原发性肝细胞癌组织中NLK蛋白表达与患者临床病理特征的关系

陈宏伟，李宗锋，张红娟，裴柳，刘洪伟，金亮，王东，李军良

(秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛066000)



原发性肝细胞癌组织中NLK蛋白表达与患者临床病理特征的关系

陈宏伟，李宗锋，张红娟，裴柳，刘洪伟，金亮，王东，李军良

(秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛066000)

目的 观察原发性肝细胞癌(HCC)组织中nemo样激酶(NLK)蛋白的表达，并探讨其与患者临床病理特征的关系。方法 以自身配对法分别留取HCC患者肿瘤切除后肝癌及癌旁肝组织各136例，采用免疫组化法检测NLK蛋白，分析NLK蛋白表达与HCC临床病理特征的关系。结果 在HCC及癌旁肝组织NLK蛋白阳性表达率分别为96.32%、5.15%，两者比较P<0.01；HCC组织中NLK蛋白表达与肿瘤Edmondson-Steiner分级(P=0.002)、肿瘤直径(P=0.022)、结节数目(P<0.001)有关，但与患者其他临床病理参数不相关(P均﹥0.05)。结论 在HCC组织中NLK蛋白表达明显升高，NLK可能在HCC的发生发展过程中起重要作用。

原发性肝细胞癌；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶超家族；nemo样激酶

Nemo样激酶(NLK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶超家族成员，是细胞周期蛋白依赖性激酶和丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节激酶同源性成员之一[1]。尽管NLK蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况已有所研究[2]，但有关NLK蛋白与HCC患者临床病理特征的关系，尚未见相关文献报道。本研究观察了HCC及配对癌旁肝组织中NLK蛋白的表达水平，并分析其与患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2008年4月～2010年8月秦皇岛市第一医院收治的136例HCC患者，术前均未行放化疗，术中留取肝癌及癌旁肝组织，术后均经病理科2位以上的资深医师确诊。其中，男108例，女28例；年龄31～76岁，中位年龄45.0岁；肿瘤直径>5 cm 36例，肿瘤直径≤5 cm 100例；多发肿瘤结节60例，单发肿瘤结节76例；Edmondson-SteinerⅠ级39例，Ⅱ级63例，Ⅲ、Ⅳ级34例；HBsAg阴性29例，HBsAg阳性107例；无肝硬化76例，合并肝硬化60例；116例无转移，20例有转移(包括门静脉癌栓、淋巴结转移及远处转移)。本研究由医院伦理委员会审核批准，并征得患者及家属知情同意。

1.2 NLK蛋白检测方法 将肝癌及癌旁肝组织标本用石蜡包埋，4 μm连续切片。免疫组化染色采用SP法，试剂盒购于北京中杉金桥公司，严格按照试剂盒说明书操作。NLK蛋白阳性定位于细胞质和细胞核，以出现棕黄或棕褐色颗粒作为阳性反应。阳性细胞百分数>75%、>50%～75%、>25%～50%、≤25%分别计4、3、2、1分，染色程度强染色、中等强度染色、弱染色、无染色分别计4、3、2、1分。两项得分相乘>4为阳性表达，≥9为高表达，≤8为低表达[3]。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计数资料以率表示，比较采用χ2检验、Fisher确切概率法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCC癌组织及癌旁肝组织中NLK蛋白表达比较 NLK在HCC癌组织及癌旁肝组织阳性表达率分别为96.32%(131/136)、5.15%(7/136)，两者比较差异有统计学意义(χ2=226.167，P<0.01)。

2.2 NLK蛋白表达与HCC患者临床病理特征的关系 NLK蛋白表达与HCC患者Edmondson-Steiner分级(P=0.002)、肿瘤直径(P=0.022)和肿瘤结节数目(P<0.001)有关，而与其他的临床病理因素无关。见表1。

3 讨论

NLK是一种进化上保守的促分裂原活化蛋白激酶类似的激酶，也是经典的Wnt/β-catenin信号通路中的一个非常重要的调节因子[4]。最近研究表明，NLK表达失调在多种人类恶性肿瘤的发生、发展和预后评估方面都有重要作用，有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。NLK在多条通路中起着不同的调控作用，在人类肿瘤发生发展过程中也扮演着不同的角色。在一些人类肿瘤中，NLK发挥抑癌基因作用。一项关于神经胶质瘤的研究[5]显示，低级别的星形细胞瘤(Ⅱ级)中NLK表达明显高于间变性星形细胞瘤(Ⅲ级)和多形性胶质母细胞瘤(Ⅳ级)，低表达NLK患者预后较差；Cox多因素分析显示，NLK可作为神经胶质瘤患者独立的预后指标。同时发现，神经胶质瘤细胞株U87MG、U251、LN229和T98G过表达NLK后Caspase-3表达水平也升高，表明NLK通过活化Caspase-3而诱导神经胶质瘤细胞凋亡。Lv等[4]研究发现，与正常肺组织相比，NLK在非小细胞肺癌组织中的表达明显降低，且与非小细胞肺癌的病理组织学分级、临床分期、淋巴结转移与否、Ki-67表达明显相关；并且，证实NLK可通过抑制Wnt信号通路下游靶基因c-myc、Cyclin D1而参与非小细胞肺癌的调控。Huang等[6]研究发现，NLK在乳腺癌组织中的表达低于正常乳腺组织，且与c-myb、Ki-67的表达呈负相关。在MCF-7乳腺癌细胞株中，NLK可能与c-myb直接结合并使其降解，引起其靶基因c-myc和Bcl-2的表达下调，从而阻滞细胞周期的进程，诱导乳腺癌细胞凋亡。Han等[7]证实，NLK在结肠癌组织中的表达明显低于相应癌旁组织，NLK低表达与结直肠患者淋巴结转移、静脉侵袭、肝转移、TNM分期明显相关，且NLK低表达者预后较差。Yasuda等[8]研究证实，过表达NLK能够诱导结肠癌DLD-1细胞凋亡，抑制细胞增殖。Zhang等[1]研究表明，NLK表达在卵巢癌组织中低于正常卵巢组织，且随着卵巢癌病理组织学分级增加，NLK表达也逐渐降低；而且，NLK表达与卵巢癌细胞的增殖呈负相关，能够增加化疗药顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡。Emami等[9]研究表明，与正常的前列腺上皮和原发性前列腺癌相比，前列腺癌转移灶中NLK的核定位表达程度明显减弱；而且，过表达NLK能够抑制前列腺癌细胞增殖，诱导其凋亡，尤其对雄激素受体阳性的前列腺癌细胞作用更加明显。

表1 NLK蛋白表达与HCC患者临床病理 参数的关系

另一方面，NLK在一些肿瘤中发挥癌基因作用。Chen等[10]研究证实，NLK阳性的鼻咽癌患者无瘤生存率和总体生存率更低，而复发率更高。Zhang等[11]发现，在口腔鳞癌CAL-27细胞中，敲低内源性NLK表达能够明显抑制CAL-27细胞的增殖及集落形成能力，阻滞细胞周期从G0/G1期到S期的转变。Li等[12]研究表明，NLK在胆囊癌组织中的表达高于正常胆囊组织，且NLK过表达与胆囊癌的组织学分级、TNM分期、神经周围侵袭与否密切相关。而且，高表达NLK的胆囊癌患者预后更差。Tan等[13]也证实，在胆囊癌细胞中沉默NLK基因可以抑制其增殖、肿瘤形成和迁移能力。本研究表明，NLK蛋白在HCC癌组织中的表达明显高于癌旁肝组织，且与HCC肿瘤直径、Edmondson-Steiner分级以及肿瘤结节数有关。可能与NLK高表达能上调Cyclin D1和CDK2转录水平，从而促进肿瘤细胞增殖有关[2]。因此，NLK蛋白可能在HCC的发生发展过程中扮演着重要角色，有望成为HCC治疗的新靶点。

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河北省秦皇岛市科学技术研究与发展计划项目(201502A158)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.38.032

R735.7

B

1002-266X(2016)38-0088-03

2016-05-10)