兽药生产过程中压缩气体微生物检测技术分析

王海云，战玉清

（青岛易邦生物工程有限公司，山东　青岛　266114）

兽药生产过程中压缩气体微生物检测技术分析

王海云，战玉清

（青岛易邦生物工程有限公司，山东青岛266114）

通过5种检测方法，对兽药生产过程中压缩气体微生物检测技术进行分析，其中隔离取样法最简单、经济、准确。

压缩气体；检测方法

兽药GMP要求与兽药直接接触的干燥空气、惰性气体和压缩空气须定期进行检查，压缩气体在兽药生产过程中直接接触半成品或成品。因此，为减少兽药污染，企业应结合各自设备安装情况制定压缩空气的检查方法，提供检测数据，指导并用于生产。

1　采样与方法

1.1地点及采样准备

检测地点：选择生产车间局部百级灌装区，压缩空气使用装置采样口。

采样准备：根据设定的采样方法，准备相应的采样器材、试剂和培养基等。

1.2采样方法

1.2.1琼脂平板取样法：打开压缩空气阀门，控制气体流速稳定，适量放气一定时间后，打开采样平板盖，采样过程中旋转平板时气体充分接触，2min后结束取样，置培养箱内48h后，进行菌落计数即为2min压缩气体含菌量，每个取样点测试2次，同时需做空白对照。

1.2.2无菌滤膜取样法：将滤膜（φ0.22μm）以无菌方式放入高压过的取样器中，打开压缩空气阀门，控制气体流速稳定后，接上胶管取样，2min后在超净工作台内取下滤膜，置琼脂培养基平板上恒温培养，48h进行菌落计数即为2min压缩气体含菌量，同时需做空白对照。

1.2.3营养肉汤培养基取样法：广口瓶（500mL）内装营养肉汤培养基（300mL），瓶口橡皮塞上需连接两根耐高温的橡胶管，一根胶管上端作为气体入口下端连接一根玻璃管并深入液面下，另一根胶管作为排气口，将以上装置高压灭菌后进行取样，2min后结束取样夹紧进气口，置培养箱内通过观察培养基变混浊的时间来判定压缩空气的污染程度。

1.2.4水吸收取样法即为改良的营养肉汤培养基取样法：取样装置同1.2.3，将营养肉汤培养基换成生理盐水（0.85%），压缩空气进入取样瓶内，气体中的微生物在气流的动力下，被洗涤于生理盐水中，2min后结束取样，用止血钳夹紧进气口，在超净工作台内将采样水通过滤膜（φ0.22μm），将滤膜进行培养、计数，方法同1.2.2。

1.2.5隔离取样法：用无纺布自制梯形的布袋，将窄的一端捆绑固定在取样口，宽的一端用于取样和操作，这样起到与外界环境隔离的作用；将取样口灭菌后，用灭菌后的取样布袋窄的一端套住取样口并捆绑固定；控制气体流速稳定后，一只手在布袋外打开里面的平板盖，另一只手在布袋内旋转平板，2min后结束取样，置培养箱内48h后，进行菌落计数即为2min压缩气体含菌量，每个取样点测试2次，同时需做空白对照。

2　结果与分析

通过以上5种取样方法，菌数检测结果汇总分析详见下表：

3　讨论与结论

3.1琼脂平板取样法

检测操作方便、简单易行，结果细菌总数最多；检测结果容易受到外部各种环境的干扰除环境空气无菌外会造成各项微生物指标大大偏离实际，不建议使用此方法。

3.2无菌滤膜取样法

检测细菌总数最少；取样过程中，虽然不受环境空气影响，但与采样时间长短和采样装置设计与检测结果有一定的相关性，容易出现采集到的微生物因培养的不及时性而死亡，或者随气体的排出而带走，以上两种情况均会出现检测结果比实际低，同样不建议兽药生产企业采用此方法。

3.3营养肉汤培养基取样法

不能定量计数，只要压缩气体流速一定，采样时间一定，也能快速的判断压缩气体是否污染及污染程度；建议没有真空抽滤设备的厂家可采用也可以指导生产。

3.4水吸收取样法

检测可以定量的检测细菌总数但相对量少；检测结果与气流速度、稳定性相关，同时与微生物滞留在采集用生理盐水中数量有关，从而会出现检测结果偏低现象，如果将以上影响因素通过一系列实验设定最有效值，是可以用于指导生产的，但是前期准备工作繁多，需要大量的实验数据摸索最佳的压缩气体流速，后期还需要对滤膜培养，长期使用比较浪费。

3.5隔离取样法

检测细菌总数相对准确；检测过程中使用自制的梯形布袋暂时与外界环境隔离，能够简单便捷的使压缩气体中微生物直接沉降在平板上，免受外部环境的干扰，能定量的判定细菌总数。同其它4种取样方法相比，节省前期的培养基准备、生理盐水的配制和高压灭菌的过程，同时也节省了生理盐水配制和高压灭菌过程，同时也节省了滤膜的费用，可以准确的对压缩气体进行定量检测，是一种较理想的压缩气体检测方法。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．12.016

王海云（1977～），山东省人，本科，助理兽医师。研究方向：生物技术