膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2、E-钙黏附蛋白的表达变化及其意义

钟晓健，黄洪才，叶东明，韩跃辅，方海林，彭潋，陈清江，潘斌

( 1粤北人民医院，广东韶关512000；2 暨南大学附属第一医院)



膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2、E-钙黏附蛋白的表达变化及其意义

钟晓健1，黄洪才1，叶东明1，韩跃辅1，方海林1，彭潋1，陈清江1，潘斌2

( 1粤北人民医院，广东韶关512000；2 暨南大学附属第一医院)

目的 观察膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和 E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达变化，并探讨其意义。方法 选取57例份膀胱尿路上皮癌患者的肿瘤组织标本为观察组,15例份正常膀胱组织标本为对照组，采用免疫组化SP法检测两组ZEB2和E-cadherin蛋白。分析ZEB2、E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系及二者表达的相关性。 结果 观察组、对照组ZEB2蛋白表达阳性率分别为50.9%(29/57)、13.3%(2/15)，二者相比，P<0.05。观察组、对照组E-cadherin蛋白表达阳性率分别为33.3%(19/57)、80%(12/15)，二者相比，P<0.05。ZEB2蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者TNM分期、是否存在淋巴结转移情况有关，P均<0.05。E-cadherin 蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者病理分级、TNM分期有关，P均<0.05。Spearman等级相关性分析表明膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2、E-cadherin蛋白的表达呈负相关(r=-0. 611，P=0.000)。结论 膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2蛋白高表达、E-cadherin蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中低表达。ZEB2、E-cadherin的异常表达可能与膀胱尿路上皮癌的发生、发展有关。

膀胱尿路上皮癌；膀胱肿瘤；E盒锌指结合蛋白2；E-钙黏附蛋白

膀胱尿路上皮癌是最常见的膀胱癌类型[1,2]。膀胱癌的生物学特性为易复发、侵袭及转移。上皮间质转化(EMT)[3]在肿瘤细胞侵袭和迁移有着重要作用E-cadherin在维持正常上皮组织完整性及抑制细胞离散等方面起重要作用，可促进肿瘤的侵袭和转移。E盒锌指结合蛋白2(ZEB2)通过与E-cadherin启动子区的E盒结合，抑制E-cadherin蛋白的表达，诱导肿瘤细胞上皮-间质转化，从而促进肿瘤细胞的转移和侵袭[4,5]。有报道显示ZEB2 在多种肿瘤组织(结肠癌、胃癌、乳癌等)中促进肿瘤细胞的侵袭、转移[6,7]。但ZEB2蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中的表达相关研究报道较少。本研究观察了膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2和 E-cadherin的表达变化，并分析其与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系，为膀胱尿路上皮癌的早期诊断、预后判断和治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院2012年5月～2014年6月间收治住院的57例膀胱尿路上皮癌患者，患者中男50 例、女7 例；年龄 33～88 (57.4 ±14.3)岁；肿瘤分期Ta-121例，T2～436例，57例患者根据分化程度分为低分化者(G1期)23例、高分化者(G2、G3期)34 例。分别取膀胱尿路上皮癌组织标本57例份为观察组，另选择15例临床诊断为良性前列腺增生患者，男7例、女8例，年龄56～81(68.2 ± 7.2)岁；取15例份正常膀胱组织标本为对照组。本研究获得医院伦理委员会的批准。

1.2 ZEB2和E-cadherin蛋白检测方法 所有标本均经4%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，5 μm连续切片。采用SP法检测标本中ZEB2和E-cadherin蛋白，以PBS代替一抗作为阴性对照。ZEB2蛋白以细胞的胞核和(或)胞质出现棕黄色颗粒为阳性；E-cadherin以细胞胞膜和(或)胞质出现棕黄色颗粒为阳性。每张切片随机取5个400倍视野，阳性判定以阳性细胞数及染色强度综合判定。阳性细胞百分比积分按视野内阳性细胞所占总细胞数的比例计分，无阳性细胞计0分，1%～25%计1分， 26%～50%计2分，51%～75%计3分，76%～100%计4分；染色强度无着色计0分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；二者相加，<2分为阴性，≥2分为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计量资料采用表示，计数资料用χ2检验，Spearman等级相关分析法进行相关性分析。 P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组ZEB2和E-cadherin蛋白表达比较ZEB2蛋白染色主要位于细胞质，也可出现细胞核，呈浅黄色至棕褐色颗粒。观察组、对照组ZEB2蛋白表达阳性率分别为50.9%(29/57)、13.3%(2/15)，二者相比，P<0.05。E-cadherin蛋白染色主要位于细胞膜，观察组、对照组E-cadherin蛋白表达阳性率分别为33.3%(19/57)、80%(12/15)，二者相比，P<0.05。

2.2ZEB2和E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系ZEB2蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者肿瘤TNM分期、是否存在淋巴结转移情况有关，P均<0.05；而与年龄、性别差异均无关，P均>0.05。E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者病理分级、TNM分期有关，P均<0.05；而与年龄、性别差异、是否存在淋巴结转移情况均无关，P均>0.05。见表1。

表1 ZEB2、E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系

2.3 ZEB2和及E-cadherin蛋白表达的相关性 Spearman等级相关性分析表明膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2、E-cadherin蛋白的表达呈负相关(r=-0.611，P=0.000)。

3 讨论

ZEB2基因属于E盒结合锌指蛋白基因家族，该家族参与脊椎动物的胚胎发育，其通过调控EMT过程而参与肿瘤发生和发展。已证实EMT参与肿瘤细胞的浸润，并在肿瘤转移中起着关键作用。EMT受转录抑制子如(ZEBl、ZEB2、Snail和Slug)等调控，ZEB2与E-cadherin基因启动子上[CACCT(G)]结合，抑制其转录和翻译，诱导肿瘤细胞发生EMT，促进肿瘤的侵袭转移[4, 8]。有报道显示ZEB2 在多种肿瘤组织(结肠癌、胃癌、乳腺癌等)中促进肿瘤细胞的侵袭、转移[6,7]。然而，ZEB2蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中的表达相关研究报道尚少。

E-cadherin蛋白是EMT中的关键因子，对维持正常上皮细胞极性、组织完整性及抑制细胞离散起重要作用，其表达下降促进EMT的进展，导致恶性肿瘤侵袭、转移[9～10]。本研究结果显示，E-cadherin蛋白的表达在膀胱癌组织分化程度、TNM临床分期及淋巴结转移等因素上差异有统计学意义，即随恶性肿瘤的有淋巴结 转移、临 床 分 期 越 晚 和 分 化 程 度 越 差，E-cadherin蛋白阳性表达率明显下调或缺失，与陈梅香等[11]报道E-cadherin蛋白的表达下调或缺失与膀胱癌的分化程度和转移密切相关的观点一致。

本研究结果显示,ZEB2蛋白主要定位于细胞质，在正常膀胱组织及膀胱癌组织中的阳性表达率分别为13.3%(2/15)和50.9%(29/57)，差异有统计学意义。与国内学者报道ZEB2在卵巢癌组织中高表达结果一致[10]，其发现在卵巢癌和正常卵巢组织中ZEB2蛋白的阳性表达率分别为49.2%和30.8%，ZEB2 蛋白的表达与 EOC 病理分型、FIGO 分期、T 分期、淋巴结转移有关，认为其促进卵巢癌的发展、浸润和转移。

另有研究发现在肺癌、肝癌等肿瘤，淋巴结微转移灶中ZEB1和ZEB2表达升高，E-cadherin表达降低，两者表达呈负相关，亦认为促进转移瘤生长[12]。本研究中，ZEB2蛋白与E-cadherin蛋白两者在膀胱癌组织表达呈负相关，我们认为可能原因为ZEB2通过与E-cadherin启动子区的E-box结合，调控E-cadherin等细胞黏附分子表达，抑制其表达，降低膀胱正常细胞与细胞之间、膀胱癌细胞与组织基质之间黏附力，而促进膀胱癌浸润和转移[4,6]。

本组57例膀胱癌组织中，ZEB2蛋白和E-cadherin 蛋白表达与肿瘤侵袭、TNM分期有关，差异具有统计学意义，肌层浸润性膀胱癌表达显著高于非肌层浸润性膀胱癌；转移性膀胱癌(包括淋巴结转移和/或远处转移)组织中ZEB2蛋白表达要显著高于无转移性膀胱癌，在有淋巴结转移的膀胱癌中组织ZEB2蛋白高表达，说明其表达有可能促进肿瘤淋巴结转移，与既往相关研究报道相符[6, 13]。王庆海等[14]研究发现卵巢癌临床分期增加，有淋巴结转移患者阳性表达率远高于无淋巴转移者。ZEB2在膀胱癌中过表达，与膀胱癌转移和临床分期密切相关，表明ZEB2在膀胱癌转移中发挥作用，促进肿瘤的侵袭和转移，有可能成为评价膀胱癌发展、转移的一个新的指标。另有学者[13]研究发现ZEB2在膀胱癌过表达与患者预后有关，认为其可介导肿瘤发生EMT，另有抗癌细胞调亡作用。我们认为ZEB2作为转录因子，参与了膀胱癌发生、发展，并可作为预后评判指标及膀胱癌治疗新的干预靶点，为临床诊治膀胱癌提供崭新的思路。

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Expression and significance of ZEB2 and E-cadherin protein in urothelial carcinoma of urinary bladder

ZHONGXiaojian1,HUANGHongcai,YEDongming,HANYuefu,FANGHailin,PENGLian,CHENQingjiang,PANBin

(1YuebeiPeople′sHospital,Shaoguan512000,China)

Objective To investigate the expression and clinical significance of E-box binding zinc finger protein 2 (ZEB2) and E-cadherin in urothelial carcinoma of urinary bladder. Methods The protein expression of ZEB2 and E-cadherin from 57 cases of tumor tissue specimens in patients with bladder urothelial carcinoma (observation group) and 15 cases of normal bladder tissue specimens (control group) was detected by immunohistochemistry, and the relationships between the expression of ZEB2 and E-cadherin and clinicopathological features of bladder urothelial carcinoma as well as the correlation between them were investigated.Results The positive expression rates of ZEB2 in the observation group and the control group were 50.9%(29/57)and 13.3% (2/15), respectively (P<0.05). The positive expression rates of E-cadherin in the observation group and the control group were 80% (12/15) and 33.3% (19/57), respectively (P<0.05). The expression of ZEB2 protein was correlated with TNM staging and lymph node metastasis of bladder urothelial carcinoma, and the expression of E-cadherin protein was correlated with pathological grade and TNM stages of bladder urothelial carcinoma (allP<0.05). Spearman rank correlation analysis showed that the expression of ZEB2 and E-cadherin protein in bladder urothelial carcinoma was negatively correlated (r=-0. 611,P=0.000).Conclusion ZEB2 protein is highly expressed and E-cadherin protein is low expressed in patients with urothelial carcinoma of urinary bladder, and the abnormal expression of ZEB2 and E-cadherin may be related to the occurrence and development of bladder urothelial carcinoma.

urothelial carcinoma of urinary bladder; urinary bladder neoplasms; E-box binding zinc finger protein; 2E-cadherin

广东省自然科学基金-博士启动项目(2015A030310250)；广东省医学科学技术研究基金项目(A2015557)； 韶关市医药卫生科研计划项目(Y14018)。

钟晓健(1982-)，男，硕士学位，主要研究方向为膀胱癌基础研究。E-mail: zhongxiaojian2016@126.com

简介：潘斌(1983-)，男，博士学位，主要研究方向泌尿系肿瘤基础与临床研究。E-mail： urol8518@126.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.39.003

R737

A

1002-266X(2016)39-0009-03

2016-07-23)