妇炎消胶囊含量测定方法的改进

袁文静，袁文鹏

（1.河南省周口市食品药品检验所，河南周口466000；2.河南省项城市中医院，河南项城466200）

妇炎消胶囊含量测定方法的改进

袁文静1，袁文鹏2

（1.河南省周口市食品药品检验所，河南周口466000；2.河南省项城市中医院，河南项城466200）

目的建立测定妇炎消胶囊中大黄素和大黄酚含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇-0.1%的H3PO4（80∶20），波长为288 nm，流速为1.0 mL/min。结果大黄素进样量在0.048 7～0.292 2 g范围内、大黄酚进样量在0.122 7～0.736 1 g范围内与峰面积积分值线性关系良好；回归方程大黄素为Y=0.363 77 X-0.387 1（r=0.999 8，n=6），大黄酚为Y=0.306 31 X-2.466 7（r=0.999 9，n=6）。大黄素的平均回收率为98.53%，RSD为1.49%（n=6）；大黄酚的平均回收率为100.01%，RSD为0.97%（n=6）。结论该方法简便、灵敏，结果准确，回收率高，精密度和重复性均较好，可作为妇炎消胶囊含量的测定方法。

妇炎消胶囊；大黄素；大黄酚；含量测定

妇炎消胶囊为苗族药［1］，主要由大黄、浆草和败酱草等7种中药组方，有除湿止带、行气化瘀、清热解毒的功效［1］，主要用于治疗妇女生殖系统炎症和痛经、带下。现行妇炎消胶囊质量标准［1］含量测定只以大黄素为质量指标对大黄进行质量控制。在临床检验时发现，多数含有药材大黄的制剂［2］均以大黄素和大黄酚作为质量控制标准。本研究中参考文献［2-9］，采用高效液相色谱（HPLC）法测定妇炎消胶囊中大黄素和大黄酚的含量，其操作方法简单，所用色谱系统普通，精密度和重复性均较好，可作为该药品的质量控制方法。

1　仪器与试药

1.1仪器

Agilent 1260型四元低压高效液相色谱仪，包括G1311C 1260 Quat Pump VL四元泵，G1329B 1260 Als自动进样器，G1316A 1260 Tcc恒温箱，G1314F 1260 VWD型紫外检测器，Rev.B.04.03［52］Agilent Chemstation色谱数据处理系统（安捷伦科技有限公司）；CPA 2255D型天平（德国赛多利斯公司）。

1.2试药

大黄素对照品（批号为110756-201512），大黄酚对照品（批号为110796-201520），均购自中国食品药品检定研究院；妇炎消胶囊（贵州益佰女子大药厂有限责任公司，批号分别为20150412，20150507，20150903）；甲醇（Merck KgaA）为色谱纯；磷酸为分析纯；纯化水。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（80∶20）；检测波长：288 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：30℃。理论板数以大黄素峰计不低于5 000。在此色谱条件下的色谱图见图1。

2.2溶液制备

对照品溶液：分别称取大黄素和大黄酚对照品0.012 17，0.030 67 g，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解，分别吸取大黄素和大黄酚对照品溶液各1 mL，定容至50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成含大黄素9.712 μg/mL和大黄酚24.54 μg/mL的对照品溶液。

供试品溶液：取样品10粒，除去囊壳，将内容物混均，研磨，精密称取0.5 g，置锥形瓶中，加入乙醇25.00 mL，加热回流提取1 h，放冷，用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，量取续滤液10.00 mL置烧瓶中蒸干，加30%乙醇-盐酸（10∶1）混合溶液15 mL，再水浴回流提取1 h，冷却，用三氯甲烷60 mL分4次进行萃取提取，将三氯甲烷液蒸干后，用甲醇溶解定容至25 mL容量瓶中，摇匀，滤过，续滤液即为供试品溶液。

阴性对照品溶液：按妇炎消胶囊处方工艺，称取缺大黄的其他6味中药，制成阴性对照品，依法制备缺大黄的阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

阴性干扰试验：按拟订色谱条件，取阴性对照品溶液10 μL，进样测定。结果在大黄素和大黄酚对照品溶液色谱峰相应位置处无相同色谱峰（见图1），表明阴性对照无干扰。

图1　高效液相色谱图

线性关系考察：分别吸取对照品溶液5，10，15，20，25，30 μL，依次进样测定峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、进样量（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程，大黄素为Y=0.363 77 X-0.387 1，r=0.999 8（n=6）；大黄酚为Y=0.306 31X-2.466 7，r=0.999 9（n=6）。结果表明，大黄素进样量在0.048 7～0.292 2 μg、大黄酚进样量在0.122 7～0.736 1 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，按拟订色谱条件进样10 μL，平行进样6次，测定。结果大黄素峰面积的RSD为0.63%（n=6），大黄酚峰面积的RSD为0.41%（n=6）。表明仪器精密度良好。

重复性试验：取批号为20150507的样品，平行制备供试品溶液5份，依法进样测定。结果大黄素含量的RSD为2.03%（n=5），大黄酚含量的RSD为1.26（n=5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取批号为20150507的样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件分别于0，1，3，7，15 h时进样测定。结果的RSD大黄素为1.09%，大黄酚为2.17%（n=5），表明供试品溶液在15 h内稳定。

加样回收试验：取批号为20150507的样品6份，各5 g，作好标示，随机分为3组，每组2份，用移液管分别加入大黄素对照品（0.012 17 g→25 mL）和大黄酚对照品（0.030 67 g→25 mL）的对照品溶液1，2，3 mL，依法进样测定样品含量，并计算回收率。结果见表1。

表1　加样回收试验结果（n=6）

2.4样品含量测定

取批号20150412，20150507，20150903的3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件，进样测定，按外标法分别计算大黄素和大黄酚的含量，并与大黄素标准测定方法测定结果相比较。结果见表2。

表2　妇炎消胶囊中大黄素和大黄酚的含量测定结果（mg/粒）

3　讨论

3.1指标性成分的选择

大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根和根茎［10-11］。游离性蒽醌衍生物大黄素为大黄的主要抗菌成分［12-13］，是中药大黄的主要单体，其化学名称为1，3，8-三羟基-6-甲级蒽醌，是自然界分布较广的蒽醌类物质。大黄酚是大黄的次生代谢产物［14］。妇女生殖系统炎症、痛经、带下多是肝郁不舒、热毒蕴结、气血瘀积导致。妇炎消胶囊治疗妇科病应用的是大黄性味苦寒，泻热毒、破积滞、行瘀血的作用，近代研究逐步证实了大黄的抗菌性［12-13］。故笔者参考文献［2-9］，并结合检验工作的实际，把大黄素和大黄酚作为妇炎消胶囊的质量控制指标。

3.2色谱条件和系统适用性试验的选择

在试验中发现，原质量标准［1］的色谱条件和系统适用性试验比较切合实际，色谱检测的各项指标可达到最佳，故继续使用。

3.3供试品溶液制备方法的选择

妇炎消胶囊原质量标准［1］含量测定项下，制备供试品溶液的方法比较繁琐，在样品溶液的制备过程中容易流失。笔者参考文献［2-9］，采用本研究中供试品溶液的制备方法，同时与原制备方法相比较，样品含量提取明显提高。故将其作为供试品溶液的制备方法。

［1］国家药品监督管理局.国家药品标准（试行）颁布件［Z］. 2002ZD-0265.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：23-24，494-495，709-710，1 472-1 474.

［3］张勇钢.高效液相色谱法测定复方大黄痔疮栓中大黄素大黄酚的含量［J］.时珍国医国药，2008，19（2）：465-466.

［4］张炬，常军民，刘涛.HPLC法测定天山大黄中大黄素和大黄酚的含量［J］.新疆医科大学学报，2003，26（6）：603.

［5］刘芳，陈建伟.HPLC法测定炒决明子中总大黄酚的含量［J］.中成药，2005，27（5）：549.

［6］马涛，熊春媚，郭亚东.高效液相色谱法快速测定大黄中大黄素和大黄酚的含量［J］.昆明师范高等专科学校学报，2005，27（4）：9-11.

［7］赵晓波，丁红强，袁锐利，等.HPLC法测定乙肝清热解毒胶囊中大黄素的含量［J］.中医学报，2010，25（6）：1 136-1 138.

［8］王辉，陈晓艳，白丽杰.醒脑安神片中大黄素和大黄酚的含量［J］.中国药业，2005，14（9）：48-49.

［9］徐红，陈美林，李娟，等.三黄胶囊中大黄素与大黄酚的含量［J］.中国民族民间医药，2010，19（5）：34-39.

［10］熊辉岩，王振辉，杨纯斌.大黄属植物资源及其地上生物资源的开发利用简述［J］.青海科技，2003，5（2）：29-31.

［11］任仁安.中药鉴定学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：44-47.

［12］丁艳，黄志华.大黄素药理作用研究进展［J］.中药药理与临床，2007，23（5）：236-238.

［13］马继雄.大黄药理作用研究进展［J］.青海师范大学学报：自然科学版，2011，27（4）：48-51.

［14］徐仁生.天然产物化学［M］.北京：科学技术出版社，1993：621-623.

Improvement of Content Determination Method for Fuyanxiao Capsules

Yuan Wenjing1，Yuan Wenpeng2
（1.Zhoukou Institute for Food and Drug Control，Zhoukou，Henan，China466000；2.Xiangcheng Hospital of Traditional Chinese Medicine，Xiangcheng，Henan，China466200）

ObjectiveToestablish amethod forthecontent determinationof emodinand chrysophanol inFuyanxiaoCapsulesby HPLC.MethodsAgilent Eclipse XDB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used，the mobile phase was composed of Methods-0.1%H3PO4（80∶20），the flow rate was 1.0 mL/min with detection wavelength at 288 nm.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.048 7-0.292 2 μg for emodin.The calibration curve was linear in the range of 0.122 7-0.736 1 μg for chrysophanol.The regression equation of emodin wasY=0.363 77 X-0.387 1（r=0.999 8，n=6）.The regression equation of chrysophanol wasY=0.30631 X-2.4667（r=0.9999，n=6）.Theaveragerecoveryrateofemodinandchrysophanolwere98.53%and 100.01%，and RSD were 1.49%and 0.97%（n=6）.ConclusionThe method is simple，sensitive，accurate with high recovery rate and repeatability，which can be used for the content determination of Fuyanxiao Capsules.

Fuyanxiao Capsules；emodin；chrysophanol；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）18-0067-03

袁文静（1980-），女，河南项城人，大学本科，主管药师，研究方向为临床药学，（电子信箱）ymz502@126.com。

（2016-04-20；

2016-05-27）