女性生殖道解脲支原体感染状况及其分群价值的研究

钱迎芬

(昆山市第四人民医院 检验科,江苏 昆山215331)



女性生殖道解脲支原体感染状况及其分群价值的研究

钱迎芬

(昆山市第四人民医院 检验科,江苏 昆山215331)

目的 探讨女性生殖道解脲支原体感染状况以及分群对女性生殖健康的意义。方法 选取拟诊断为阴道炎或者非淋菌性尿道炎患者220例作为病例组，选用健康查体者200例作为对照组，观察两组解脲支原体感染情况以及分群价值。结果 ①病例组中检测到Uu阳性患者79例，阳性率为35.9%；对照组检测到Uu阳性为62例，阳性率为31.0%，两组受检者Uu阳性率差异无统计学意义(P>0.05)；②病例组中生物1群占72.2%，生物2群占24.1%，对照组生物1群占83.9%，生物2群占9.7%，两组患者生物1群和生物2群各自所占比例差异有统计学意义(P<0.05)。感染后18 h、24 hUu2群明显高于Uu1群和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 女性生殖道解脲支原体感染与亚群比例出现异常有关，生物2群具有毒性作用，临床上进行分群有利于对解脲支原体感染进行诊断。

解脲支原体；亚群；女性；生殖道;感染

(ChinJLabDiagn,2016,20:1706)

在众多支原体感染中，解脲支原体(Uu)感染是泌尿生殖道感染最常见的种类[1]。目前临床上应用多克隆技术鉴定出Uu有近十多个血清型，但是其生物学特性不尽相同[2]。根据分子生物特性不同，UU在临床上可分为2个生物群。本研究通过对女性生殖道解脲支原体感染状况和两种生物群不同毒性分析，探讨分型对女性生殖健康的影响，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2015年1月在我院泌尿外科、妇科、皮肤性病科进行诊断，初次拟诊断为阴道炎或者非淋菌性尿道炎患者220例作为病例组，年龄22-54岁，平均年龄(38.4±10.4)岁；平均孕次(2.17±1.02)次，平均产次(0.52±0.23)次，月经周期(30.28±4.08)天；纳入标准：①患者月经周期规律，行妇科检查以及B超检查未发现子宫卵巢异常；②基础体温测定或B超监测3个周期有排卵；③排除滴虫性以及霉菌性阴道炎。对照组选择健康查体者200例，年龄23-55岁，平均年龄(37.6±9.8)岁；平均孕次(2.33±1.08)次，平均产次(0.47±0.21)次，月经周期(29.84±4.12)天。两组患者年龄、孕次、产次、月经周期差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 采集及检验方法 在患者宫颈处应用无菌拭子插入宫颈内口1-2 cm，旋转1周，取2次分泌物，一份用于做Uu培养，一份用于PCR检测。液体培养基配方为20万U/ml青霉素0.5 ml、10% L-半胱氨酸盐酸盐0.5 ml、10%尿素2 ml、马血清20 ml、0.4%粉红0.5 ml、2PLO培养基2.1 g、5%酵母浸液10 ml；固体培养基则在液体培养基基础上加入1.5 g琼脂粉制作而成。待培养基出现经典“油煎蛋样菌落”则为阳性[3]。阳性标本则放置在-20℃冰箱备用。提取阳性培养基培养的Uu DNA，运用PCR检测手段，根据Uu的MB基因设计，通用引物序列为UMS-125:5′-GTA TTT GCA ATC TTT ATA TGT TTT CG-3′;UMA-226:5′-FAM-CAG CTG ATG TAA GTG CAG CAT TAA ATT C-3′。生物1群特异性DNA片段序列为UMS51:5′-TTC TGG GCT ATG ACA TTA GGT GTT ACC-3′;UMA427:5′-ACC TGG TTG TGT AGT TTC AAA GTT CAC-3′，扩增物大小为403/404 bp。生物2群的特异性DNA片段序列为UMS-170:5′-GTA TTT GCA ATC TTT ATA TGT TTT CG-3′;UMA263:5′-TTT GTT GTT GCG TTT TCT G-3，扩增物片段大小为448 bp。细胞培养和刺激实验：单核细胞株(THP-1)培养用含10%胎牛血清的RPMI-1640，在细胞生长对数期进行细胞收集。将细胞接种于6孔板中(接种密度105个/ml)，用无血清的RPMI-1640培养24小时后，进行Uu的刺激试验。需要进行孵育的浓度为105CCU/ml。每个浓度做三个复孔。在Uu感染细胞6 h、12 h、18 h和24 h进行观察。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)检测选用双抗体夹心酶联免疫吸附法，试剂盒为美国R&D公司，具体操作按说明书进行。

2 结果

2.1 两组受检者Uu阳性率对比 本研究所选的220例患者中，检测到Uu阳性患者79例，阳性率为35.9%；对照组100例受检者中，检测到Uu阳性为62例，阳性率为31.0%，两组受检者Uu阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2Uu分群及阳性率对比 本研究病例组中感染Uu的79例患者中，生物1群共57例，占72.2%；生物2群共19例，占24.1%；混合感染者共3例，共占3.8%。对照组中Uu阳性的62例受检者中，生物1群共52例，占83.9%；生物2群共6例，占9.7%，混合感染共4例，占6.5%。两组患者生物1群和生物2群各自所占比例差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 病例组中不同生物群感染THP-1细胞的MIF表达 感染后6h、12h三组间MIF浓度差异无统计学意义(P>0.05)；感染后18h、24hUu2群明显高于Uu1群和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，而Uu1群与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 病例组中不同生物群感染THP-1细胞的MIF表达

注：与其他两组相比，*P<0.05

3 讨论

解脲支原体是一种寄生在人类泌尿生殖道中的微生物，具有强烈的致病力，能引起患者出现急性输卵管炎、尿道炎和子宫内膜炎等疾病，导致患者出现习惯性流产、不孕不育和死胎[4]。有研究认为Uu是条件性致病菌，当患者因环境改变或者自身免疫低下时，原本镶嵌在细胞表面的Uu会通过其特殊的顶端粘附结构紧紧黏附在细胞表面，然后释放NH3和过氧化物等毒性代谢产物，从而导致细胞损伤和炎性反应[5]。本研究发现，病例组和对照组Uu检测阳性率差异无统计学意义，说明作为一种条件致病菌，凭检测是否存在Uu来判定患者为解脲支原体感染是不可能的，这对解脲支原体感染的诊断和治疗带来了困难。目前临床上根据不同亚型的Uu的生物学特性，将Uu分为生物1群和生物2群。其中生物1群包括基因型1、基因型3和基因型6，其对应的血清型分别为1、(3、14)和6，生物2群则包括基因型4(血清型4、7、10、11、12、13)和基因型8(血清型2、5、8、9)[6]。研究认为，不同生物群代表毒性不同，通常具有毒性的为生物2群，其在正常女性生殖系统所占比例较小，因此不会出现病理特征[7]。有研究通过采用病例对照研究，在特发性早产的妇女和健康女性子宫颈取样本进行检测发现，出现早产的女性Uu生物2群所占比例为43%，而健康女性只有5%，猜测生物2群能够导致产妇出现早产[8]。也有研究发现，在性服务者生殖系统中，Uu生物2群所占比例大概为正常女性的5倍，这可能为其容易出现生殖系统疾病的原因[9]。本研究显示，在感染Uu患者中，生物2群所占比例明显高于正常对照组，验证了上述观点。

MIF是一种引起迟发性超敏反应的细胞因子，参与体内大多数的免疫应答和炎性反应，主要由单核巨噬细胞分泌。当巨噬细胞受到刺激后，大量分泌MIF，促进其在炎症局部浸润增生，并增强巨噬细胞分泌其他炎性因子[10]。而Uu感染能够激活并刺激巨噬细胞分泌MIF，机制主要为MIF能够阻止糖皮质激素对NF-kβ的结合，使NF-kβ进入细胞核结合DNA促进大量炎性因子的合成。本研究显示，在感染18 h后，Uu2群能够明显刺激单核巨噬细胞分泌MIF，而Uu1群感染后巨噬细胞分泌MIF与对照组差异无统计学意义，说明Uu生物2群具有毒性作用，生物1群不具备毒性作用。

综上所述，解脲支原体感染是由于外界因素导致其亚群比例出现异常，导致具有毒性作用的生物2群大量繁殖，从而引起患者炎性反应。

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Study on the status and value of clustering of Ureaplasma urealyticum infection in female genital tract

QIANYing-fen.

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFourthPeople′sHospitalofKunshan,Kunshan215331,China)

Objective To explore the significance of female genital tract Ureaplasma urealyticum infection and clustering of female reproductive health.Methods Selected vaginitis or non gonococcal urethritis patients 220 cases as case group,Selected 200 healthy persons as control group,Observe two groups of Ureaplasma urealyticum infection and group value.Results 79 cases of Uu positive patients to the detection of cases,the positive rate was 35.9%;The control group detected 62 cases were Uu positive,the positive rate was 31%,There was no significant difference of Uu positive rate in two groups of subjects (P>0.05); The case group in biovar 1 accounted for 72.2%,accounted for 24.1% of the 2 biological group,The control group of 1 biological group accounted for 83.9%,accounted for 9.7% of the 2 biological group,Two groups of patients with 1 groups and 2 groups of biological organisms their proportions were statistically significant (P<0.05).After infection,the 24hUu2 and 18h groups were significantly higher than the Uu1 group and the control group,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion Female genital tract Ureaplasma urealyticum infection and abnormal related subsets,Biological 2 groups have toxic effect,The clinical grouping is conducive to the diagnosis of Ureaplasma urealyticum infection.

Ureaplasma urealyticum;subgroup;female;reproductive tract;infection

1007-4287(2016)10-1706-03

R711.31

A

2015-07-08)