慢性自发性荨麻疹患者血清维生素D与基质金属蛋白酶9的检测

尹嘉文 杨文林

510260广州医科大学附属第二医院皮肤科

慢性自发性荨麻疹患者血清维生素D与基质金属蛋白酶9的检测

尹嘉文 杨文林

510260广州医科大学附属第二医院皮肤科

目的探讨慢性自发性荨麻疹患者血清25羟维生素D［25（OH）D］与基质金属蛋白酶9（MMP⁃9）的水平及意义。方法用高效液相色谱⁃串联质谱法检测56例慢性自发性荨麻疹患者和25例健康对照血清25（OH）D水平，用酶联免疫吸附试验检测血清MMP⁃9水平。采用独立样本t检验或秩和检验分析两组间指标水平的差异，Spearman秩相关分析评估各检测指标之间的相关性及其与病情的关系。结果患者组中轻度19例，中度26例，重度11例。患者组血清25（OH）D水平为（21.74±6.04）μg/L，健康对照组为（30.17±2.21）μg/L；患者组MMP⁃9水平中位数（P25～P75）为291.55（166.18，594.46）μg/L，健康对照组为138.46（94.27，233.12）μg/L，两组间25（OH）D、MMP⁃9水平差异均有统计学意义（P＜0.05）。患者组血清25（OH）D与MMP⁃9水平呈负相关（rs=-0.26，P＜0.05），MMP⁃9水平与症状严重程度呈正相关（rs=0.27，P＜0.05），25（OH）D水平与症状严重程度无明显相关关系（rs=-0.20，P＞0.05）。结论维生素D、MMP⁃9在慢性自发性荨麻疹的发病过程中起一定作用。

荨麻疹；25⁃羟维生素D2；基质金属蛋白酶9；炎症；免疫

慢性荨麻疹（CU）的病因复杂，发病机制仍未完全阐明。慢性自发性荨麻疹（chronic spontaneous urticaria，CSU）是CU分类中不能找出明显原因或诱因的一种亚型，约占CU的80%［1］。有文献［2⁃4］报道，CU患者体内维生素D水平降低。有学者［4］尝试添加维生素D治疗，对部分CU患者有一定疗效。目前关于CU患者维生素D下降的原因尚不清楚，我们同时检测CSU患者血清25羟维生素D［25⁃hydroxyvitamin D，25（OH）D］与基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9，MMP⁃9）水平，试图从炎症反应的角度探讨维生素D在CSU中的作用。

一、对象与方法

1.对象：收集2014年8-12月在广州医科大学附属第二医院皮肤科门诊就诊的CSU患者56例，男20例，女36例；年龄18～60（34.04±10.87）岁；病程2个月至10年［（17.77±28.15）个月］。健康对照组来自本院体检中心的健康人，共25例，男12例，女13例，年龄26～56（37.65±9.45）岁。两组间性别、年龄差异均无统计学意义。本研究通过本院医学伦理委员会批准，入选者签署知情同意书。

入选标准：性别不限，年龄18～60岁，符合CSU诊断［1］；无重大器官疾病；无糖尿病等代谢性疾病；未合并哮喘、变应性鼻炎。排除标准：特殊类型荨麻疹；1个月内服糖皮质激素或免疫抑制剂；1个月内有手术外伤史；3 d内服抗组胺药物；孕妇、哺乳期、绝经期女性；素食者。

2.CSU症状严重程度评估［5］：①风团数目：0分为无风团；1分为风团数＜20个/24 h；2分为风团数20～50个/24 h；3分为风团数＞50个，或有大面积风团；②风团大小（最大直径）：0分为无风团，1分为直径＜0.5 cm，2分为直径0.5～2 cm，3分为＞2 cm；③瘙痒程度：0分为无瘙痒；1分为轻度，有瘙痒，不明显；2分为中度，有明显瘙痒，但不影响日常生活和睡眠；3分为重度，重度瘙痒，不能忍受，严重困扰日常生活和睡眠。所有积分之和为总积分；56例患者按照症状积分将病情分为轻度（＜4分）19例，中度（4～6分）26例，重度（＞7分）11例。

3.标本收集：采集CSU患者静脉血4m l，以4℃、4 000×g离心5min，取血清置-80℃保存待测。

4.CSU患者25（OH）D水平测定：采用高效液相色谱⁃串联质谱（LC⁃MS/MS）法（API3200型液相色谱串联质谱仪，美国AB公司）检测血清25（OH）D，试剂盒为美国Sigma公司产品，将试剂与标本于室温（25℃）下缓慢溶解，配制标准溶液，制备标准曲线。将待测血清放置于室温下溶解，取400μl血清加入400μl甲醇，充分反应，加入正己烷400μl萃取，转入进样瓶，每次进样量为5μl，记录检测结果。

5.CSU患者MMP⁃9水平测定：用酶联免疫吸附试验（ELISA）（MK3型酶标仪Thermo，上海赛默飞世尔公司）检测MMP⁃9水平，试剂盒为美国USCN公司产品，7μl血清用1 400μl PBS作201倍稀释，每孔加入100μl稀释好的血清，37℃温育2 h，甩掉板内液体，每孔加100μl已配好的分析A液，37℃温育1 h，洗板4次，每孔加100μl已配好的分析B液，37℃30min，洗板5次，拍干，加100μl显色剂，37℃显色25min，加50μl终止液，450/630 nm读取吸光度值。

6.统计学分析：用SPSS 21.0软件包进行数据统计，计量资料结果符合正态分布时以±s表示，不符合时以M（P25，P75）表示；符合正态分布时两组间比较采用独立样本t检验，不符合时采用秩和检验；数据相关性采用Spearman秩相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1.CSU患者25（OH）D、MMP⁃9水平：CSU患者血清25（OH）D水平明显低于对照组，MMP⁃9水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.相关性分析：经Spearman秩相关检验，CSU患者25（OH）D水平与MMP⁃9水平呈负相关（rs=-0.26，P＜0.05），与症状严重程度无明显相关（rs=-0.20，P＞0.05）；MMP⁃9水平与症状严重程度呈正相关（rs=0.27，P＜0.05）。

三、讨论

维生素D的生物活性形式是25（OH）D和1，25（OH）2D［6］。由于25（OH）D是维生素D在体内的主要代谢物，在血循环中含量相对较高，且半衰期较长，一般为3周，因此临床上可以通过测定25（OH）D的含量来反映维生素D在体内的水平［6］。

本研究结果显示，CSU患者血清25（OH）D水平明显下降，与国外报道［2⁃4］相符；而且，CSU患者MMP⁃9水平明显升高，25（OH）D与MMP⁃9水平呈负相关。我们还发现，CSU患者MMP⁃9水平与症状严重程度呈正相关。我们的前期研究［7］发现，CU患者存在低水平炎症和凝血功能改变，抗凝治疗对部分患者有改善症状的效果［8］。本研究初步证实，CSU患者维生素D与MMP⁃9存在相关，提示CU患者使用维生素D治疗获益可能与维生素D影响凝血功能和炎症反应有关，但需进一步研究。

维生素D在CSU等变态反应性疾病中的作用近几年才逐渐被人们认识，其作用机制目前仍不明确。Devereux等［9］发现，妇女妊娠期间添加维生素D可降低儿童患哮喘的发病率，维生素D缺乏可以诱发哮喘发作；研究提示，哮喘患者低水平维生素D含量与气道高反应性、糖皮质激素低反应有关。CSU患者维生素D水平下降可能是一种诱因，其水平改变是否也通过影响机体免疫炎症反应而导致发病，目前尚缺乏大样本的队列研究证实。

表1 慢性自发性荨麻疹患者血清25羟维生素D［25（OH）D］与基质金属蛋白酶9（MMP⁃9）水平μg/L

［1］中华医学会皮肤性病学分会免疫学组.中国荨麻疹诊疗指南（2014版）［J］.中华皮肤科杂志,2014,47（7）:514⁃516.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412⁃4030.2014.07.019.Immunology Group of Chinese Society of Dermatology.Guidelines for the diagnosis and treatment of urticaria in China（2014）［J］.Chin JDermatol,2014,47（7）:514⁃516.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412⁃4030.2014.07.019.

［2］Grzanka A,Machura E,Mazur B,et al.Relationship between vitamin D status and the inflammatory state in patients with chronic spontaneousurticaria［J］.JInflamm（Lond）,2014,11（1）:2.DOI:10.1186/1476⁃9255⁃11⁃2.

［3］Woo YR,Jung KE,Koo DW,et al.Vitamin D as a marker for disease severity in chronic urticaria and its possible role in pathogenesis［J］.Ann Dermatol,2015,27（4）:423⁃430.DOI:10.5021/ad.2015.27.4.423.

［4］Rorie A,Goldner WS,Lyden E,et al.Beneficial role for supplemental vitamin D3 treatment in chronic urticaria:a rando⁃mized study［J］.Ann Allergy Asthma Immunol,2014,112（4）:376⁃382.DOI:10.1016/j.anai.2014.01.010.

［5］Zuberbier T,Aberer W,Asero R,et al.Methods report on the development of the 2013 revision and update of the EAACI/GA2 LEN/EDF/WAO guideline for the definition,classification,diagnosis,and managementof urticaria［J］.Allergy,2014,69（7）:e1⁃29.DOI:10.1111/all.12370.

［6］Benson AA,Toh JA,Vernon N,etal.The role of vitamin D in the immunopathogenesisofallergic skin diseases［J］.Allergy,2012,67（3）:296⁃301.DOI:10.1111/j.1398⁃9995.2011.02755.x.

［7］黄桃源,杨文林,尹嘉文,等.急性时相反应标志物及凝血、纤溶标志物与慢性荨麻疹的相关性研究［J］.中华皮肤科杂志,2014,47（7）:473⁃476.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412⁃4030.2014.07.006.Huang TY,Yang WL,Yin JW,et al.Biomarkers for acute⁃phase response and coagulation/fibrinolysis in patients with chronic urticaria:a correlation study［J］.Chin JDermatol,2014,47（7）:473⁃476.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412⁃4030.2014.07.006.

［8］刘小明,盛晚香,宋继权,等.慢性荨麻疹患者血浆凝血酶原片段F1+2水平的研究［J］.中国麻风皮肤病杂志,2008,24（2）:105⁃107.DOI:10.3969/j.issn.1009⁃1157.2008.02.007.Liu XM,Sheng WX,Song JQ,et al.The levels of plasma prothrombin fragment 1+2 in chronic urticariapatients［J］.Chin J Lepr Skin Dis,2008,24（2）:105⁃107.DOI:10.3969/j.issn.1009⁃1157.2008.02.007.

［9］Devereux G,Litonjua AA,Turner SW,et al.Maternal vitamin D intake during pregnancy and early childhood wheezing［J］.Am J ClinNutr,2007,85（3）:853⁃859.

Detection of serum levels of vitam in D and matrix metalloproteinase 9 in patientsw ith chronic spontaneous urticaria

Yin Jiawen,YangWenlin

DepartmentofDermatology,The Second Affiliated HospitalofGuangzhou MedicalUniversity,Guangzhou 510260,China

YangWenlin,Email:yangwenlin@21cn.com

Objective To detect serum levels of 25⁃hydroxyvitamin D（25［OH］D）and matrix metalloproteinase 9（MMP⁃9）in patientswith chronic spontaneous urticaria（CSU）,and to explore their significance.M ethods Totally,56 patients with CSU and 25 healthy controls were enrolled into this study.High⁃performance liquid chromatography tandem⁃mass spectrometry（LC⁃MS/MS）and enzyme⁃linked immunosorbent assay（ELISA）were performed tomeasure serum levels of 25（OH）D and MMP⁃9 respectively in these subjects.Statistical analysis was carried out by two independent samplest⁃test orWilcoxon rank sum test for comparisons of the above indexes between the two groups,and by Spearman rank correlation analysis for assessmentof relationships between the serum levels of 25（OH）D and MMP⁃9 aswellas between the two indexes and disease severity.Results Of the 56 patients,19 were diagnosed withmild CSU,26 withmoderate CSU and 11 with severe CSU.Compared with the control group,the patientgroup showed significantly lower serum levelsof 25（OH）D（21.74±6.04vs.30.17±2.21μg/L,P＜0.05）,but significantly higher serum levels of MMP⁃9（Median［P25-P75］:291.55［166.18-594.46］vs.138.46［94.27-233.12］μg/L,P＜0.05）.In the patientgroup,the serum levelof25（OH）Dwasnegatively correlated with thatofMMP⁃9（rs=－0.26,P＜0.05）,butuncorrelated with the severity of CSU（rs=－0.20,P＞0.05）;the serum levelofMMP⁃9 was positively correlated with the severity ofCSU（rs=0.27,P＜0.05）.Conclusion Vitamin D and MMP⁃9may play a role in theoccurrenceofCSU.

Urticaria;25⁃Hydroxyvitamin D 2;Matrixmetalloproteinase 9;Inflammation;Immunity

杨文林，Email：yangwenlin@21cn.com

10.3760/cma.j.issn.0412⁃4030.2016.11.014

2016⁃02⁃22）

（本文编辑：吴晓初）