不同钼、硫水平对小尾寒羊铜需要量影响的研究

吕爱军，穆阿丽，杨维仁，高勇新，辛 娟，李洪涛，杨在宾

（1.青岛市崂山区农林局，青岛 266061；2.山东农业大学动物科技学院，泰安 271018；3.青岛市饲料兽药检测站，青岛 266000；4.青岛博联饲料有限公司，青岛 266327）

营养与饲料

不同钼、硫水平对小尾寒羊铜需要量影响的研究

吕爱军1，2，穆阿丽3，杨维仁2，高勇新4，辛 娟1，李洪涛2，杨在宾2

（1.青岛市崂山区农林局，青岛 266061；2.山东农业大学动物科技学院，泰安 271018；3.青岛市饲料兽药检测站，青岛 266000；4.青岛博联饲料有限公司，青岛 266327）

试验旨在研究不同钼硫水平对小尾寒羊铜需要量的影响。选取60只体重相近（43.0 kg±2.3kg）、健康状况良好的6月龄母羊作为试验动物，随机分为12组，每组5只。试验分两个钼水平：低钼（M1）和高钼（M2）的添加量分别为0mg/kg、5mg/kg；两个硫水平：低硫（S1）和高硫（S2）的添加量分别为0g/kg、2g/kg；每个钼、硫水平的日粮中添加的铜浓度分别为10mg/kg（C1）、15mg/kg（C2）、25mg/kg（C3）。预试期15 d，正试期15 d。结果表明：①在M1S1和M2S1条件下，3个铜添加浓度小尾寒羊血铜含量间无显著差异（P＞0.05）；在M1S2时，日粮添加10mg/kg铜水平的试验羊血铜浓度显著低于添加15mg/kg铜和25mg/kg铜的试验羊组（P＜0.05）；在M2S2条件下，日粮中添加25mg/kg铜水平的试验羊血铜浓度显著高于添加10mg/kg铜组和15mg/kg铜组（P＜0.05）。②随着日粮铜浓度的增加，血清CPL的活性呈现上升趋势。在M1S2组和M2S1组中当日粮中添加10mg/kg铜时，试验羊的血清CPL的活性均显著低于日粮中添加15mg/kg铜组和25mg/kg铜组（P＜0.05）。血清CPL的活性变化在M1S1组时随日粮中铜的变化组间差异不显著（P＞0.05）。③随着日粮铜浓度的增加，试验羊血清Cu-Zn-SOD的活性也呈现上升趋势。其中M1S1时，3个铜添加水平间差异不显著（P＞0.05）；M2S1时添加10mg/kg铜组的血清Cu-Zn-SOD活性显著低于添加15mg/kg铜组和25mg/kg铜组（P＜0.05）；M1S2时添加10mg/kg铜组试验羊的血清Cu-Zn-SOD活性显著低于添加25mg/kg铜组；M2S2时3个铜添加水平组间差异显著（P＜0.05）。由此可见，小尾寒羊日粮铜的适宜供给水平在日粮不加钼硫时为20.5mg/kg；加钼时为25.5mg/kg；加硫时为25.5mg/kg；加钼加硫时为35.5mg/kg。

钼；硫；小尾寒羊；铜需要量

铜、钼和硫均是动物生长发育所必需的重要元素，而小尾寒羊作为反刍动物，饲料中的含硫物质会被其瘤胃微生物转化为硫化物［1］，这就会导致游离的铜离子与钼、硫发生拮抗作用而形成难溶的化合物，从而降低了其对铜的利用率。金艳华等［2］对绒山羊的研究表明，适宜的铜、钼水平可获得较高的养分利用率。吕爱军等［3］关于不同铜、钼水平对小尾寒羊血清生化指标影响的研究表明，当日粮铜水平一定时，提高钼水平会降低血清CPL和SOD活性，这说明高钼的存在对铜的吸收利用是有影响的。也有报道表明，青贮牧草中铜的吸收量在增加钼时会减少，当进一步补充硫时，铜的吸收量会显著减少［4］。这说明硫、钼、铜三者之间存在一定的关系，当三者在日粮中的比例不当时就会影响动物机体对铜的吸收利用。Suttle［5］研究表明，当日粮中含硫2.5 g/kg，含钼大于10mg/kg时可抑制铜的吸收。绵羊饲喂添加1.0g/kg硫和0.5mg/kg钼的基础日粮，若再添加3.0g/kg硫和4.0mg/kg钼会使铜的生物学利用率降低40%～70%［6］。究竟硫、钼、铜三者之间在羊日粮中达到何种水平才能使动物的生产性能得以充分发挥，此时动物机体的相关血液生化指标又会有何变化规律，目前此类研究在国内外报道甚少。本试验通过饲喂低钼低硫、高钼低硫、低钼高硫和高钼高硫4种不同比例的日粮对小尾寒羊血液生化指标的影响进行研究，探索日粮中单独添加钼、硫和混和添加钼、硫是否会影响铜在试羊体内的吸收利用。

1 材料与方法

1.1 试验动物及饲养管理

在泰安小尾寒羊研究所选取体重43.0 kg±2.3 kg的母羊60只作为试验动物，共分为12组，每组5只。试验羊半舍饲饲养，日喂两次（7：30、17：00），先精后粗，自由饮水，每天记录饲料进食量。试验始、末两天早饲前空腹称重。试验前用伊维菌素统一驱虫，预试期15d，正试期15d。

1.2 试验日粮

试验日粮的蛋白质和能量水平按山东农业大学建议的小尾寒羊饲养标准供给［7］；其他营养指标参照NRC（1985）［8］标准。粗料为花生秧，精料以玉米、豆粕为主。试验基础日粮组成及营养水平见表1。

表1 试验基础日粮组成及营养水平

1.3 试验设计

本试验分2个钼水平：低钼（M1）和高钼（M2）的添加量分别为0mg/kg、5mg/kg；2个硫水平：低硫（S1）和高硫（S2）的添加量分别为0 g/kg、2 g/kg；每个钼硫水平的日粮中添加的铜浓度分别为10mg/kg（C1）、15mg/kg（C2）、25mg/kg （C3）。具体设计见表2。

表2 试验设计mg/kg

1.4 血样的采集

在正试期早饲前空腹颈静脉采血15mL，采血后取5mL加抗凝剂-20℃冷冻保存，用于测定血铜含量，另外10mL，37℃水浴凝固10min后，3 000 r/min离心10min，分离血清后立即测定血清CPL和Cu-Zn-SOD的活性。

1.5 样本的测定方法

血液铜的测定：用原子吸收分光光度法。

血清CPL的活性测定：联大茴香胺法［9］，试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。

血清Cu-Zn-SOD的活性测定：黄嘌呤氧化酶法［10］，试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。

1.6 数据处理

利用SPSS软件进行方差分析和多重比较。

2 结果与分析

2.1 不同钼、硫、铜水平下血铜浓度比较分析

由表3可知，随着日粮铜浓度的增加，不同钼硫比例下各组试羊血铜浓度均有上升趋势。在M1S1和M2S1条件下，3个铜添加浓度小尾寒羊血铜含量间无显著变化（P ＞0.05）。在M1S2条件下，日粮添加10mg/kg铜水平的试验羊血铜浓度显著低于添加15mg/kg和25mg/kg铜的试验组（P＜0.05）。在M2S2条件下，试验羊的血铜浓度在日粮中添加25mg/kg铜时显著高于日粮中添加15mg/kg铜组（P＜0.05），极显著高于添加10mg/kg铜组（P＜0.01）。

同一铜水平下，随着钼和硫添加量的增加，血铜浓度呈现下降趋势。其中日粮中添加10mg/kg铜和15mg/kg铜时，M2S2组显著低于其他3组（P＜0.05），而添加25mg/kg铜时各组间差异均不显著（P＞0.05）。

表3 血铜含量比较 μg/mL

2.2 不同钼、硫、铜水平下血清CPL活性比较分析

由表4可知，随着日粮铜浓度的增加，血清CPL的活性呈现上升趋势，但铜对于血清CPL活性影响的这种趋势在M2S2组时表现最为突出，3个铜水平下试验羊血清CPL的活性均随铜添加量的增加而增加（P＜0.05）。在M1S2组和M2S1组中当日粮中添加10mg/kg铜时，试验羊血清CPL的活性均显著低于日粮中添加15mg/kg铜组和25mg/kg铜组（P＜0.05）。在M1S1条件下，血清CPL的活性随日粮中铜的变化差异不显著（P＞0.05）。

在同一铜水平下，M2S2组的试验羊血清CPL活性均低于其他3组，而且除在日粮中添加25mg/kg铜水平下各组间差异不显著外（P＞0.05），其他2个铜添加水平下的M2S2组中试验羊血清CPL活性显著低于其他各组（P＜0.05）。

表4 血清CPL活性比较U/mL

2.3 不同钼、硫、铜水平下血清Cu-Zn-SOD活性比较分析

由表5可知，试羊血清Cu-Zn-SOD的变化规律与血清CPL有相似之处：随着日粮铜浓度的增加，血清Cu-Zn-SOD的活性也呈上升趋势。其中M1S1时，3个铜添加水平间差异不显著（P＞0.05）；M2S1时添加10mg/kg铜组的血清Cu-Zn-SOD活性显著低于添加15mg/kg铜组和25mg/kg铜组（P＜0.05）；M1S2时添加10mg/kg铜组的血清Cu-Zn-SOD活性显著低于添加25mg/kg铜组（P＜0.05）；M2S2时3个铜添加水平之间均差异显著（P＜0.05），其中添加25mg/kg铜组与添加10mg/kg铜组间差异极显著（P ＜0.01）。

表5 血清Cu-Zn-SOD活性比较NU/mL

本试验通过血铜浓度、血清CPL和Cu-Zn-SOD活性3个指标的变化可以判断，M1S1条件下试验羊日粮中需要添加10mg/kg铜；M2S1和M1S2条件下试验羊日粮均需要添加15mg/kg铜；M2S2条件下试验羊日粮则需要添加25mg/kg铜才能满足需求。

3 讨论

3.1 通过血铜估测小尾寒羊对铜的需要量

本试验表明，在低钼低硫和高钼低硫水平下，由于碱式氯化铜在瘤胃中溶解度很小，钼水平低，钼铜拮抗作用减弱，在铜的几种添加水平下，试验羊的血铜水平上升到1.0μg/mL左右，已经达到正常范围0.8～1.2μg/mL［11］。说明此时3个铜水平均能满足试验羊对铜的需要，并且能保持基本恒定。3个日粮铜水平中，试验羊的血铜无差异，这与郭宝林等［12］研究得出的低硫水平不会影响血铜浓度的结果一致，这说明本试验低硫条件下，以日粮铜水平为20.5mg/kg最经济。

在低钼高硫水平下，血铜含量随铜添加量的增加变化更大。当试验羊日粮中铜含量达到20.5mg/kg时，血液中铜浓度刚刚达到正常羊血液中铜浓度的最低值，继续加铜使日粮中铜水平为25.5mg/kg和35.5mg/kg时，血铜水平上升到1.0μg/mL左右，显著高于20.5mg/kg的铜水平组（P＜0.05）。说明日粮中铜水平为25.5mg/kg和35.5 mg/kg时均能满足试验羊对铜的需要，由于这两个铜水平对试验羊的血铜影响无差异（P＞0.05），证明低钼高硫时日粮中铜达25.5mg/kg即可满足试验羊需要。

在高钼高硫水平下，血铜含量随铜添加量的增加变化显著（P＜0.05）。当试验羊日粮中铜含量在35.5mg/kg以下时，血液中铜浓度均未达到报道的正常浓度，只有当日粮中含铜量达到35.5mg/kg时，试验羊血铜水平才达到正常值，此时的铜水平才能满足试验羊对铜的需要。

3.2 通过血清CPL估测小尾寒羊对铜的需要量

血清铜蓝蛋白是一种含铜的蛋白，其活性可以作为衡量反刍动物铜营养状况的指标［13］，它还是小尾寒羊肝脏中的一种急性反应蛋白，因此在应激状态或炎症反应时，活性会增强［14］，因此在试验期间，应密切注意，切勿使试验羊感染疾病或手术刀口处发炎，否则就会影响试验结果。本试验期间试验羊均保持了健康的身体，没有出现疾病或破伤现象。

本试验结果表明，在低钼低硫水平下，当日粮中铜水平高于20.5mg/kg时，血清CPL的活性变化不再敏感（P＞ 0.05），说明当铜需要量得以满足时，血清铜蓝蛋白的活性受日粮铜水平的影响很小，这可能是体液的环境稳定机制作用的结果。

血清CPL的活性在高钼低硫和低钼高硫水平下有相似的变化趋势，20.5mg/kg铜的日粮组，其血清CPL的活性显著低于其他两个高铜水平组（P＜0.05）。原因可能是高钼或高硫水平下，由于钼铜或硫铜的拮抗作用，使铜的吸收量减少，不能满足试验羊对铜的需要，从血铜水平上也可以看到这一点。由此可以推断，当日粮中钼水平达5.5mg/kg或硫水平为3.6 g/kg时，日粮铜水平应至少为25.5mg/kg才能满足试验羊的需要。

在高钼高硫水平下，当试验羊日粮中铜水平在35.5 mg/kg以下时，血清CPL的活性随铜添加量的增加变化显著（P＜0.05）。当日粮中铜水平达到35.5mg/kg时，试验羊血清CPL的活性刚刚达到试验羊的正常水平，此时其活性显著高于其他2个低铜组（P＜0.05）。说明在高钼高硫条件下，日粮铜水平为35.5mg/kg时才能满足试验羊对铜的需要。

3.3 通过血清Cu-Zn-SOD估测小尾寒羊对铜的需要量

Cu-Zn-SOD是一种广泛存在于生物体内的含铜、锌、锰、铁的金属酶。Cu-Zn-SOD的作用是清除体内多余的超氧阴离子，因为超氧阴离子虽是机体代谢所必需，但同时又会发挥强氧化剂的作用，引起蛋白质和核酸变性、多糖降解及过氧化脂质的生成，对生物体造成损伤，降低机体免疫力［15］。Cu-Zn-SOD中的铜是该酶催化中心的组成成分。因此Cu-Zn-SOD与铜有密切的关系。在本试验的研究中发现，在低钼低硫水平下，当日粮中铜水平高于20.5mg/kg时，血清Cu-Zn-SOD的活性变化不再敏感，这说明此时的铜浓度已经能够满足试验羊机体的需求。

在高钼低硫水平下，Cu-Zn-SOD的活性也随着铜添加量的增加而升高，这种变化趋势与低钼高硫条件下也很相似。其中日粮铜水平为25.5mg/kg组其Cu-Zn-SOD的活性显著高于20.5mg/kg铜水平组（P＜0.05）。其原因可能是高钼或高硫水平下的铜不足以满足试验羊的需要，试验羊机体处于缺铜状态，血清Cu-Zn-SOD对日粮中铜的变化反应敏感，这与吴建设［16］报道的用含铜酶作为机体铜状况标识虽然全面灵敏，并可提高准确性，但只限于缺铜状况的看法一致。同时说明日粮中铜水平为25.5mg/kg时，可以满足试验羊在高钼低硫或低钼高硫条件下对铜的需要。

在高钼高硫水平下，日粮铜含量35.5mg/kg组试羊血清Cu-Zn-SOD活性显著高于25.5mg/kg组（P＜0.05），极显著高于20.5mg/kg组（P＜0.01），说明此时的铜水平满足试验羊对铜的需要。

以上血液生化指标的分析表明：日粮中单独的高钼和高硫水平均会使试验羊血铜浓度、血清CPL和Cu-Zn-SOD活性降低，这与李淑清等［17］和杨在宾［18］的报道基本一致。而钼和硫相加的结果会使血铜浓度、血清CPL和Cu-Zn-SOD活性3个指标进一步降低，说明高钼和高硫与铜在试验羊机体内产生了更大的拮抗，使铜的吸收和利用率大大降低，从而血铜浓度也相应降低，这一结论与Underwood［4］的报道非常相似。通过以上的研究结果，可以推测高钼和高硫与铜在试验羊机体内产生了更大拮抗的原因可能是因为铜、钼、硫三者除形成难溶解的硫钼酸盐复合物外，硫和铜以及钼和铜还有各自单独的相互作用影响。

本试验还发现，在同一铜水平下，血铜、血清CPL及Cu-Zn-SOD的活性受钼、硫的影响很大。杨在宾［18］报道，碱式氯化铜在瘤胃中溶解度很小，可以穿过瘤胃，减少与钼的拮抗，因此铜的生物学利用率会提高，血铜、血清CPL以及Cu-Zn-SOD的活性，无论在高钼（硫）还是低钼（硫）水平下都应相近，但事实并非如此。血铜、血清CPL及Cu-Zn-SOD受钼（硫）的影响很大。这可能是因为钼铜拮抗作用不仅发生在瘤胃中，而且存在于其他器官中。王宗元［19］认为硫钼酸盐不仅在瘤胃中干扰铜的代谢，而且还会在血液中影响铜的运输。结果是铜无法被充分利用，钼越高，干扰作用越强，铜的生物学利用率越低。

4 小结

（1）在本试验条件下，日粮中不添加钼、硫时血铜浓度、血清CPL和Cu-Zn-SOD活性随着日粮铜水平的提高变化不显著（P＞0.05），在分别添加和同时添加钼、硫时3个血液指标随日粮中铜水平的升高呈上升趋势。

（2）在本试验条件下，小尾寒羊日粮铜的适宜供给水平在日粮不加钼硫时为：20.5mg/kg；加钼时：25.5mg/kg；加硫时：25.5mg/kg；加钼加硫时：35.5mg/kg。

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［2］金艳华，朱晓萍，贾志海，等.日粮铜钼水平对辽宁绒山羊营养物质消化代谢的影响［J］.中国农业大学学报，2010，15（4）：76-81.

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［19］王宗元.钼诱导反刍动物铜缺乏病发病机理研究进展［J］.中国兽医杂志，1989，15（2）：61-64.

过刊征订

1.《中国草食动物》杂志1999年（1~6期）21元，2000—2002年（1~6期）27元，2003年（2~6期）33元，2004—2008年（1~6期）39元，2009—2015年（1~6期）48元（均含挂号邮资）；

2.有2002、2003、2004、2005、2006和2007年养羊专辑（包括品种、遗传、繁育、营养、市场等内容），价格分别为31、34、26、58、38、28元，含挂号邮资，数量有限，欲购从速；

3.请您汇款时务必写清楚通讯地址、邮政编码等事宜，以便准确投寄。

《中国草食动物科学》杂志社

Influence of Different Molybdenum and Sulfur Levels on the Copper Requirement in Small-tail Han Sheep

Lv Aijun1，2，Mu Ali3，Yang Zaibin2，et al
（1.Laoshan Bureau of Agriculture and Forestry，Qingdao266061，China；2.College of Animal Science and Technology，Shandong Agricultural University，Taian 271018，China；3.Qingdao Inspection Station of Feed and Veterinary Drug，Qingdao266000，China）

The objective of this test was to study the effects of different molybdenum and sulfur levels on the copper requirement of Small-tail Han sheep.60 sheep with similar body weight（43.0 kg±2.3 kg）and good health condition were selected and randomly divided into 12 groups with 5 per group.The experiment divided into two levels of Mo：low Mo（M1）and high Mo（M2） added amount 0 mg/kg and 5 mg/kg respectively；two sulfur levels：low sulfur（S1）and high sulfur（S2）addition were 0g/kg and 2 g/kg.Each level of Mo and S diets adding copper concentration was 10 mg/kg（C1），15mg/kg（C2），and 25 mg/kg（C3）respectively.The pre-test period was 15 days，and the trial period was 15 days.The results showed that：①In the conditions of M1S1and M2S1，there were no significant changes between the concentration of three copper adding（P＞0.05）.In the M1S2，diets added 10 mg/kg copper levels in experimental sheep，the blood copper concentration was significantly lower than those of the 15mg/kg and 25mg/kg groups（P＜0.05）.In the M2S2，the blood copper concentration in the diets added 25 mg/kg copper level was significantly higher than those of the 10mg/kg and 15mg/kg groups（P＜0.05）.②With the increase of dietary copper concentration,the activity of serum CPL showed rising trend.In the M1S2and M2S1groups，the CPL activity of the 10mg/kg copper addition group was significantly lower than those of 15mg/kg and 25mg/kg groups（P＜0.05）.The change of CPL activity in M1S1group was not significant with the change of copper in the diet（P＞0.05）.③With the increase of the concentration of copper in serum，the activity of serum Cu-Zn-SOD also showed an upward trend.In the M1S1，the differences among the three copper addition levels were not significant（P＞0.05）.In the M2S1，the activity of Cu-Zn-SOD of the 10mg/kg copper addition group was significantly lower than those of the addition of 15 mg/kg and 25 mg/kg groups（P＜0.05）.In the M1S2，the activity of Cu-Zn-SOD of the 10mg/kg copper addition group was significantly lower than that of the 25mg/kg group （P＜0.05）.In the M2S2，the Cu-Zn-SOD activities of three levels copper addition groups were significantly different（P＜0.05）. It was concluded that the suitable supply level of copper for Small-tail Han sheep was 20.5 mg/kg when Mo and S were not added to the diet；25.5mg/kg when Mo and S were added respectively；and 35.5mg/kg when Mo and S were added simultaneously.

molybdenum；sulfur；Small-tail Han sheep；copper requirement

S826.5

A

2095-3887（2016）04-0019-05

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.04.006

2016-06-03

吕爱军（1979-），男，畜牧师，主要从事动物科学研究和技术推广工作。

杨在宾（1961-），男，教授，博士生导师，主要从事动物营养与饲料科学方面的研究。