山东地区1 225例男性尖锐湿疣患者HPV感染亚型分析

田欣欣王 睿姜玲波李雅文祁德波

1. 山东省济南金域医学检验中心PCR实验室（济南 250101）；2. 山东省济南金域医学检验中心病理室

山东地区1 225例男性尖锐湿疣患者HPV感染亚型分析

田欣欣1王 睿1姜玲波1李雅文1祁德波2*

1. 山东省济南金域医学检验中心PCR实验室（济南 250101）；2. 山东省济南金域医学检验中心病理室

目的 探讨山东地区男性尖锐湿疣患者人乳头状瘤病毒（HPV）不同亚型感染的分布情况。方法 采用基因芯片技术，对1 225例男性尖锐湿疣皮损拭子或组织进行23 HPV基因型检测。结果 708例患者HPV检测阳性，总阳性率为57.8%，其中低危亚型以HPV6（40.8%）和HPV11（40.5%）最常见；高危亚型以HPV16（14.1%）最常见。在708例阳性患者中，单一亚型感染367例，占51.8%，其中未检测出HPV45和HPV73；在341例混合感染病例中，23种HPV型别均检测到，多重感染以低危和高危HPV混合感染为主（P＜0.05）。不同年龄组以21岁～年龄组感染率最高（48.5%），不同地区以鲁中（36.9%）和鲁东（36.6%）地区感染率较高。结论 山东地区男性尖锐湿疣患者HPV感染主要以6、11型为主，HPV不同亚型的分布受到年龄、地域以及感染重数的影响。

男性； 尖锐湿疣； 乳头状瘤病毒感染； 山东

人乳头状瘤病毒（human papillomavirus， HPV）具有强烈嗜上皮性，感染后可导致人类皮肤和黏膜多种良性和恶性病变。HPV感染在人群中较普遍，主要是通过性活动传播。根据HPV亚型致癌危险性大小不同，分为低危型、高危型两大类。低危型HPV，包括6、11、42、43、81型等，主要导致肛门和外生殖器等部位尖锐湿疣［1-3］；高危型HPV包括16、18、31、33、35、45、51、52、56、58、61型等，除可引起生殖器疣外，更是女性子宫颈癌以及男女性外生殖器癌、肛门癌和喉癌等的致癌因素［4-6］。

鉴于HPV在尖锐湿疣，以及大部分宫颈癌、外生殖器癌、肛门癌和喉癌等的发病中扮演了重要角色，因此只要阻断HPV感染，就可以预防这些疾病的发生。目前，全球已有两种针对女性HPV感染的疫苗成功应用于临床，分别是默沙东（Merck）药厂研制的加卫（Gardasil，HPV16/18）疫苗，以及葛兰素史克的卉妍康（Cervarix，HPV6/11/16/18）疫苗，使女性尖锐湿疣和宫颈癌的发病率分别下降了70%以上［6］。可以预见，在不久的将来，针对男性的HPV疫苗也将应用于临床。因此，了解和掌握男性HPV的分布特征就具有重要意义。为了解山东地区男性尖锐湿疣患者HPV感染及分布情况，笔者采用基因芯片技术对1225例男性尖锐湿疣皮损拭子或组织进行23 HPV基因型检测，现将结果报告如下。

资料与方法

一、标本来源

2011年12月至2014年11月间，我们对送检济南金域医学检验中心的（采集于山东省各市医院性病门诊男性尖锐湿疣患者）1 225例标本的HPV检测结果进行了回顾分析。这些标本来自于男性患者尖锐湿疣皮损部位的拭子或组织，分别取自男性包皮、冠状沟、尿道口、肛周等处。采集的标本放入深圳亚能生物技术有限公司提供的HPV23分型专用采集管中，冷藏保存并送往济南金域进行HPV检测。

二、仪器与试剂

PCR扩增仪由杭州博日有限公司生产。全自动核酸分子杂交仪（YN-H18）、HPV DNA基因分型检测试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供。

三、检测方法

亚能提供的HPV DNA基因分型检测试剂盒能同时检测23种HPV亚型（包括18种高危亚型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82和83；5种低危亚型：6、11、42、43和81）。其技术原理是：采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术进行检测。采用HPV基因组中晚期区（L区）相对保守区的引物，对待测样品中可能存在的HPV基因型进行PCR扩增并进行生物素标记，再将PCR扩增产物与固定在膜芯片上的基因型特异性的探针进行杂交，最后通过化学显色判读结果。具体步骤如下：

按检测试剂的说明书进行DNA提取，以提取好的核酸为模板进行PCR扩增。反应总体系25μL。反应条件：50℃ 15min；95℃ 10min；94℃ 10s，42℃90s，72℃ 30s，共10个循环；94℃ 10s，46℃ 60s，72℃ 20s，共30个循环；72℃ 5min。扩增结束后95℃10min变性。变性产物通过冰盒转移到全自动核酸分子杂交仪上进行杂交、孵育和显色。按亚能生物全自动核酸分子杂交仪操作指南进行杂交显色及判读结果，每组实验均设阴性和阳性对照，阴性和阳性对照均由厂家提供。

四、统计学处理

数据分析采用SPSS11.0软件，组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

一、研究人群基本信息

本次研究共收到1 225份标本，其中708例患者HPV检测阳性，阳性率为57.8%。患者年龄范围为17～77岁，≤20岁者30例，21～50岁者640例，＞50岁者38例。

二、HPV各亚型检出率

HPV不同亚型分布如图1所示，检出的HPV亚型所占比率依次为HPV6（40.8%，289/708），HPV11（40.5%，287/708），HPV16（14.1%，100/708），HPV42（9.3%，66/708），HPV43（9.3%，66/708）。这其中，HPV6/11感染最常见，占75.4%（534/708）。

图1　708例男性患者HPV23亚型分布情况

三、单一感染与多重混合感染

在708例HPV DNA阳性标本中， 367例为单一感染，占51.8%。在这367例单一感染病例中，共发现21种HPV亚型。排名前五位的依次为：HPV6（38.2%，140/367），HPV11（31.9%，117/367），HPV16（7.1%，26/367），HPV43（4.6%，17/367），HPV42（1.9%，7/167），而HPV45和HPV73未有检出。

341例二重及以上混合感染分布情况见表1。

表1　34例HPV DNAV阳性多重感染男性患者分布情况（n，%）

这其中23种HPV亚型均被检测到，HPV6型检出率最高（149/341，43.7%），HPV82型检出率最低（3/341，0.9%）。HPV亚型以高低危混合感染为主，占80.7%（275/341），单纯低危感染占10.0%（34/341），单纯高危感染占9.4%（32/341）。依据感染重数分为6组，HPV型别分布按单纯低危、单纯高危、高低危混合感染3种情况，进行6组间感染重数与HPV型别分布关系的分析，结果显示高低危混合感染数高于单纯高危和单纯低危，差异有统计学意义（P＜0.05），随着感染重数增多，HPV型别中高低危混合感染例数增多。

四、HPV感染型别与年龄及地区分布趋势

将708例HPV阳性患者按年龄分为5组，HPV感染型别分布按单纯高危、单纯低危和高低危混合感染3种情况进行分析。如表2所示，这5组人群中HPV感染型别分布的差异无统计学意义（x2=8.34，P＞0.05），但是21岁～年龄组感染率最高。

表2　708例HPVDNA阳性患者的年龄分布（n，%）

山东省按传统分为鲁中（济南，淄博，莱芜，泰安）、鲁东（烟台，青岛，威海，潍坊）、鲁南（临沂，日照，济宁，枣庄）、鲁西（聊城，菏泽）、鲁北（东营，滨州，德州）5个地区。这5个地区间HPV感染情况分布如表3所示，不同地区的HPV感染情况分布差异有统计学意义（x2=23.53，P＜0.05），鲁中和鲁东感染率高于鲁西、鲁南和鲁北地区。

表3　708例HPVDNAP阳性患者的地区分布（n，%）

讨 论

目前，研究热点主要集中于HPV与女性宫颈癌的发生、筛查和预防上，而对于男性HPV感染相关的研究较少，目前尚缺乏相关的流行病学研究资料。近年来，男性尖锐湿疣发病率逐年增加，部分研究显示HPV亚临床感染在不同人群和地域的分布非常复杂［7-9］。为探讨山东地区男性尖锐湿疣患者HPV感染的分布情况，笔者采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA基因芯片技术，对尖锐湿疣皮损拭子或组织进行了HPV亚型检测和分析。此项技术能具体分型及诊断多重感染，敏感性和特异性均高，且稳定性好，有很好的重复性。

本研究中708例HPV阳性患者中检测出了23种HPV亚型感染，最常见的HPV亚型依次为6、11、16、42和43，与其他几个研究的结果不一致。Chan等［10］在中国香港的研究结果显示，最常见的HPV亚型依次为6、11、16、52和84；薛耀华等［11］在广州地区的研究结果显示，最常见的为6、11、16、52和58，这提示HPV感染存在明显的地域差异性。

本研究结果显示，708例HPV阳性患者中，HPV单一亚型感染占51.8%（367/708），以低危型HPV6（38.2%）和HPV11（31.9%）最常见，单一高危亚型以HPV16最常见（7.1%），这与目前国内外的研究相一致［12］。75.4%（534/708）的患者至少有HPV6/11其中一项感染，这也为未来针对男性HPV疫苗的开发提供了数据支持，仅HPV6/11疫苗就有可能使男性尖锐湿疣的发病率下降70%以上。本研究的数据还显示，二重及以上混合感染占48.2%，最多达到十重感染，且七重感染以上均为高低危混合感染，统计分析也显示感染的重数会影响不同亚型的分布，这进一步说明了HPV感染在男性患者中的复杂性。

本研究还发现在21岁～年龄组男性患者中，HPV感染率较高，与国内有关研究相一致［13-15］。我们近期的研究结果也显示，山东省女性HPV感染的高峰年龄也在30岁以下［16］。可能原因在于，此年龄段男性为性活跃人群，接触性伴多，而免疫系统未被致敏，导致这些人群感染率偏高，其检测的型别感染也偏多，这还导致这部分人群HPV传染给性伴的危险性增加。HPV高危亚型是否与尖锐湿疣形成有关，还是单纯的病毒沾染，还有待于进一步证实。Schiffman等［17］认为大部分高危亚型感染会自然消失。

本研究发现HPV型别感染情况存在地区差异，鲁中和鲁东HPV感染率，较鲁西、鲁南和鲁北相比要明显高些。HPV阳性率的不同地区差异还可能与各地不同的教育水平、生活习惯、经济及社会发展、思想开放程度等不一致有关。山东的经济发展明显不均衡，鲁东和鲁中的经济明显要比鲁西、鲁南和鲁北更发达。

综前所述，山东地区男性尖锐湿疣患者HPV感染主要以6、11型为主，好发于青年人，多重HPV混合感染比例高，高低危混合感染较常见。本研究结果有助于掌握山东男性HPV感染的流行病学特征，为未来开发男性HPV疫苗提供科学依据。

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10 Chan PK， Luk AC， Luk TN， et al. Distribution of human papillomavirus types in anogenital warts of men. J Clin Virol 2009； 44（2）： 111-114

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15 杨娜， 刘禄， 赵琪林， 等. 遂宁地区83例尖锐湿疣患者高危型人乳头瘤病毒检测及临床表现分析. 临床医药实践 2013； 22（2）： 89， 149

16 张丽冉， 王睿， 王新国， 等. 山东省女性高危型人乳头状瘤病毒感染的检测分析. 中国癌症防治杂志 2016； 8（1）：38-43

17 Schiffman M， Castle PE， Jeronimo J， et al. Human papillomavirus and cervical cancer. Lancet 2007；370（9590）： 890-907

（2016-04-18收稿）

Analysis of human papillomavirus genotype distribution in 1225 male patients with condyloma acuminatum in Shandong Province

Tian Xinxin1， Wang Rui1， Jiang Lingbo1， Li Yawen1， Qi Debo2*
1. Laboratory of PCR， Jinan Kingmed Center For Clinical Laboratory， Jinan 250101， Shandong， China；2. Department of Pathology， Jinan Kingmed Center For Clinical Laboratory
Corresponding author： Qi Debo， E-mail： bobo8369@163.com； Tel： 0531-88689998

Objectivee To investigate human papillomavirus （HPV） genotype distribution in male patients with condyloma acuminatum （CA） in Shandong Province. Metthhooddss Swabs or tissue samples were obtained from 1225 male CA patients. 23 HPV types in samples were tested by a HPV genotyping chip. Ressuullttss A total of 708 cases were HPV-positive and the positive rate was 57.8%. HPV6 （40.8%） and HPV11 （40.5%） were the most common low-risk HPV genotypes， and HPV 16 （14.1%） was the most common high-risk HPV genotype. Of these 708 HPV-positive patients， 367 （51.8%） had single HPV infection， and HPV 45 and 73 were not detected. Among 341 patients with multiple HPV infections， all 23 HPV genotypes were detected， and mixed low-risk and high-risk HPV infections were most common （P＜0.05）. Patients in 21～30 age group had the highest HPV infection rate （48.5%）. The HPV positive rates in central area （36.9% ） and east area （36.6%）were much higher than that in other areas in Shandong. Concluussiioonn HPV6 and 11 are the major HPV genotypes in male CA patients. Different ages， regions and number of co-infections may infl uence the distribution of HPV genotypes signifi cantly.

males； condylomata acuminata； papillomavirus infections； Shandong

10.3969/j.issn.1008-0848.2016.07.009

R 752.53

E-mail：bobo8369@163.com；Tel：0531-88689998