辽东楤木叶中齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯的分离与鉴定*

邹淑君，李　靖，许树军

（黑龙江中医药大学 a.药学院；b.实验中心，黑龙江 哈尔滨 150040）

分析测试

辽东楤木叶中齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯
的分离与鉴定*

邹淑君a，李靖a，许树军b*

（黑龙江中医药大学 a.药学院；b.实验中心，黑龙江 哈尔滨 150040）

经过乙醇溶液提取、正丁醇萃取、色谱法分离，从辽东楤木（Aralia elata）的叶中分离并鉴定了1个三萜皂苷化合物。利用化学显色法、HPLC谱、核磁共振谱和质谱方法鉴定，确定该化合物为齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯，是第一次从成熟的辽东楤木叶中分离得到。

辽东楤木叶；三萜皂苷；分离；结构

辽东楤木（Aralia elata）是五加科木属植物，春季初发的嫩芽作为优良的绿色食品山野菜可供食用［1］，成熟的辽东楤木不同部位在临床上均有应用［2］，因此，辽东楤木属药食两用珍品，该植物在我国东北地区分布广泛。多年来，俄罗斯、日本、韩国和我国学者们在不断的实验过程中发现辽东楤木富含三萜皂苷类成分，且证明从辽东楤木提取出的三萜皂苷类物质具有降血糖、抗炎、抗心血管疾病、抗肿瘤及保肝作用等［3-5］。由于早期人们不断地采伐辽东楤木的根及根皮入药，导致该天然资源越来越少，而叶资源是可再生的，因此，近年来学者们开始逐渐对辽东楤木叶资源进行开发研究，确定叶中的药效物质也是利用该植物资源的重要部分。并且证明了叶的皂苷提取物口服毒性较小［6］。目前，从辽东楤木叶中分离出的化合物有皂苷类物质、多糖类物质、脂肪类化合物、黄酮类物质等。本研究从辽东楤木成熟叶中提取分离出一系列三萜皂苷类成分，目前，经化学法、高效液相色谱法、核磁共振法及质谱法鉴定出其中一个相对简单的化合物的结构。

1　实验部分

1.1仪器和材料

LC-2010型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科贸有限公司）；旋转蒸发仪（上海申胜生物技术有限公司）；电子分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；AutoSpec质谱仪（英国MicroMass公司）；ARX-300型核磁共振光谱仪（德国Bruker公司）；高效薄层板Kieselgel60 F254及反相色谱用RP18薄层板（青岛海洋化工厂）；柱色谱用硅胶填料（200～300目，青岛海洋化工厂）；柱色谱用ODS填料（120A，德国默克公司）；AB-8型大孔树脂（河北华众化工有限公司）。

辽东楤木叶采自黑龙江省尚志市帽儿山下，经黑龙江中医药大学药学院药用植物教研室全体教师鉴定；水为二次蒸馏水，其他所用试剂为国产分析纯。

1.2实验方法

阴凉处干燥的辽东楤木叶粉碎（4kg），用70%乙醇加热回流提取3次，每次2h。合并提取液，减压回收至无乙醇味后过大孔树脂，然后依次用石油醚、氯仿、水饱和的正丁醇萃取。收集正丁醇萃取液并低温真空干燥得淡黄色粉末总皂苷120g。总皂苷经高效薄层板GF254及反相色谱RP18薄层板确定硅胶柱色谱条件，氯仿-甲醇-水系统梯度洗脱，洗脱液经薄层板及高效液相色谱检查后相近者合并，得到6个部分。将第2个部分再经硅胶分配柱色谱（CHCl3∶MeOH∶H2O=8∶1∶0.1）得到A、B、C、D 4个部分。将C部分（约6.1g）经硅胶分配柱色谱，流动相分别经历（CHCl3∶MeOH∶H2O=10∶1∶0.1）及（CHCl3∶MeOH∶H2O=5∶1.2∶0.1）得到a、b、c、d 4个部分。对c部分进行ODS反相柱色谱（CH3OH与H2O梯度洗脱）分离得到多个单体化合物。

化合物鉴定方法：经Molish及Liebermann-Burchard显色反应；水解产物经HPLC色谱检测，条件为：DiamonsilC18（2）（250×4.6mm，5μm）柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱80min，流速1.0mL·min-1，柱温30℃；Alltech ELSD 2000ES型蒸发光散射检测器，ELSD参数：漂移管温度110℃，载气（N2）流速3.2mL·min-1；核磁共振谱：以TMS为内标物质，C5D5N为溶剂，1H-NMR谱300 MHz，13C-NMR谱75 MHz。

2　实验结果

上述分离的系列化合物正在进行鉴定与分析，目前确定其中一个最简单的化合物X的鉴定结果如下：

化合物为白色无定形粉末状物质，Molish反应呈阳性，Liebermann-Burchard反应呈阳性。负性快原子轰击质谱测定其分子量为618。酸水解产物经过高效液相色谱与齐墩果酸和标准葡萄糖对比，检出葡萄糖、齐墩果酸和化合物X本身。碱水解后微酸化产物也检测到葡萄糖和齐墩果酸，说明葡萄糖与齐墩果酸可能以酯键的形式结合。化合物的1HNMR谱在δ5.30给出归属于1个葡萄糖的端基质子信号，7个特征的甲基质子信号：0.91（3H，s，23-CH3）、0.93（3H，s，25-CH3）、0.99（3H，s，24-CH3）、1.02（ 3H，s，29-CH3）、1.09（3H，s，26-CH3）、1.24（3H，s，30-CH3）、1.77（3H，s，27-CH3）；1个烯氢质子信号δ5.61（1H，br.s，H-12）。13C-NMR谱在δ95.7处叶出现1个糖的端基碳信号，烯碳信号122.8，144. 1及羰基碳信号176.3，表明苷元为齐墩果酸型。另外的13C-NMR谱信号为：39.1（C-1）、27.9（C-2）、78.1（C-3）、39.4（C-4）、55.8（C-5）、18.6（C-6）、33.4（C-7）、39.9（C-8）、48.2（C-9）、37.2（C-10）、23.7（C-11）、122.7（C-12）、144.3（C-13）、42.1（C-14）、28.3（C-15）、23.6（C-16）、46.9（C-17）、41.7（C-18）、46.4（C-19）、30.9（C-20）、34.1（C-21）、32.7（C-22）、28.4（C-23）、17.0（C-24）、15.7（C-25）、17.4（C-26）、26.2（C-27）、176.3（C-28）、33.3（C-29）、23.6（C-30），为苷元13C-NMR谱的数据。及95.7（C-1'）、74.4（C-2'）、79.1（C-3'）、71.3（C-4'）、79.2（C-5'）、62.2（C-6'），为葡萄糖部分13C-NMR谱的数据。根据以上数据并结合文献［7］推测化合物X的结构如图1。命名为齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯（Oleanolic acid-28-O--β-D-glucopyranosylester）。

图1　齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯的结构式Fig.1　Structural skeleton of Oleanolic acid-28-O--β-D-glucopyranosyl ester

3　结论

从辽东楤木叶中首次分离出化合物齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯。叶中分离的许多成分往往也存在于嫩芽、根或茎中。辽东楤木全身都是宝，其叶每年可以再生，所以充分利用叶资源可以保护该资源的可持续利用。因此，叶中的成分研究已成为该植物研究的热点。目前，从辽东楤木全株分离的三萜皂苷成分已经有140多种。随着叶中新化合物的不断发现，可以挖掘叶的更多的药用价值，并且可为从不同角度利用根、茎、叶提供参考。

［1］ 王忠壮，胡晋红，于占洋，等.楤木属植物的生物学研究及应用［M］.上海：第二军医大学出版社，2001.4-7.

［2］ 南京中医药大学.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，2006.885-886.

［3］ 张家鑫，田瑜，孙桂波，等.龙牙楤木皂苷类成分及药理活性研究进展［J］.中草药，2013，44（6）：770-779.

［4］ 张秀萍，孙达辰，肖洪彬.辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤作用研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2015，21（11）：232-234.

［5］ 王丽岩，肖洪彬，王鸣慧.辽东楤木叶总皂苷抗急性肝损伤的实验研究［J］.中医药信息，2009，26（2）：29-30.

［6］Fengjin Li，Xiaoli He，Wenying Niu，et al.Sub-chronic safety evaluation of the ethanol extract of Aralia elata leaves in Beagle dogs［J］.Regulatory Toxicology and Pharmacology，2016，（79）：1-11.

［7］ 匡海学.中药化学［M］.北京：中国中医药出版社，2003.250-252.

Isolation and identification of oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranosyl ester in leaves of Aralias elate*

ZOU Shu-juna，LI Jinga，XU Shu-junb*
（a.College of Pharmacy；b.Experiment Center，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

After extracted by ethanol solution and butanol，chromatographic method were used to extract and separate the saponin.A saponins was isolated from leaves of Aralia elata.Chemical coloration method，HPLC，NMR and MS were used to analyze the purity and the determine structure.This compound was identified as Oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranosyl ester.It was separated from leaves of Aralia elata firstly.

leaves of Aralia elata；triterpenoid saponin；separation；structure

R284.1

A

2016-09-12

中国博士后科学基金面上项目（2014M551289）

邹淑君（1974-），女，副教授，黑龙江中医药大学在站博士后工作人员，研究方向：中医药药物分析。

许树军，男，高级实验师，研究方向：中药药剂及药物分析。