蒿甲醚体外抗毛囊蠕形螨活性分析

王国江 高晓燕 李婷 张海清 陈向明 胡阳

201318上海市浦东新区周浦医院皮肤科（王国江、高晓燕）；上海市嘉定区南翔医院皮肤科（李婷、张海清、陈向明、胡阳）

蒿甲醚体外抗毛囊蠕形螨活性分析

王国江 高晓燕 李婷 张海清 陈向明 胡阳

201318上海市浦东新区周浦医院皮肤科（王国江、高晓燕）；上海市嘉定区南翔医院皮肤科（李婷、张海清、陈向明、胡阳）

目的观察蒿甲醚体外抗毛囊蠕形螨效果，为蒿甲醚治疗毛囊蠕形螨感染性皮肤病提供依据。方法采用花生油将蒿甲醚分别稀释成浓度为20、10、5和2.5 g/L，分别处理实验组蠕形螨；对照组蠕形螨单纯用花生油处理。各组均随机选取32只活体毛囊蠕型螨进行体外抗螨实验，pH仪分别测定各组蒿甲醚pH值。结果20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚组及对照组体外杀螨时间中位数（P25～P75）分别为3.00（2.00～3.88）、6.00（4.13～7.25）、13.00（11.63～14.50）、17.00（15.25～20.75）和34.00（23.50～39.50）h，差异有统计学意义（H=133.954，P＜0.001）；各蒿甲醚组虫体死亡时间均短于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.001），且随蒿甲醚浓度增高杀螨时间逐步缩短，但10 g/L蒿甲醚组和20 g/L蒿甲醚组间虫体死亡时间差异无统计学意义（P＞0.05）。各蒿甲醚组与对照组药液pH均在7.0～7.1之间，接近中性。结论20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚对体外活体蠕形螨均有杀灭作用，蒿甲醚可能成为治疗毛囊蠕型螨感染的备选药物之一。

螨感染；螨；杀螨剂；寄生虫敏感性试验；蒿甲醚

蒿甲醚是青蒿素的衍生物之一，同类药物还有蒿乙醚和青蒿琥酯等，主要用于各类疟疾的治疗。近年研究发现，青蒿素及其衍生物还具有广谱抗寄生虫作用，对血吸虫、肺孢子虫、弓形虫、阴道毛滴虫、利什曼原虫、鞭毛虫等均有杀灭作用［1］。本课题组既往研究显示，口服青蒿琥酯治疗酒渣鼻的疗效与盐酸多西环素肠溶胶囊相似［2］。然而蒿甲醚是否对毛囊蠕形螨有杀灭作用还值得进一步探索。传统毛囊蠕形螨感染的治疗药物主要是硝基咪唑类药物，但该类药物只对部分毛囊蠕型螨皮炎有效，对部分患者疗效较差。本研究采用不同浓度蒿甲醚进行体外抗螨实验，观察其有无抗毛囊蠕型螨的药理作用，并寻找该药的有效抗螨浓度。

一、材料与方法

1.试剂：蒿甲醚注射液（昆明制药集团股份有限公司，批号20140820），每支1ml，含蒿甲醚80mg，溶剂为花生油（上海远香贸易有限公司生产，批号201401205）。

2.蠕形螨来源：2014年1-12月期间，选择本院皮肤科门诊2个月内未经任何药物治疗的酒渣鼻且实验室检查有蠕形螨感染者32例，常规消毒皮肤，采用挤压刮拭法，用一次性刮匙刮取毛囊螨感染者面部皮脂置于洁净载玻片上，每例患者随机选取活体螨虫5条，分别分配到5组中，每组1条。32例患者共获取活毛囊蠕形螨160只，每组32只活螨。室温22～25℃，将载玻片放入湿盒，在1 h内开始实验。

3.药物与分组：根据小鼠预实验结果，＞20 g/L蒿甲醚可能会增大引起小鼠刺激性皮炎的概率，故确定20 g/L蒿甲醚为浓度上限。用花生油将蒿甲醚分别稀释成浓度为20、10、5和2.5 g/L，分别处理实验组蠕形螨。对照组蠕形螨单纯用花生油处理。

4.药液pH值测定：各实验组与对照组随机抽取8份药液，测定pH值。

5.体外抗螨实验［3］：在22～25℃室温下进行。先将刮取的皮脂标本均匀涂布，再用盖玻片的一角挑取少许皮脂，均匀涂布在各组载玻片上，逐张按以下步骤观察：光镜下鉴定活动良好的毛囊蠕形螨1条，细针蘸取出活螨，放到另外一张洁净载玻片上，滴加药液或对照花生油，加盖玻片，即刻分别观察上述各组每条螨虫存活时间，每0.5 h观察1次，以螨虫肢体在1min内不运动判断为死亡。

6.统计学分析：用SPSS19.0统计软件，多组间蠕形螨死亡时间比较采用Kruskal⁃WallisH检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1.药液pH值：20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚组和对照组pH值分别为7.05±0.27、7.01±0.03、7.02±0.02、7.1±0.03、7.08±0.03，各组pH值差别微小，基本为中性，对实验结果的影响可以忽略不计。

2.体外抗螨实验：各实验组与对照组的虫体死亡时间见表1。经Kruskal⁃WallisH检验，各组间虫体死亡时间差异有统计学意义（H=133.954，P＜0.001）。各实验组虫体死亡时间均短于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.001），随蒿甲醚浓度增高杀螨时间逐步缩短，但10 g/L蒿甲醚组和20 g/L蒿甲醚组间虫体死亡时间差异无统计学意义（P＞0.05）。

3.光镜下观察虫体：活体蠕形螨多呈黑色，弯曲，肢体运动（图1）。蠕型螨在死亡前运动幅度逐渐减小，颜色变淡灰色，虫体变直、皱缩（图2）。

三、讨论

近年研究显示，酒渣鼻患者皮肤单位面积毛囊蠕型螨数量明显增多［4］。反射式共聚焦显微镜显示，抗螨治疗后面部皮疹好转，毛囊蠕型螨数量同时也明显减少［5］。O′Reilly等［6］发现，毛囊蠕型螨相关性菌体蛋白与红斑性毛细血管扩张型酒渣鼻存在正相关。青蒿类药物有抗多种寄生虫、抗炎及抗肿瘤等药理作用。本研究显示，在室温下，5 g/L以上浓度蒿甲醚体外具有杀灭毛囊蠕形螨的作用，5～20 g/L蒿甲醚杀灭毛囊蠕形螨时间为3.09～12.84 h，是一种温和的杀虫药物。有文献［7］报道，青蒿素类药物可以通过抑制基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9和血管内皮细胞生长因子发挥抗血管生成作用，这可能是外用青蒿素类药物治疗酒渣鼻炎性红斑的机制之一。

因蒿甲醚注射液是以花生油做药物溶剂，所以本实验药物稀释液及对照组均采用花生油。研究发现，室温下单纯用花生油处理的蠕形螨平均存活时间约为35 h，而石蜡油处理的蠕形螨平均存活时间约为27 h［8］，前者虫体存活时间长可能与花生油提供了虫体所需部分能量有关。

表1 不同浓度蒿甲醚体外抗蠕形螨实验各组蠕形螨死亡时间比较（h）

图1 活体蠕型螨呈黑色、弯曲（×100）图2 20 g/L蒿甲醚作用3 h，蠕型螨死亡，呈灰色，虫体伸直、萎缩（×100）

总之，蒿甲醚有明显抗毛囊蠕形螨活性，为其治疗毛囊蠕形螨感染性皮肤病提供重要用药依据，但其杀虫机制还需进一步研究。

［1］李洪军,汪伟,梁幼生.双氢青蒿素抗寄生虫作用研究进展［J］.中国血吸虫病防治杂志,2011,23（4）:460⁃464.DOI:10.3969/j.issn.1005⁃6661.2011.04.032.Li HJ,Wang W,Liang YS.Advances in research of dihydroar⁃temisinin against parasitic diseases［J］.Chin J Schisto Control,2011,23（4）:460⁃464.DOI:10.3969/j.issn.1005⁃6661.2011.04.032.

［2］李婷,胡阳,俞爱华,等.口服青蒿琥酯治疗酒渣鼻31例临床观察［J］.中国皮肤性病学杂志,2015,29（3）:330⁃332.DOI:10.13735/j.cjdv.1001⁃7089.201402021.Li T,Hu Y,Yu AH,et al.Clinical research of the efficacy of artesunate in 31 patients with rosacea［J］.Chin JDerm Venereol,2015,29（3）:330⁃332.DOI:10.13735/j.cjdv.1001⁃7089.201402021.

［3］田晔,李朝品,邓云.蒲公英提取物体外抗毛囊蠕形螨活性及皮肤安全性的实验研究［J］.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2007,25（2）:133⁃136.DOI:10.3969/j.issn.1000⁃7423.2007.02.012.Tian Y,Li CP,Deng Y.Anti⁃mite activity and skin safety of herba taraxaci extract for demodex folliculorum［J］.Chin J Parasitol ParasitDis,2007,25（2）:133⁃136.DOI:10.3969/j.issn.1000⁃7423.2007.02.012.

［4］Bahadoran P.Reflectance confocal microscopy:a new key for assessing the role ofDemodex in rosacea?［J］.Br JDermatol,2015,173（1）:8⁃9.DOI:10.1111/bjd.13903.

［5］Sattler EC,Hoffmann VS,Ruzicka T,et al.Reflectance confocal microscopy formonitoring the density ofDemodexmites in patients with rosacea before and after treatment［J］.Br JDermatol,2015,173（1）:69⁃75.DOI:10.1111/bjd.13783.

［6］O′Reilly N,Menezes N,Kavanagh K.Positive correlation between serum immunoreactivity toDemodex⁃associated Bacillus proteins and erythematotelangiectatic rosacea［J］.Br JDermatol,2012,167（5）:1032⁃1036.DOI:10.1111/j.1365⁃2133.2012.11114.x.

［7］Ho WE,Peh HY,Chan TK,et al.Artemisinins:pharmacological actions beyond anti⁃malarial［J］.Pharmacol Ther,2014,142（1）:126⁃139.DOI:10.1016/j.pharmthera.2013.12.001.

［8］赵亚娥,郭娜.三种环境条件对毛囊蠕形螨杀灭作用的实验研究［J］.中国媒介生物学及控制杂志,2005,16（5）:372⁃373.DOI:10.3969/j.issn.1003⁃4692.2005.05.014.Zhao YE,Guo N.The experiment of killing demodex folliculorum in three environmental conditions［J］.Chin JVector Bio&Control,2005,16（5）:372⁃373.DOI:10.3969/j.issn.1003⁃4692.2005.05.014.

In vitro activity of artemether against Demodex folliculorum

Wang Guojiang,Gao Xiaoyan,Li Ting,Zhang Haiqing,Chen Xiangming,Hu Yang

Department ofDermatology,Zhoupu Hospital of Pudong New Distrct,Shanghai 201318,China（Wang GJ,Gao XY）;Department ofDermatology,Nanxiang Hospital of Jiading District,Shanghai 201802,China（Li T,Zhang HQ,Chen XM,Hu Y）

Chen Xiangming,Email:LC_1212@sina.com

Objective To assess thein vitroantimite activity ofartemether againstDemodex folliculorum,and to provide evidence for the use of artemether in the treatment of skin diseases caused byDemodex folliculoruminfection.M ethods Artemetherwas diluted to different concentrations（20,10,5 and 2.5 g/L）with peanut oil.The pH values ofworking solutions of artemether and peanut oilweremeasured.Demodex folliculorummiteswere divided into several groups（32mites in each group）to be treated with artemether（20,10,5 and 2.5 g/L,artemether groups）or peanutoil（control group）.Results There were significant differences in the time required for killing ofDemodex folliculorumamong the 20⁃,10⁃,5⁃and 2.5⁃g/L artemether groupsand controlgroup（Median［P25-P75］:3.00［2.00-3.88］vs.6.00［4.13-7.25］vs.13.00［11.63-14.50］vs.17.00［15.25-20.75］vs.34.00［23.50-39.50］hours,H=133.954,P＜0.001）.Additionally,the time required for killing ofDemodex folliculorumwas significantly shorter in these artemether groups than in the control group（allP＜0.001）,and was gradually shortened with the increase of artemether concentrations,butwas similar between the 10⁃and 20⁃g/L artemether groups（P＞0.05）.Moreover,the pH values ofworking solutions of artemether and peanut oil ranged between 7.0 and 7.1,and were close to neutral.Conclusion Artemether at20,10,5 and 2.5 g/L can killDemodex folliculorum in vitro,so artemethermay serve asan alternative drug for the treatmentofDemodex folliculoruminfection.

Mite infestations;Mites;Acaricides;Parasitic sensitivity tests;Artemether

陈向明，Email：LC_1212@sina.com

10.3760/cma.j.issn.0412⁃4030.2016.11.012

上海市浦东新区科委项目（PKJ2016⁃Y09）

Fund program:Pudong New DistrictScience and Technology Committee Project in Shanghai（PKJ2016⁃Y09）

2016⁃02⁃15）

（本文编辑：周良佳颜艳）