.39.032

R562.2

B

1002-266X(2016)39-0094-03

2016-07-04)