丹苓颗粒水提工艺的研究

王纤汝， 王晓梅， 李　茜

(新疆医科大学1附属中医医院药学部, 乌鲁木齐　830000； 2附属肿瘤医院药剂科, 乌鲁木齐　830011)



丹苓颗粒水提工艺的研究

王纤汝1， 王晓梅2， 李茜1

(新疆医科大学1附属中医医院药学部, 乌鲁木齐830000；2附属肿瘤医院药剂科, 乌鲁木齐830011)

目的优选丹苓颗粒的最佳水提工艺。方法采用单因素结合L9(34)正交实验设计对水提倍量、提取次数、提取时间等因素进行考察，以丹参丹酚酸B的含量和水浸膏得率指标为综合评价指标，筛选出最佳水提工艺条件。结果9倍量水、回流提取2次、每次提取1 h的丹苓颗粒水提工艺最佳。结论该工艺简便、快捷、稳定，可为生产提供理论依据。

丹苓颗粒； 水提工艺； 正交试验

丹苓颗粒来源于新疆维吾尔自治区中医医院临床多年使用的临床经验方，该方由丹参、茯苓、赤芍，白术等药材组成，具有活血化瘀的功效，在临床上主要用于治疗瘀血内停所致的胸痹，症见心前区刺痛、气短、胸闷[1]。根据方中药材所含有效成分的理化性质，拟定丹参、茯苓等药材采用水提取，方中具有活血祛瘀等功效丹酚酸B是丹参中的指标活性成分[2-3]，以丹酚酸B含量和水浸膏得率为综合评价指标[4-5]。本研究采用单因素和正交试验确定丹苓颗粒提取工艺参数，为进一步提高丹苓颗粒的临床研究提供依据，现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器美国2996高效液相色谱仪(Waters公司)，Direct-QTM5超纯水仪(Millipore 公司)，AG-135电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2试药丹参(亳州市亳广中药饮片有限公司，批号：20150804)、茯苓(亳州市亳广中药饮片有限公司，批号：20150817)等药材均符合《中华人民共和国药典》2010年版一部各药材项下的规定，并经新疆医科大学第四附属医院药学部李永和主任药师鉴定；丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111562-200302)，乙腈、甲醇(色谱纯，美国fisher公司)，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品0.56 mg，加甲醇制成0.56 mg/mL的丹酚酸B对照品溶液[6]。

2.2样品溶液的制备称取上述处方药材56 g，分别以12倍用量的水，提取2次，提取1.0 h。滤过后取上述溶液2.5 mL于10 mL容量瓶中用甲醇定容至10 mL，倒入10 mL离心管，5 000 r/min离心15 min，即得。

2.3阴性对照品实验按样品的测定方法制备缺丹参阴性对照溶液，进样量10 μL并测定。实验表明，丹苓颗粒水提液中其余药材对丹酚酸B的含量测定无干扰。精密吸取丹酚酸B对照品溶液与含有丹参供试品溶液及缺丹参的阴性样品溶液各10 μL进行测定,结果表明在此色谱条件下供试品溶液分离效果良好,见图1～3。

图1　丹酚酸B对照品溶液

图2　供试品溶液

图3　阴性溶液

2.4色谱条件色谱柱：symmetry shield RpC18柱(3.9 mm×150 mm，5 μm),流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59),检测波长286 nm,流速1 mL/min,柱温30℃，进样量10 μL。

2.5线性关系考察分别精密吸取(0.56 mg/mL)3、6、9、12、15 μL对照品溶液，注入液相色谱仪，得到相应的峰面积。以纵坐标为进样浓度，横坐标为峰面积进行线性回归，回归方程：C=6.465×10-7A+0.081 3，r=0.999 8，在1.68～8.40 μg/mL范围内，丹酚酸B进样浓度与峰面积线性关系良好，见表1。

表1　线性关系实验结果

2.6精密度试验日内精密度试验用标准溶液在同一天连续进样7次，每次进样量10 μL，结果日内精密度RSD=0.53%;日间精密度试验用标准溶液间隔进样7 d，每天1次，每次进样量10 μL，结果日间精密度RSD=1.59%。

2.7加样回收率试验精密称定已知含量的丹苓颗粒3份，每份3 mL，精密加入丹酚酸B对照品适量，按 “ 2.4”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，加样回收率分别为100.5%、99.9%、100.2%，平均加样回收率为100.2%,RSD=1.59%。

2.8单因素试验根据处方药味的功能主治的化学成分的理化特性拟采用水提提取，并对提取次数、水提用量、提取时间进行研究，再采用L9(34)对提取次数、水提用量、提取时间进行正交实验研究，以丹酚酸B含量和水浸膏得率为综合评价指标(权重系数为70%、30%)，从而筛选出最佳提取工艺[7-9]。综合评分分值=(70%/最大丹酚酸B含量)×丹酚酸B含量+(30%/最大水浸膏得率)×水浸膏得率。精密吸取丹苓颗粒供试液20 mL置于干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥3 h，至干燥器中，冷却30 min，快速精密称取重量，获得残渣重为X，得出浸膏得率，公式：

2.8.1料液比的考察加15倍量水提取率最高， 12倍量其次，18倍量第3，但考虑节省成本18倍用量太大，选择9倍量、12倍量和15倍量3个水平进行正交试验考察，见表2。

2.8.2提取时间的考察水提2.0 h提取率最高， 1.0 h其次， 1.5 h第3，选择1.0、1.5、2.0 h 3个水平进行正交试验考察，见表3。

2.8.3提取次数的考察提取4次提取率最高，3次其次，2次第3，为了节省工时，节约成本，选择提取1、2、3次3个水平进一步进行正交考察，见表4。

表2　加水倍量对提取效果的影响

表3　提取时间对提取效果的影响

表4　提取次数对提取效果的影响

2.8.4正交试验影响提取效果的因素是：A(提取时间)> B(料液比)>C(提取次数)，以提取时间最大，其次料液比、提取次数影响较小。经方差分析可知：提取时间对提取效果有较大影响，考虑到生产成本，选定最佳提取工艺为A2B1C1。因此，由实验结果，确定丹苓颗粒水提取工艺条件为9倍量水、回流提取2次、每次1.0 h，见表5～7。

表5　L9(34)正交试验因素水平表

表6　L9(34)正交试验表

表7　方差分析表

2.9验证试验按上述工艺条件进行3次验证试验，按A2B1C1提取得到的丹酚酸B含量和水浸膏得率非常接近,正交试验设计中的最大含量且更符合工艺实际,说明此工艺条件稳定、可行,见表8。

表8　验证试验结果(n=3)

3　讨论

处方中丹参的水溶性成分丹酚酸B等具有降低血脂的作用，但加温条件下丹参提取物中酚酸类成分的稳定性有一定影响[10]。丹参提取生产中,为减少酚酸类成分损失应尽量减少加热时间，故选择加热时间为1 h，同时降低提取次数为2次。单因素实验法考察的因素水平多，但无法比较各因素之间影响作用，正交试验法具有显著性差异的比较，将两者结合弥补这一缺陷，综合了两者优点确定为加9倍量水，回流提取2次，每次1.0 h为丹苓颗粒最佳水提工艺。通过工艺验证实验说明此工艺稳定、合理、可行。

[1]徐丽君，黄光英.丹参的化学成分及其药理作用研究概述[J].中西医结合研究，2009,11(1):45-49.

[2]王蓉,原永芳.丹酚酸B药理作用的研究概况[J].中医药导报. 2011,10(4):12-13.

[3]蔡丽萍,习志刚,杨红.丹参酮的药理作用和临床研究进展[J].广东药学院学报,2008,24(3):321-325.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(第一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：204-208.

[5]武尉杰,盛蓉,谭睿,等.正交试验法优选丹参药材中丹参酮ⅡA提取工艺的研究[J].川北医学院学报,2013,28(1):10-12.

[6]易艳东,谢岱,马威.正交试验法优归芪补肾颗粒的水提工艺[J].湖北中医药大学学报,2014,16(2):47-49.

[7]赵珉,郭靖,张红岩,等.正交试验法优选舒欣胶囊中丹参酮ⅡA提取工艺[J].长春中医药大学学报,2011,27(3):355-356.

[8]谢燕,李建利,施明毅,等.正交试验法优选软脉通瘀颗粒的水提工艺[J].中国医药指南,2013,11(12):466-483.

[9]唐康琛,梁学政,陈惠红,等.正交试验法优选五子补肾胶囊水提醇沉工艺[J].中国医院药学杂志,2013,33(23):2002-2004.

[10]张春光,崔翰明,张秋燕,等.丹参提取物中的丹酚酸B在不同pH条件下的稳定性研究[J]. 中国实验方剂学杂志. 2009，12(1) :55-57.

(本文编辑施洋)

Optimization of water extraction process of DanLin GranuLes

WANG Qianru1, WANG Xiaomei2, LI Qian1

(1DepartmentofPharmacy,theAffiliatedTraditionalChineseHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830000,China;2DepartmentofPharmacy,AffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

ObjectiveTo optimize the water extraction conditions of DanLin GranuLes. MethodsThe extraction conditions were optimized by orthogonal tests with the extract yield and Salvianolic acid B as indexes, and water volume, extracting times and extracting duration as factors. ResultsThe optimum extraction process was as follows： adding 9 times water and extracting 1h for 2 times. ConclusionThe optimum extraction process is reasonable, feasible, and suitable for industrialized production.

DanLin GranuLes; water extraction process; orthogonal tests

新疆医科大学2012年度科研创新基金(ZYY201207)

王纤汝(1969-)，女，大专，主管药师，研究方向：新药研发与医院药学管理， E-mail:2326193940@qq.com。

李茜，女，硕士，副主任中药师，研究方向：新药研发， E-mail:reallynana@163.com。

R943

A

1009-5551(2016)10-1302-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.10.022

2016-6-17]