Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达及临床意义

卢 葵，徐艳超，姚俊霞

(复旦大学附属中山医院青浦分院病理科，上海 青浦 201700)



Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达及临床意义

卢 葵，徐艳超，姚俊霞*

(复旦大学附属中山医院青浦分院病理科，上海 青浦 201700)

目的 探讨Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达及其与各临床病理参数之间的关系，分析Notch 1与VEGF两者之间的相关关系。方法 应用免疫组织化学技术检测85例结直肠癌和41例癌旁正常黏膜组织Notch 1蛋白和VEGF蛋白的表达，并分析它们与临床病理参数的关系。结果 结直肠癌中Notch 1和VEGF 蛋白的阳性表达率分别为63.5%和60.0%，显著高于癌旁结直肠黏膜组织中的12.2%(P=0.000)和19.5%(P=0.000)。在结直肠癌中，Notch 1和VEGF的表达与TNM分期及淋巴结转移相关，Notch 1的表达与肿瘤的分化程度相关。Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达呈正相关(r=0.526，P<0.01)。结论 Notch 1和VEGF在结直肠癌中呈高表达且互相相关，提示两者在结直肠癌的发生、发展中可能起促进和协同作用。

结直肠癌；Notch 1；VEGF

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，Jemal等[1]报道美国结直肠癌5年存活率65%，但远处转移存活率仅11%。由于结直肠癌起病隐匿，早期常无明显的临床表现，确定为结直肠癌后，大约50%～60%的患者会发生转移[2]。因此，积极研究结直肠癌的发病及转移机制，仍然十分重要。Notch信号通路是一条决定细胞命运、保守而重要的信号传导通路，近年来人们相继发现Notch信号通路在一些肿瘤的发生、发展中起一定作用。已有研究证实，Notch 1蛋白的异常表达与T淋巴细胞急性淋巴细胞白血病[3]、宫颈癌[4]、胶质瘤[5]、乳腺癌[6]、胰腺癌[7]、肺癌[8]等肿瘤的发病有一定作用，进一步发现Notch 1也与一些肿瘤血管生成密切相关[9]。血管内皮生长因子(vascular endothelial gsowth factor,VEGF)是一种重要的肿瘤血管生成调控因子，与肿瘤的发生、发展及转移密切相关。有研究证实Notch 1在结直肠癌中是过表达，对结直肠癌的发生、发展起促进作用[10]。本研究通过免疫组织化学技术检测结直肠癌组织中Notch 1、VEGF的表达，探讨Notch 1与VEGF在结直肠癌的发生、发展中相关关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取复旦大学附属中山医院青浦分院2014年1月至2015年6月手术切除并经病理证实的结直肠癌85例，其中男52例，女33例；年龄41～83岁(中位年龄63岁)；高分化腺癌22例，中分化腺癌34例，低分化腺癌29例；34例肿瘤直径≥5cm，51例肿瘤直径≤5cm；淋巴结转移36例，无淋巴结转移49例；按TNM分期，I期12例，II期25例，III期37例，IV期11例。另留取41例相应结直肠癌癌旁正常组织。所有患者术前均未行放疗或化疗。

1.2 主要试剂及方法 羊抗人Notch 1抗体(编号：SC-6014-R)，小鼠抗人VEGF抗体(编号：ZM-0265)为Santcruz公司产品，各种SP试剂、DAB显色试剂盒为北京中杉金桥公司产品。组织标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，应用免疫组织化学SP法检测组织中Notch 1、VEGF的表达。步骤按试剂盒说明书操作。用已知阳性的切片作对照，PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判读 Notch 1蛋白在结直肠癌细胞中广泛定位于细胞膜和细胞质，VEGF蛋白定位于细胞质和(或)细胞膜。由两位病理科医生在未知临床病理资料情况下独立检测，取平均值。高倍镜下随机选5个视野(每个视野不少200个细胞)，采用半定量计分法进行判定，按染色强度与阳性细胞百分比的乘积计分。①按染色强度评分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；②按阳性细胞百分比评分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10%，2分为阳性细胞11%～50%，3分为阳性细胞51%～75%，4分为阳性细胞>75%；③染色强度与阳性细胞百分比的乘积>3分为阳性表达。

1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0软件行统计学处理。计数资料采用卡方检验，相关性分析采用Spearman相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Notch 1、VEGF在结直肠癌和癌旁正常组织中的表达 在85例结直肠癌组织中，免疫组化染色检测显示，Notch 1蛋白及VEGF在结直肠癌细胞中广泛定位于细胞膜和细胞质，两者阳性表达均呈棕黄色颗粒状，定位清晰，组织背景非特异性反应微弱，见图1(封二)。其中Notch 1和VEGF阳性率分别为63.5%(54/85)和60.0%(51/85)。对照组癌旁结直肠黏膜组织中Notch 1和VEGF阳性率分别为12.2%(5/41，P=0.000)和19.5%(8/41，P=0.000)，差异有统计学意义，见表1。

表1 Notch 1和VEGF在结直肠癌及癌旁组织中的表达

2.2 Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达与临床参数的关系 结直肠癌组织中Notch 1的阳性表达与肿瘤的分化、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。VEGF的阳性表达与淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关(P>0.05)，见表2。

表2 Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达与临床参数的关系

2.3 Notch 1与VEGF表达的相关性 对Notch 1与VEGF在结直肠癌的阳性表达，进行Spreaman等级相关分析，结果显示Notch 1与VEGF在结直肠癌中的表达有正相关性(r=0.526，P<0.01)，见表3。

表3 Notch 1与VEGF在结直肠癌中表达的相关性

3 讨 论

经典的Notch信号通路由Notch受体、配体、初级效应分子及下游靶基因组成，Notch受体为分子量约300kD的单次跨膜蛋白。哺乳动物有4种Notch受体，即Notch 1～4，其中Notch 1研究较多，Notch 1的异常表达在肿瘤的发病中起一定作用，并且在肿瘤血管生成中起重要作用。本研究表明Notch 1在结直肠癌中高表达，并与肿瘤组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关，与Chu等人[11-12]的研究结果一致。

VEGF是1989年由Ferral[13]在牛垂体滤泡星状细胞培养液中分离纯化的一类糖蛋白。大量研究表明，VEGF是一个重要的肿瘤转移促进基因。本研究提示，VEGF在结直肠癌中高表达，与淋巴结转移、TNM分期相关，与以往研究结果一致。

VEGF与Notch 1在一些肿瘤中常常是共表达的，然而Notch 1与VEGF之间互相作用仍不明确，Wang等[7]在胰腺癌细胞中证实下调Notch 1，可以下调NF-κβ、VEGF，进而抑制胰腺癌细胞的侵袭力，提示VEGF是Notch 1信号通路下游靶点。而在血管生成过程中，VEGF作为Notch信号上游调控因子，可诱导动脉内皮细胞上Notch 1和DLL4的表达[14]。在结直肠癌抗血管生成治疗上，结果发现，Notch 1高表达的患者总生存期明显下降[15]，提示在肿瘤血管形成，Notch 1与VEGF可能存在协同作用。本研究发现Notch 1与VEGF在结直肠癌中的表达存在正相关，提示它们在结直肠癌的发生、发展中起促进和协同作用，协同作用可能体现在肿瘤血管的生成上。深入研究Notch 1信号通路与VEGF的互相作用机制，有助于探索新的抗肿瘤血管生成方法。

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Expression and Clinical Significance of Notch 1 and VEGF in Colorectal Cancer

LU Kui,XU Yan-chao,YAO Jun-xia

(DepartmentofPathology,QingpuBranchofZhongshanHospitalAffiliatedtoFuDanUniversity，QingbuShanghai201700,China)

Objective To investigate the expression of Notch 1 and VEGF in colorectal cancer and their relationship with the clinical pathological features of colorectal cancer,and to analyse correlation between Notch 1and VEGF.Methods The protein expressions of Notch 1 and VEGF of 85 colorectal cancer tissue samples and 41 normal tissue samples adjacent to colorectal cancer were detected by Immunohistochemical method,and the relationship between them and the clinical pathological parameters was analyzed.Results The positive rates of Notch 1 and VEGF protein in colorectal cancer(n=85cases) were 63.5% and 60% respectively,which was significantly higher than that in normal tissues adjacent to colorectal cancer(12.2% and 19.5%)(P=0.000).In colorectal cancer,the positive experssions of Notch 1 and VEGF were relevant to TNM stage and lymphatic metastasis(P<0.05)，and the positive expression of Notch 1 was relevant to differentiation.The protein expressions of Notch 1 and VEGF were positively correlated(r=0.526,P<0.01).Conclusion Notch 1 and VEGF are highly expreesed in colorectal cancer and correlated each other，suggestting the two may have a stimulative and synergetic effect in the occurrence and development of colorectal cancer.

Colorectal cancer;Notch 1;VEGF

,E-mail:jxyao2001@163.com

R735.37

A

2095-4646(2016)05-0381-03

10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.05.0381

2016-03-06)