不同血小板浓度对血小板聚集率的影响探讨

但　刚，罗鸿雁，江忠勇，胡莉娜，吴艾霖，刘晨霞，熊　杰

不同血小板浓度对血小板聚集率的影响探讨

但刚，罗鸿雁，江忠勇，胡莉娜，吴艾霖，刘晨霞，熊杰

目的观察不同浓度的血小板数量对于聚集率检测的影响，并探索血小板聚集率检测的适宜浓度范围，以保证测定血小板聚集率的准确性。方法选取49例临床健康体检者标本，使用不同的离心力分离出富血小板血浆（PRP）和乏血小板血浆（PPP），利用血细胞分析仪测定血小板浓度，将PRP用自身PPP按倍比稀释方法调制成4个不同浓度的PRP，观察不同浓度的PRP在加入诱导剂后血小板的聚集率的变化。结果血小板聚集率随着血小板浓度降低而明显降低，不同浓度的PRP的聚集率有统计学差异（P＜0.05），血小板聚集率与其浓度呈正相关（P＜0.05）；当血小板浓度＜90×109/L时，其聚集率低于正常参考，提示在此浓度下，其聚集率已经不能准确反映血小板的真实聚集情况了。结论血小板浓度对其聚集率有明显影响。血小板浓度在（90～250）×109/L时测定，能真实反映其聚集率；PRP在血小板＜90×109/L时，其聚集率测定易造成假性降低的结果。

血小板；浓度；聚集率；测定

血小板（PLT）具有黏附、聚集、释放反应，促凝血、血管收缩等生理功能，血小板聚集是血小板活化及其释放反应、膜糖蛋白受体等综合因素的共同表现。其聚集率的检测，已被广泛应用于血栓性疾病及出血的诊断、治疗和疗效评估。有研究显示，血小板绝对数量与血小板的聚集能力密切相关［1］。本研究拟以健康人血浆为研究对象，以光学比浊法分析在二磷酸腺苷（ADP）和花生四烯酸（AA）等诱导剂的诱导作用下，在不同血小板浓度下血小板聚集率的变化，以观察不同浓度的血小板数量对于聚集率检测的影响，并探索血小板聚集率检测的适宜浓度范围。

1　对象与方法

1.1研究对象选择2014年10月～2015年1月在本院健康体检中心体检的49名体检者，体检结论均为健康，排除血液系统疾病患者，未口服抗血小板类药物。其中男性26名，女性23名。年龄30～55（41.2±7.5）岁。

1.2主要仪器与试剂SYSMEX XE-2100五分类血细胞分析仪（日本SYSMEX公司）及其配套试剂；美国海伦娜（Helena）血小板聚集分析仪及其配套试剂：诱导剂：ADP、AA（美国海伦娜公司）。

1.3方法

1.3.1标本采集抽取受检者静脉全血于枸橼酸钠真空抗凝管2管，同时抽取EDTA-K2真空抗凝管1管。

1.3.2血小板浓度测定将EDTA-K2抗凝全血用SYSMEX XE-2100五分类血细胞分析仪测定血小板浓度。

1.3.3血小板聚集率测定将枸橼酸钠抗凝全血经800 r/min离心10 min，分离出富血小板血浆（PRP），吸取PRP后，剩余血浆再经3000 r/min离心10 min，分离乏血小板血浆（PPP）。利用其自身PPP将PRP倍比稀释成0、2、4、8倍稀释的4个浓度的PRP［浓度范围分别为（190～250）×109/L、（120～90）× 109/L、（75～45）×109/L、（36～25）×109/L］。采用光学比浊法，在海伦娜血小板聚集测试仪上测定不同浓度PRP的血小板聚集率，诱导剂为配套的ADP和AA，分别记录ADP和AA诱导下的最大聚集率。

1.4统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料组间比较采用配对t检验，相关性分析采用Spearman检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1不同浓度PRP的血小板聚集率测定结果

检测标本的血小板原始浓度范围为（190～250）×109/L，其聚集率平均值为（87.1±13.6）%；随着稀释浓度的降低，血小板聚集率显著下降（P＜0.05）；当浓度降低至＜90×109/L时，血小板聚集率检测结果低于正常参考范围（55%～96%），提示出现假性降低结果。见表1。

2.2PRP浓度与聚集率的相关性分析Spearman相关分析结果显示，PRP浓度与血小板聚集率呈显著正相关，ADP为诱导剂时（r=0.984，P＜0.05）；AA为诱导剂时（r=0.978，P＜0.05）。

表1　不同浓度PRP的血小板聚集率测定结果（n=49）

3　讨论

血小板聚集是血小板主要功能，血小板活化和黏附聚集特性在维持机体稳定和防御中有着重要的生理学意义。这一功能不但参与了正常的生理止凝血功能，同时还是心脑血管疾病血栓形成的物质结构基础［2］。关于血小板聚集功能的研究发现，有效评估和干预血小板聚集功能，可以有效地干预心脑血管疾病的病程发展。鉴于血小板聚集的重要作用，血小板聚集功能检测已广泛应用于临床。但由于血小板聚集检测原理和干扰因素的影响，导致其应用的真正价值未能有效的体现。目前临床上使用最为广泛测定聚集率的方法依然是血浆比浊法，其基本具体原理为：在富含血小板的血浆中，加入ADP或AA等诱导剂，在磁珠的不断搅拌下，就能诱发血小板聚集，通过测定其吸光度的变化，就能准确检测出血小板聚集率的高低［2-3］。

血小板数量、温度、pH值、血浆蛋白含量、血浆离子浓度、药物等众多因素均可干扰血小板聚集，其中血小板数量对于血小板聚集率的影响较大。国际血栓学会（ISTH）在指南中指出，对于血小板聚集实验而言，检测标本的浑浊度是最重要的因素之一［4］。有研究显示：在使用电阻法测定中，正常人群血小板聚集率与血小板浓度相关，血小板浓度与聚集率之间可能存在对数关系，但该报道中血小板的浓度仅仅是某些特定值，且使用血细胞分析仪稀释液对标本进行稀释［5］。

本研究采用血浆比浊法测定聚集率，并通过来自本体的乏血小板血浆稀释，完全模拟人体内血小板聚集的环境（血浆蛋白、pH值等），避免了其他因素激活血小板。本研究旨在探索在ADP和AA诱导下，不同浓度血小板对聚集率的影响，并确定测定血小板聚集率所需的可信的血小板浓度。研究结果显示，正常健康人群的血小板原始浓度为（250～190）×109/L，对其原始浓度和（120～90）×109/L浓度的PRP进行检测，血小板聚集率均在本实验室的正常参考范围55%～96%内。其聚集率也随着PRP中血小板浓度的降低而降低，且各浓度组聚集率比较均有统计学差异，显示血小板浓度对聚集率有显著影响。同时，结果显示血小板聚集率与PRP浓度呈正相关（P＜0.05）。而当PRP浓度下降至＜90×109/L时，聚集率检测结果出现明显降低，低于本实验室的正常参考范围，提示出现假性降低结果。因此认为，当PRP浓度＜90×109/L时，其聚集率不能正确反映血小板聚集功能。本结论对指导临床判断血小板聚集功能具有重要指导意义，能有效排除因血小板数量降低而导致的其聚集功能的假性降低。

依据吴小利等［6］的《PL-11血小板功能分析仪检测ADP诱导的血小板聚集率参考区间初步调查》一文，不同年龄对血小板聚集率无明显影响，因此，本研究在设置参考区间时未考虑年龄因素。

综上所述，血小板浓度对其聚集率有显著影响，当PRP浓度＜90×109/L时，其聚集率不能正确反映血小板聚集功能。故测定血小板聚集功能时，应保证血小板浓度＞90×109/L，其检测结果才能正确反映血小板真实聚集功能。

［1］王伟娜.血小板聚集试验及其临床应用进展［J］.临床军医杂志，2015.43（11）:874-876.

［2］崔美红，刘惠亮.血小板聚集功能监测［J］.心脏杂志，2014，26（4）：494-496.

［3］孙越红，王雅杰，周景茹.血小板聚集实验条件优化的研究［J］.现代检验医学杂志，2007，22（2）：8-9.

［4］International Society on Thrombosis and Haemostasis（ISTH）. Diagnosis of inherited platelet function disorders:guidance from the SSC of the ISTH［J］.J Thromb Haemost，2015，13（2）:314-322

［5］李祖兰，杨亮程，任军伟，等.富血小板血浆中血小板浓度对血小板聚集的影响［J］.标记免疫分析与临床，2012，19（2）：94-96.

［6］吴小利，李健，刘红英，等.PL-11血小板功能分析仪检测ADP诱导的血小板聚集率参考区间初步调查［J］.临床检验杂志，2013，31（9）：715-717.

Effects of different platelet concentration on platelet aggregation

Dan Gang，Luo Hongyan，Jiang Zhongyong，Hu Lina，Wu Ailin，Liu Chengxia，Xiong JieDepartment of Laboratory，General Hospital of Chengdu Military Command，Chengdu，610083，China

ObjectiveTo observe the impacts of different platelet（PLT）concentration on the detection of PLT aggregation rate and explore the appropriate concentration range for such detection to ensure the accuracy of such detection.MethodsA total of 49 healthy examinees were collected as samples.The platelet rich plasma（PRP）and platelet poor plasma（PPP）were isolated with different centrifugal forces.PLT concentration was determined with hematology analyzer.PRP was prepared into PRP with four different concentrations with PPP and by multiple proportion attenuation to observe the change of PLT aggregation rate in PRP with different concentrations after the addition of inducer.ResultsPLT aggregation rate decreased with the decrease of PLT concentration；PLT aggregation rate for PRP at different concentrations were significantly different（P＜0.05）；therefore，PLT aggregation rate was positively correlated with its concentration（P＜0.05）；when PLT concentration was＜90×109/L，PLT aggregation rate was lower than the normal value，indicating that it had been unable to reflect the actual aggregation of PLT accurately under such concentration. ConclusionPLT concentration has a significant effect on the aggregation rate of PLT.The aggregation rate can be reflected accurately when PLT concentration is within the range of（90-250）×109/L；the aggregation rate determination may cause the pseudo reduced results when the concentration is＜90×109/L.

PLT；concentration；aggregation rate；determination

R 331.143

A

1004-0188（2016）08-0832-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.08.002

四川省卫计委科研课题（140007）

610083成都，成都军区总医院检验科（但刚，江忠勇，胡莉娜，吴艾霖，刘晨霞，熊杰），四川省自贡军分区干休所（罗鸿雁）

，熊杰，E-mail：byx410@sina.com

（2016-05-10）