一例奶牛子宫内膜炎的细菌分离鉴定及药敏试验

傅晓雪

（肇庆农业学校，广东　肇庆　526000）

一例奶牛子宫内膜炎的细菌分离鉴定及药敏试验

傅晓雪

（肇庆农业学校，广东肇庆526000）

从广东省肇庆市某奶牛场采集3头患有子宫内膜炎的奶牛的子宫分泌物，通过细菌培养镜检及生化试验鉴定，初步筛查其主要致病菌为金黄色葡萄球菌。对其进行药敏试验，结果表明新霉素及氟苯尼考具有较好的抑菌作用，可作为此次治疗的选择参考。

奶牛；子宫内膜炎；病原菌；药敏试验

子宫内膜炎为奶牛常见疾病，是造成不孕症的重要原因之一，而奶牛不孕症又已成为一个主要的世界经济问题。本病若不及时治疗，往往会导致奶牛不育而被淘汰。每年国内外奶牛不孕症所造成的经济损失都相当大。奶牛子宫内膜炎的直接病因是病原微生物的感染，据资料报道，已发现引起子宫内膜炎的病原微生物包括细菌、真菌、支原体、霉形体、病毒及寄生虫等，而病原性细菌在奶牛子宫内膜炎的发生中起着最重要的作用。

1　材料与方法

1.1材料

（1）主要仪器及设备。高压灭菌锅、冰箱、DHU-9246A型电热恒温培养箱、SW-CJ-JBu型单人单面无菌操作台等。

（2）培养基与试剂。微量生化鉴定管：北京陆桥技术有限责任公司

常用药敏试纸：杭州天和微生物试剂有限责任公司。自制药敏试纸。

（3）病例选择。根据奶牛临床型子宫内膜炎的诊断标准，选自奶牛场病牛3头，临床表现为精神沉郁，体温稍升高，食欲弱，产奶量下降，从阴门流出少量黏性或脓性分泌物，带有污红色，阴道开殖器打开引导检查，子宫颈稍张开，从子宫颈内有分泌物排出。

1.2方法

（1）病料采取。病牛阴户用温水清洗，0.2%新洁尔灭消毒灭菌后，按直肠把握法将事先已装有输精管的输精枪插入子宫内，粘取子宫分泌物放入无菌试管中，密封后尽快送回实验室进行细菌培养鉴定。

（2）细菌培养鉴定。采取病牛的子宫内分泌物，进行涂片或触片用革兰氏染色法镜检，观察细菌形态，同时接种于普通琼脂培养基、血培养基、麦康凯琼脂培养基上，37℃恒温培养24～48h，对细菌生长情况及菌落特征进行观察，并染色镜检。挑取单个菌落接种于鞋面培养基上，普通肉汤中37℃恒温培养24～48h，再进行涂片染色镜检，若为纯培养，则置于4℃的冰箱中保持备用。

另取已纯化的试验菌种，分别接种于葡萄糖半固体培养基、麦芽糖、蔗糖、尿素硝酸盐，甘露醇等微量管中以及葡萄糖蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中进行培养。

（3）药敏试验。将上述分离病原菌在无菌条件下用涂布棒均匀再普通琼脂培养基上，将自制药敏试纸片（头孢呋辛、先锋霉素V、氧氟沙星、泰乐菌素、氟苯尼考、恩诺沙星、新生霉素、环丙沙星）以及公司生产的青霉素、庆大霉素、红霉素、新霉素试纸等药敏试纸进行药物敏感性试验，置于置于37℃恒温培养箱中进行培养24～48h，根据其抑菌圈直径的大小判定其结果。抑菌圈直径小于10mm为耐药，10～15mm为中度敏感，15mm以上为高度敏感。

2　结果

2.1细菌鉴定结果

通过细菌分离培养、革兰氏染色镜检及生化试验鉴定，判断该致病菌主要为金黄色葡萄球菌。

2.2药敏试验结果

本试验应用常用的12种药敏试纸测定，结果见表1。

表1　药敏试验结果

实验结果表明该菌对新霉素及氟苯尼考最敏感，先锋霉素V、环丙沙星、氧氟沙星对该菌高度敏感，而该菌对庆大霉素、新生霉素中度敏感，对其他耐药或不敏感。因此，新霉素及氟苯尼考可作为此次治疗的选择参考。

3　讨论

3.1感染细菌

正常奶牛子宫是一个相对无菌的环境，自净能力很强，只有受到强烈机械刺激、抵抗力下降和微生物感染时才会有大量微生物滋生，引起子宫内膜炎。据报道，产后2周子宫受细菌污染极为常见，随后多数自动清除。本实验中，子宫受到单一菌金黄色葡萄球菌的感染比例较高，这可能是由于我们的采样期大部分集中在产后2～3周的缘故。此期子宫菌由多种混合菌感染变成单一菌感染，其中金黄色葡萄球菌抑制了其他菌的生长。

另外，该病的发生也与人为因素、营养因素和遗传因素等有关。本试验受时间和条件的限制没有进行厌氧菌的分离培养，但是不能排出尚有厌氧菌感染的可能。另外，值得注意的是本试验从患病奶牛实际分离到了多种细菌，但这并不一定意味着它们都是子宫内膜炎的直接致病因子。它们中多数为环境中常见菌，有些可能只是继发性感染。至于具体哪种或哪几种细菌是子宫内膜炎的直接致病菌，有待进一步研究。

3.2细菌对药物的敏感性

药敏试验结果表明，新霉素、氟苯尼考等药物对几种试验菌均高度敏感，可作为此次治疗的首选药物。庆大霉素等的抑菌效果较差，青霉素类亦产生耐药或根本无效。我们所得的结论与其他研究者有一定的差别，这可能是由于临床长期不合理使用抗生素，导致细菌对常用抗生素的耐药性，降低了细菌对药物的敏感性。如长期不合理使用青霉素，金黄色葡萄球菌对青霉素产生了耐药性，同时对新生霉素也产生了不同程度的耐药性。因此，用药时需要合理配伍，不随意加大剂量，以免产生耐药菌株，使药物失去治疗效果。为了减少细菌的抗药性，提高治疗效果，建议避免使用上述药敏试验中对致病菌株耐药或效果较差的抗生素。

近年来，应用子宫内接种有益微生物及中西结合治疗奶牛子宫内膜炎等已有不少成功的报道，因此在治疗时不妨考虑使用多种治疗手段，起到有效治疗。

综上所述，我们深刻体会到，药敏试验对指导兽医临床用药具有十分重要的意义，不仅提高疗效，而且可以节约药物成本，增加效益。建议有条件的奶牛场可进行定期的临床药敏试验，有利于指导兽医临床用药。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．12.018