复方片仔癀肝宝对酒精性肝病的抗炎作用

陈达鑫，林珊，赵锦燕，孙志伟，洪振丰

（1.福建中医药大学中西医结合研究院，福建福州350122；2.福建省中西医结合老年性疾病重点实验室，福建福州350122）

·实验研究·

复方片仔癀肝宝对酒精性肝病的抗炎作用

陈达鑫1，2，林珊1，2，赵锦燕1，2，孙志伟1，2，洪振丰1，2

（1.福建中医药大学中西医结合研究院，福建福州350122；2.福建省中西医结合老年性疾病重点实验室，福建福州350122）

目的观察复方片仔癀肝宝对酒精性肝病模型大鼠的抗炎作用。方法60只SPF级SD大鼠，随机分为空白对照组、模型组、阳性药对照组、肝宝低、中、高剂量组，每组10只，制作酒精性肝病大鼠模型，检测血清TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c，HDL-c的含量变化；Elisa检测IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10的表达，观察肝脏组织的病理变化。结果模型组TG、ALT、AST、TBIL、ALP、LDH、LDL-c、IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10活性较阳性对照组明显上升（P＜0.05），HDL-c水平明显下降（P＜0.01）。与模型组比较，肝宝3组的TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、IL-1β、IL-8活性明显降低，HDL-c水平明显上升（P＜0.05），IL-4含量下降，并存在量效关系，肝脏病理学观察，复方片仔癀肝宝各剂量组和阳性对照组能有效改善大鼠肝脏的颜色及质地。结论复方片仔癀肝宝对酒精性肝病有一定的治疗作用，其机制是降低炎症介质的产生，发挥抗炎作用。

酒精性肝病；复方片仔癀肝宝；抗炎作用。

酒精性肝病（alcoholie liver disease，ALD）是长期大量饮酒引起的严重危害身体健康甚至威胁生命的消化系统疾病，包括酒精性脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝癌等［1］。随着我国酒精消费量的增加，ALD在肝脏病的发病率和死亡率提高［2］，已成为继病毒性肝病后的肝脏第2大致残、致死疾病［3］。乙醇及其代谢产物直接或间接诱导炎症反应，氧化应激、炎症介质和代谢紊乱是ALD发生的主要原因。复方片仔癀肝宝是一种中成药制剂，由牛黄、三七、蛇胆、茵陈、龙胆草、栀子、白芍组成。前期研究［4-5］发现复方片仔癀肝宝有较好的保肝护肝作用，本实验以乙醇和高脂喂养制作慢性肝损伤大鼠模型，用复方片仔癀肝宝进行干预治疗，研究复方片仔癀肝宝对慢性肝损伤的保护作用，为临床应用提供实验依据。

1　实验材料

1.1动物饲养条件SD大鼠60只，雄性，SPF级，体质量（200±20）g，许可证号：SCXK（沪）2008-0016，上海斯莱克实验动物有限公司提供。饲养环境，温度：20℃～24℃，湿度：40%～70%，风速：0.1～0.2 fm／s，气流：≥28次／min。

1.2药物及试剂复方片仔癀肝宝（福建省片仔癀药业有限公司，批号：1409009）；IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10酶联免疫吸附试验试剂盒（上海拜沃生物科技有限公司）；无水乙醇，分析纯（上海凌峰化学试剂有限公司）。

1.3仪器FA1104N电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；TGL-16G低温离心机（上海安亭科学器材公司）；Bayer ADVIA2400全自动生化分析仪（德国西门子公司）；64R低温高速离心机（美国Backman公司）；ELX808酶标仪（德国宝特公司）。

2　实验方法

2.1动物分组、模型制备及给药SPF级雄性大鼠60只，体质量（180±10）g，10只作为正常对照组（空白组）饲养，为防止空白组在长时间饲养后出现脂肪肝，依经验每周给予2 d全粗粮饲料喂养。其余动物进行造模，以乙醇合高脂饲料干预，每日1次。造模前3天用15%乙醇0.7 mL／100 g进行适应性灌胃，第4天开始每日定时以30%乙醇0.7 mL／100 g灌胃。2周后，造模大鼠随机分为5组：模型组、600 mg／kg水飞蓟宾葡甲胺片阳性对照组（阳性对照组）、150 mg／kg肝宝组（肝宝低剂量组）、300mg／kg肝宝组（肝宝中剂量组）、600mg／kg肝宝组（肝宝高剂量组），每组10只，定时给药，灌药时间与灌乙醇时间间隔2 h，连续4周，空白组、阴性对照组灌胃等量的生理盐水。第4周末次给药24 h后，用3%戊巴比妥钠60 mg／kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，分离血清，-20℃保存，用于血液生化指标的测定，取肝脏右中央叶作病理学分析。

2.2生化分析取大鼠腹主动脉血，2 000 r／min离心10 min，分离得到血清，用全自动生化分析仪检测大鼠血清中TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c、HDL-c活性。

2.3炎症因子检测按照酶联免疫吸附试验试剂盒操作说明，检测血清中IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10含量。

2.4肝组织形态学观察取全肝，拍照记录，观察肝组织形态改变。多聚甲醛固定肝右中央叶组织，制备石蜡切片，HE染色，光镜下观察肝组织病理改变。

2.5统计学处理数据用x±s表示，用SPSS 18.0软件分析，多组均数间比较用单因素方差分析检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

3　结果

3.1一般行为状态实验期间正常组大鼠精力充沛，灵活，饮食正常，毛色有光泽，尿液浅黄色。造模后，除正常对照组外，其余各组大鼠的活动明显下降，饮水进食明显减少，毛色缺乏光泽，尿液深黄色。复方片仔癀肝宝组及阳性组较模型组稍好，尿色较模型组略淡。

3.2指标测定见表1、表2。

表1　复方片仔癀肝宝对血清TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDLD和HDLD的影响U／L

表2　复方片仔癀肝宝对血清中炎症因子含量的影响pg／mL

3.3病理组织学结果肉眼观察正常对照组大鼠肝脏呈红褐色，表面光滑，质软。模型组大鼠的肝脏肿大，呈白褐色，边缘钝，质硬，表面有大量纤维渗出物，同时出现细小颗粒，淤血明显。复方片仔癀肝宝各剂量组和阳性对照组有效改善大鼠肝脏的颜色及质地，其中高剂量组变化明显。光镜下观察6组大鼠肝脏病理组织学改变，正常对照组可见肝小叶轮廓清晰，小叶中央静脉向四周呈放射状排列，肝细胞排列尚整齐，细胞分界清，核圆，位于细胞中央，无脂肪变性。模型组可见肝小叶结构破坏，肝板排列紊乱，呈点、片状坏死，肝细胞肿胀明显，胞质疏松，可见大小不等脂肪空泡，伴有脂滴融合将细胞核挤压在细胞一侧。肝宝治疗组大鼠肝细胞内脂肪空泡明显减少，以中、小空泡为主，肝细胞体积减小，部分肝细胞形态趋于正常，见图1。

4　讨论

4.1长期饮酒引起的酒精性脂肪肝，属TG堆积的脂肪肝类型，会引起血液中TG升高。当肝组织处于正常状态时，肝细胞中的ALT、AST无明显外漏，故血清中的ALT、AST属于正常较低的水平。当肝脏受到损害时，胞浆内的ALT和AST向肝血窦溢出，并进入周围血流，血清ALT、AST活性增加，提示肝细胞破坏，细胞膜通透性增强及线粒体受到损伤［6－7］。模型组大鼠血清中TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c水平明显升高，HDL-c水平降低，表明模型大鼠肝损伤明显。给予不同剂量复方片仔癀肝宝和阳性药物干预后大鼠血清中TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH和LDL-c活性不同程度地降低，HDLD升高，说明复方片仔癀肝宝片对酒精诱导所致大鼠慢性肝损伤起到了明显的保肝降酶作用。

4.2乙醇进入人体后可损伤小肠黏膜，使肠黏膜的通透性增大，肠源性的内毒素入血增多。血液中的内毒素可激活肝脏中的固有免疫细胞-Kupffer细胞，产生大量的炎症因子，如IL-1β、IL-4和TNF-α，大量的炎症因子可导致炎症级联反应，导致肝细胞损伤和凋亡［8］。受损的肝细胞释放的IL-8会导致炎症的持续发生，并刺激Kupffer细胞产生更多的TNF-α，进一步增加肝细胞凋亡［9］。IL-10是一种具有调节细胞增殖分化、免疫及非免疫活性的负性调节因子，ALD时，IL-10通过抑制Kupffer细胞的活化，减少炎症因子的产生，负向调控炎症反应强度，起到保护肝细胞的作用［10］。实验结果提示复方片仔癀肝宝在不影响IL-10的前提下，能有效降低炎症因子IL-1β、IL-4和IL-8，说明其在ALD的发生、发展全过程中，都起到了对抗、治疗肝损伤的作用。

复方片仔癀肝宝能够显著改善ALD模型大鼠肝脏损伤程度，降低血清TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c水平提高HDL-c水平，提示复方片仔癀肝宝对ALD有一定的抗炎作用，进一步研究发现其可调控IL-1β、IL-4和IL-8等炎症因子，推测其抗炎作用与通过抑制巨噬细胞的产生和释放炎症因子，降低炎症反应强度有一定关系。

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R285.5

B

1000-338X（2016）05-0006-03

2016-07-06

福建省科技厅资助课题（2010YZ0001-1）

陈达鑫（1987—），男，助理实验师，主要从事中西医结合基础研究。

洪振丰（1953—），男，教授。E-mail：zfhong1953@163.com