宫颈癌组织中Ki67与Ebp1表达变化及意义

刘兰，杨莎莎，陈海月,李香丹

(1延边大学附属医院，吉林延吉133000；2延边大学医学院)



宫颈癌组织中Ki67与Ebp1表达变化及意义

刘兰1，杨莎莎2，陈海月1,李香丹2

(1延边大学附属医院，吉林延吉133000；2延边大学医学院)

目的 观察细胞增殖抗原Ki67及增强子结合蛋白1(Ebp1)在宫颈癌组织中的表达变化，并探讨其临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测42例宫颈癌组织及相应癌旁正常宫颈黏膜组织中的Ki67及Ebp1，分析其与临床病理参数的关系。结果 宫颈癌组织中Ki67及Ebp1表达阳性率分别为73.8%和31.0%，均明显高于癌旁正常宫颈黏膜组织的0、2.4%(P均<0.05)；宫颈癌组织中Ki67、Ebp1表达与患者年龄、肿瘤直径、家族史无明显关系(P均>0.05)，与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移有关(P均<0.05)；相关性分析结果显示，宫颈癌组织中Ki67与Ebp1表达呈正相关(r=0.113,P<0.05)。结论 宫颈癌组织中Ki67、Ebp1高表达，二者联合检测有助于宫颈癌转移及预后的判断。

宫颈癌;细胞增殖抗原；增强子结合蛋白1

宫颈癌在全球妇女中的发病率仅次于乳腺癌，近年研究报道其发生发展受多种基因的调控。在各种环境因素作用下，原癌基因的激活和抑癌基因的失活均可导致细胞发生癌变[1]。Ki67是一种细胞增殖核抗原，其表达与多种肿瘤的发生、发展、浸润、转移有关。已有文献报道，宫颈癌组织中Ki67基因高表达[2]。增强子结合蛋白1(Ebp1)是新发现的ErbB-3胞内结合蛋白，属于增殖相关的PA2G4家族中的一员。目前，有关Ki67与Ebp1在宫颈癌组织中表达相关性的研究尚未见报道。2016年3～6月，我们采用免疫组化SP法观察了Ki67与Ebp1在宫颈癌组织中的表达变化，并分析二者的相关性及其与临床病理特征的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集延边大学附属医院病理科2010年2月～2013年2月宫颈癌患者手术切除的肿瘤标本42例，患者年龄34～76岁。肿瘤直径≤5 cm 20例，肿瘤直径>5 cm 22例；临床分期Ⅰ期+Ⅱ期23例，Ⅲ期19例；伴有淋巴结转移17例，无淋巴结转移25例；所有病例经术后病理确诊为宫颈癌，且患者确诊前未经任何抗肿瘤治疗。术中同时收集相应癌旁正常宫颈组织42例作为对照，术后病理检查均未出现肿瘤细胞。

1.2 Ki67与Ebp检测方法 采用免疫组化SP法检测，兔抗人Ebp1单克隆抗体(Abcam)、鼠抗人Ki67单克隆抗体(即用型) 及SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚切片。脱蜡后水化组织切片，微波炉抗原热修复，3% H2O2去离子水孵育以阻断内源性过氧化物酶；滴加一抗，4 ℃过夜；PBS冲洗，滴加聚合酶辅助剂，37 ℃孵育20 min；PBS冲洗后滴加辣根酶标记山羊抗小鼠IgG多聚体，37 ℃孵育30 min；应用DAB溶液显色，自来水冲洗、复染、脱水、透明、封片。PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。随机观察5个高倍视野，Ki67和Ebp阳性细胞呈淡黄色或棕黄色颗粒，根据阳性细胞所占百分比与染色程度判定结果。阳性细胞所占百分比<10%为1分，10%～<50%为2分，50%～<75%为3分，≥75%为4分；细胞无染色为0分，淡黄色为1分，中度黄色为2分，棕黄色为3分。两项相乘0为-，1～3为+，4～6为+ +，7～9为+ + +。+ + +为强阳性，+、+ +为阳性，-为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。阳性率比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki67与Ebp1在宫颈癌及癌旁正常组织中的表达 Ki67阳性染色主要位于细胞核，Ebp1阳性染色主要位于胞质或细胞膜。42例宫颈癌组织切片中，Ki67 阴性11例、阳性26例、强阳性5例，阳性率为73.8%；Ebp1阴性29例、阳性11例、强阳性2例，阳性率为31.0%。42例癌旁正常组织切片中，Ki67阴性42例、阳性0例，阳性率为0；Ebp1阴性41例、阳性1例，阳性率为2.4%。宫颈癌组织中Ebp1与Ki67表达阳性率明显高于癌旁正常组织，且其差异具有统计学意义(P<0.05)。

2.2 Ki67和Ebp1表达与宫颈癌临床病理特征的关系 宫颈癌组织中Ki67、Ebp1表达与患者年龄、肿瘤直径、家族史无明显关系(P均>0.05)，与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移有关(P均<0.05)。

表1 Ki67和Ebp1表达与宫颈癌临床病理特征的关系

2.3 宫颈癌组织中Ki67与Ebp1表达的关系 在31例Ki67阳性表达的宫颈癌组织中，Ebp1阳性表达11例、阴性表达20例；在11例Ki67阴性表达的宫颈癌组织中，Ebp1阳性表达2例、阴性表达9例。经Spearman相关性分析结果显示，两者表达呈正相关(r=0.113,P<0.05)。

3 讨论

宫颈癌是一种发生在子宫颈上皮的恶性肿瘤,肿瘤的发生与细胞的异常增生有关。Ki67是存在于增殖细胞核的标志蛋白，与细胞增殖密切相关，参与细胞周期的调控。Ki67在有丝分裂期的G1、S、G2期和M期均有合成，但在G0期缺失；由于其半衰期短，可以准确地反映细胞的增殖活性，被认为是较理想的检测细胞增殖活性的抗体[3],对恶性肿瘤诊断和预测肿瘤的预后具有重要意义。本研究结果显示，宫颈癌组织中Ki67表达阳性率为73.8%，明显高于癌旁正常组织，而且肿瘤分期越高、伴有淋巴结转移者阳性率越高，患者预后也越差，与其他研究[4～6]报道结论一致。

Ebp1是新发现的ErbB-3胞内结合蛋白，属于增殖相关的PA2G4家族中的一员。在外界刺激作用下，Ebp1与ErbB-3分离并迁移至核内，从而抑制肿瘤细胞的生长增殖[7]。本研究结果显示，42例宫颈癌组织中Ebp1表达阳性率为31.0%，明显高于癌旁正常组织的2.4%，而且其表达与肿瘤的临床分期及淋巴结转移密切相关，与之前研究[8,9]结果一致。但部分文献报道，Ebp1在一些肿瘤组织中表达水平下调，而且Ebp1的表达情况与肿瘤的分期及转移呈负相关[10～13]。这可能与Ebp1的两个不同片段p42、p48有关，其对细胞增殖起不同效应。p48主要位于胞质及胞核内，过表达促进细胞增殖；p42主要位于胞质内，过表达抑制细胞增殖[14]。组织类型不同，两个片段的表达量也不同，从而影响肿瘤细胞的生长与分化。

肿瘤的发生发展受多种基因的调控。有文献报道，在子宫内膜癌组织中ErbB-2与Ki67表达呈正相关，ErbB-2可通过过度表达，降低机体对细胞增殖的负调节作用，使Ki67表达增强，促使细胞增殖异常，最终导致恶变[15]。但是，目前有关Ki67与Ebp1在宫颈癌组织中表达相关性研究尚未见报道。本研究结果显示，Ki67与Ebp1在宫颈癌组织中表达呈正相关。由此可见，在宫颈癌的发生发展与转移过程中Ki67与Ebp1同时发挥重要作用，二者协同作用促进宫颈癌的浸润和转移。因此，两者的联合检测有助于宫颈癌恶性程度的判断，可为宫颈癌的预防、诊断及治疗提供更多的理论依据。

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国家自然科学基金资助项目(31560324，81560400)。

李香丹(E-mail: lixiangdan@ybu.edu.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.38.028

R737.33

B

1002-266X(2016)38-0078-03

2016-08-12)