RRM1和ERCC1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

杨 列，张建平

(1. 江苏省溧阳市人民医院，江苏 溧阳 213300；2. 复旦大学附属华山医院，上海 200040)



RRM1和ERCC1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

杨 列1，张建平2

(1. 江苏省溧阳市人民医院，江苏 溧阳 213300；2. 复旦大学附属华山医院，上海 200040)

目的 观察RRM1和ERCC1在乳腺癌组织中的表达及相关性，并探讨其临床意义。方法 将50例乳腺癌患者纳入研究。采用免疫组织化学方法检测患者乳腺癌组织和癌旁组织中RRM1和ERCC1的表达情况并进行评分，进一步分析两者之间的相关性以及与乳腺癌患者临床病理特征之间的关系。结果 乳腺癌组织中RRM1和ERCC1的表达显著高于癌旁组织(P均<0.05)，RRM1和ERCC1蛋白表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)，且RRMl与ERCC1的阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论 RRM1和ERCC1在乳腺癌组织中高表达，且与TNM分期、淋巴结转移相关，两者在乳腺癌的发生发展中发挥作用。

乳腺癌；ERCC1；RRM1；免疫组织化学

乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈逐年上升趋势，已位居女性恶性肿瘤的首位[1]。目前，手术、放疗、化疗仍然是乳腺癌的主要治疗手段。其中化疗以其在手术前控制和缩小病灶、手术后防止复发转移等特殊作用而在乳腺癌综合治疗中占有不可替代的地位。但是几乎不可避免的化疗耐药一直是有效控制乳腺癌的瓶颈[2-3]。而多数肿瘤的发生和耐药与DNA修复基因的修复能力密切相关，核苷酸还原酶M1亚基(ribonucleotide reduetase subunit MI,RRMl)和核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementing, ERCCl)是DNA损伤修复系统中的两个关键物质。既往多项研究表明其蛋白表达水平与肿瘤的发生发展相关，并可影响其对化疗方案的敏感性[4-6]。迪吉等[7]研究表明RRM1和ERCC1同样可预测晚期乳腺癌患者采用吉西他滨联合顺铂化疗方案的敏感性，提示其与乳腺癌的发生、发展密切相关。本研究拟检测乳腺癌组织中RRM1和ERCC1的表达水平的变化，以探讨两者在乳腺癌组织中表达的差异性及其临床意义。

1 临床资料

1.1 标本来源 将2013年4月—2014年10月于复旦大学附属华山医院诊治的50例乳腺癌患者纳入研究。患者均行手术切除治疗，术后病理证实为乳腺癌。排除标准：合并有其他恶性肿瘤或一般情况差者；术后3个月内死亡者。患者均为女性，年龄31～71(54.2±11.3)岁；其中TNM分期Ⅰ～Ⅱ期26例，Ⅲ～Ⅳ期24例。采集患者包括癌组织、癌旁组织的术后标本。

1.2 方法 采用Envision二步免疫组化染色法。RRMl 和ERCC1单克隆抗体及Envision二步法免疫组化检测试剂盒(PV-6000)和DAB酶底物显色试剂盒等相关试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。按Envision二步法免疫组化检测试剂盒(PV-6000)说明操作，DAB显色，苏木精复染，已知的阳性对照片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。所有切片均采用同一批试剂完成。

1.3 结果判断标准 在随机双盲的条件下，2名高年资病理科医师对切片进行观察，每张切片随机选择5个高倍镜下视野(×400)，每个高倍镜下视野计数200个细胞，共1 000个细胞，并取其平均数。根据目前应用较为广泛的免疫组化计分标准判读。①染色强度：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；②阳性细胞数：阳性细胞数≤10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。根据两项得分的平均值判定，其中>1分判定为阳性，≤1分判定为阴性。

1.4 统计学方法 应用SPSS 20.0软件进行分析，计数资料采用百分率(%)表示，2组间比较采用四格表2检验， RRM1与ERCC1表达的相关性采用Spearman相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 癌组织与癌旁组织中RRM1和ERCC1蛋白的表达情况癌组织中RRM1阳性26例(52%)，阴性24例(48%)；ERCC1阳性27例(54%)，阴性23例(46%)。癌旁组织中RRM1阳性8例(16%)，阴性42例(84%)；ERCC1阳性9例，阴性41例(82%)。癌组织中ERCC1和RRM1阳性表达率均明显高于癌旁组织(P均<0.05)。

2.2 RRM1和ERCC1蛋白表达与乳腺癌患者临床病理关系 RRM1和ERCC1蛋白在乳腺癌组织中的表达与TNM分期、淋巴结转移显著相关(P均<0.05)。TNM分期越高，RRM1和ERCC1蛋白表达越高；淋巴结有转移者，RRM1和ERCC1蛋白表达也增高。见表1。

2.3 RRM1和ERCC1蛋白在乳腺癌组织中表达的相关性 Pearson相关分析结果显示,乳腺癌组织中RRM1与ERCC1的阳性表达呈正相关(P<0.05)。见表2。

3 讨 论

DNA损伤在肿瘤的进展过程中扮演重要的角色， DNA损伤后可促使机体损伤修复系统的激活。DNA损伤修复主要是通过核苷酸切除修复途径实现，ERCC1是核苷酸剪切修复家族中的重要成员之一，研究表明ERCC1高表达可使肿瘤停滞在G2/M期，从而使细胞的损伤DNA在短时间内得到修复，并导致其对顺铂等药物耐药[8]。RRM1是核苷酸还原酶的亚结构，而核糖核苷酸还原成脱氧核糖核苷酸是DNA合成的重要环节，同时RRM1常被认为可代表核苷酸切除修复途径的功能状况。RRM1提供的核苷酸可及时填补其他基因将部分受损的DNA切除后留下的空缺[9-10]。

表1 RRM1和ERCC1蛋白与乳腺癌患者的临床病理关系 例(%)

表2 RRM1和ERCC1蛋白在乳腺癌组织中表达的相关性 例

本研究发现在乳腺癌组织中ERCC1和RRM1表达水平均显著高于癌旁正常组织，与既往研究所得结果十分一致[7]。然而相较于前述研究，笔者进一步发现ERCC1和RRM1在TNM分期更高的癌组织中和出现淋巴结转移的癌组织中均有明显的高表达，且两种蛋白之间的表达呈明显的正相关。分析出现这一现象可能与如下原因有关：①ERCC1或RRM1的高表达可能提示其肿瘤细胞具有更强的侵袭能力，如RRM1就被证明参与肿瘤的侵袭与转移[11]。而TNM分期越高、出现淋巴结转移的癌组织，其肿瘤的侵袭能力则越强，故ERCC1或RRM1呈高表达。②既往由于各种检测手段均在蛋白水平检测，而较少在DNA水平检测，因此如出现TNM分期变高或者淋巴结的转移往往意味着其DNA水平表达的明显增强，进而在核酸水平影响ERCC1或RRM1蛋白的表达，提高检测的阳性率。

本研究结果表明ERCC1或RRM1蛋白在乳腺癌组织中的表达的与乳腺癌的进展有一定的关联。但本研究仍有以下不足之处：①本研究样本数较少，且仅限于手术后标本；②本研究未能在mRNA水平上分析基因表达的差异，因此基因表达的差异是否一致不得而知；③本研究暂未对患者行追踪随访并行生存分析，其对预后的影响是否存在相同的差异并不明朗。由于存在上述的不足之处，以后的研究有必要进一步扩大样本量，并进行完善的生存分析，使研究结果更加可信，更好地指导临床。

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上海市卫生局青年科研项目(2011144)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.33.014

R737.9

B

1008-8849(2016)33-3689-02

2016-03-05