麻疹IgM抗体行定量酶联免疫吸附试验检测应用效果分析

周湘晖

湖南省湘潭市疾病预防控制中心(湘潭，411100)



麻疹IgM抗体行定量酶联免疫吸附试验检测应用效果分析

周湘晖

湖南省湘潭市疾病预防控制中心(湘潭，411100)

目的探讨对麻疹患者采用定量酶联免疫吸附试验测定IgM抗体的临床价值。方法回顾性分析在我院接种麻疹疫苗的100例儿童的临床资料， 分别采用定量酶联免疫吸附试验和中和抗体试验测定血清IgM抗体水平， 比较两者的符合率； 同时统计ELISA与NT诊断的耗时、 费用和阳性率。结果浓度≥200 IU/L样品ELISA检测与NT的符合率明显高于<200 IU/L样品， 其差异有统计学意义(P<0.05)。两种检查手段阳性率无明显差异(P>0.05)， 但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法其差异有统计学意义(P<0.05)。结论定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹IgM抗体时具有很高的准确性， 且耗时和费用均较低， 值得临床推广。

麻疹； 酶联免疫吸附试验； IgM抗体

0　引言

麻疹(measles)是常见的传染病， 目前随着检测手段的不断发展， 麻疹已可做到早期诊断， 进而早期治疗。中和抗体试验(Neutralization Test,NT)曾经是麻疹诊断中的金标准， 但存在耗时长， 费用高等缺点[1]。因此如何寻找一种快速， 准确的诊断方法成为临床研究的热点之一。定量酶联免疫吸附试验是针对蛋白表达做的一种定量或半定量检测， 操作简便， 灵敏度高， 但特异性不得而知。为此， 本研究对100例接种麻疹疫苗儿童接种前、 后分别采用不同方法检测IgM抗体含量， 现报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2012年1月至2016年1月在我院行麻疹疫苗接种的100例儿童作为观察组， 其中男54例， 女46例， 年龄9～11个月， 平均(9.6±0.8)个月。均接种过麻疹疫苗， 8个月时接种， 9月龄婴儿为按时接种麻疹疫苗后一个月的婴儿。两组病例的一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2IgM抗体检测

1.2.1定量酶联免疫吸附试验

先抽取血浆， 离心后得到血清成分， 按1：100稀释后， 行ELISA检测， 单孔定量， 单位IU/L。试剂盒由德国Virion/Serion公司提供,严格按照说明书操作。判断标准：阳性：≥200 IU/L， 阴性：<200 IU/L。

1.2.1中和抗体法

与上述方法相同抽取血浆并离心后得血清成分， 56 ℃ 灭活30 min， 按1：1 024稀释。取96孔细胞板， 没空滴25 μL稀释液， 与25 μL麻疹病毒液混合， 37 ℃中和1 h， 然后加入100μL Vero-slam细胞， 于37 ℃ 5%CO2培养， 第7 d到第10 d每天观察细胞培养情况。阳性：抗体滴度≥1：2。

1.3统计学方法

所有资料均采用SPSS17.0统计学软件处理， 其中计量资料采用t检验， 计数资料采用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结 果

(1) ELISA与中和抗体法的符合率， 见表1。浓度≥200 IU/L样品ILISA检测与NT的符合率明显高于<200 IU/L样品， 其差异有统计学意义(P<0.05)。

表1　ELISA与中和抗体法的符合率

(2) ELISA与NT诊断的耗时、 费用和阳性率比较， 见表2。两种检查手段阳性率无明显差异(P>0.05)， 但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法其差异有统计学意义(P<0.05)。

表2　ELISA与NT诊断的耗时、 费用和阳性率比较

(3) ELISA检测OD值比较。接种前IgM OD值为134.2±12.1， 接种后为262.3±15.6， 组内差异有统计学意义， 接种后高于接种前。

3　讨论

麻疹是由麻疹病毒引起一种常见的急性传染病， 以婴幼儿为主， 临床症状通常表现为发热、 呼吸道卡他症状和全身斑丘疹等。麻疹传染性强， 致死率较高。自1960年代首次使用麻疹疫苗后， 麻疹感染率得到明显控制。近年来， 随着麻疹疫苗的使用愈发普及， 也使麻疹的发病率、 死亡率较前更低[2， 3]。随着诊断技术的不断发展， 目前诊断麻疹的实验室方法很多， 包括NT、 血凝抑制(HAI)试验、 ELISA、 被动凝集试验(PHA)、 间接免疫荧光试验(IFA)等[4]。其中， NT试验是诊断的“金标准”， 但其存在技术要求高、 耗时、 昂贵等缺点， 因此应用受到一定程度的限制。如何寻找一种简便， 快捷又准确的诊断方法称为临床检验诊断的发展方向之一。而ELISA符合这一理念， 为此， 我们设计了本研究， 旨在探讨ELISA在麻疹抗体诊断中的价值。

从本研究我们看出， 与中和抗体试验的金标准相比， 定量ELISA与之符合度较高， 尤其在滴度高于200 IU/L的样品中， 可达到100%， 而对于滴度低于200 IU/L的样品， 其误差相对较高， 这与Cohen等[1]的研究一致。同时随着滴度增加， 其阳性符合率也随之升高。有报道认为NT抗体滴度在1：8～1：16之间时才对机体具有保护意义[5]， 而本研究中我们发现NT的临界滴度也位于1：8～1：16之间， 与上述研究一致。同时我们对两种方法诊断的耗时、 费用和阳性率进行了比较，结果发现， 两种检查手段阳性率无明显差异， 但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法， 在一定程度上简化了操作， 降低了儿童的医疗负担。这与陈辉等[6]的研究是一致的。

总之， 采用定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹IgM抗体时具有很高的准确性， 且耗时和费用均较低， 值得临床推广。但是由于本次研究时间短， 纳入病例数较少， 因此更具体的统计分析还需进一步研究。

[1] Cohen BJ,Parry RP,Doblas D,et al.Measles imumunity testing:Comparison of two Measles IgG ELISA with plaque reduction neutralisation assay[J] J Virol Methods,2006,131(2):209-212.

[2] 陆璐,朱宏幼,陈云华,等.麻疹疫苗对麻疹发病率的影响[J].中国公共卫生管理,2006,22(1):45-47.

[3] 殷大鹏.麻疹疫苗[J].中国疫苗和免疫,2008,14(5):470-473.

[4] 刘岩,王锋,刘兰芬,等.麻疹抗体的检测方法[J].现代预防医学,2008， 35(13)：2493-2494.

[5] Arguelles MH,Orellane ML,Castello AA,et al.Measles virus-specific antibody levels in individuals in Argentina where ceivedaone-dosevaccine[J]. Clin Microbiol,2006,44(8):2733-2738.

[6] 欧阳霖，尤佳恺，陈国强，等.疑似麻疹病例不同采血时间的IgM抗体检测分析[J].中国实用医药，2011,6(30)：81-82.

Analysis of Application Effect for Quantitative Detection of Measles IgM Antibody ELISA

ZHOU Xianghui

Xiangtan City of Hunan Province Center for Disease Control and Prevention,(Xiangtan， 411100)

ObjectiveTo investigate the clinical value of detecting IgM antibodies by quantitative enzyme-linked immunosorbent assay for measles patients.MethodsA retrospective analysis on the clinical data of 100 cases of children accepted measles vaccination in our hospital was carried out, using quantitative enzyme linked immunosorbent assay and neutralization antibody test to determine the serum IgM antibody levels, respectively. Then, their accordant rate was compared and the statics of time-consuming, cost and the positive rate of ELISA and NT diagnosis was evaluated.ResultsThe coincidence rate between ELISA detection and NT detection is significantly higher when sample concentration ≥200 IU/L than that of <200 IU/L (P<0.05). No significant difference has been found in positive rate between the two examination methods (P>0.05), but the time-consuming and cost of ELISA method is significantly less than those of NT method (P<0.05).ConclusionQuantitative ELISA has high accuracy in the detection of measles IgM antibody with low time and costs, which is worthy of clinical promotion.

measles, ELISA, IgM antibody

10.3969/j.issn.1674-1242.2016.02.003

周湘辉，E-mail:zhouxiang68@163.com

R446.6

A

1674-1242(2016)02-0070-03

2016-03-08)