家系性AMEL Y、DYS456、DYS576、DYS570同时缺失1例

刘 薇，彭 诚，尚雷鹏，毕 洁，余纯应，李妙霞，霍家润

（1.北京明正司法鉴定中心，北京100083；2.北京市公安局海淀分局刑侦支队，北京100142）

诉讼与案例
Litigation and Case Report

家系性AMEL Y、DYS456、DYS576、DYS570同时缺失1例

刘 薇1，彭 诚2，尚雷鹏2，毕 洁1，余纯应1，李妙霞1，霍家润1

（1.北京明正司法鉴定中心，北京100083；2.北京市公安局海淀分局刑侦支队，北京100142）

法医遗传学；STR；Amelogenin；染色体；突变

1　案例

1.1简要案情

某日，在某城中村附近的公园内发生一起强奸案，嫌疑人逃逸，勘察人员随即提取受害人阴道拭子进行精斑的检验，并提取受害人血样作为对照。

1.2检验过程

检材PSA试验呈阳性，经差异裂解法提取，用Identifiler Plus试剂盒（美国AB公司）在9700型扩增仪（美国AB公司）上进行复合扩增，PCR体系及条件按照试剂盒说明书，采用3130xl遗传分析仪（美国AB公司）进行毛细管电泳检测，用Gene Mapper ID V3.2软件进行基因分析。检验结果表明，该分型AMEL基因座为X峰，RFU值与杂合子等位基因RFU值接近（见图1，部分基因座省略）。该分型与受害人血样的分型结果不符。经重新提取并改用GoldeneyeTM20A试剂盒（北京基点认知生物有限公司）进行验证，结果一致。随后，用Y-filer及Y-filer Plus试剂盒（美国AB公司）进行Y-STR检验。Y-filer结果显示DYS456、DYS458基因座丢失，Y-filer Plus结果显示DYS456、DYS576、DYS570基因座丢失。用PowerPlex Y23（美国Promega公司）验证，结果一致。用Goldeneye 17X试剂盒（北京基点认知生物有限公司）检测，各基因座均为单峰。

图1　AMEL X与相邻基因座杂合子的峰高接近

参考NCBI最新Y染色体参考序列，重新设计DYS456、DYS570、DYS576和AMEL的PCR引物，将扩增产物分别延长至707bp、604bp、792bp、794bp后进行电泳检测（见表 1），结果显示在 DYS456、DYS570、DYS576和AMEL无电泳条带，而对照男性的电泳结果正常。

表1　DYS456、DYS570、DYS576和AMEL的PCR引物序列

3　结果与讨论

上述检测结果证实现场检材确系一男性个体所留。由于案发地位于城乡结合部，人口复杂，为了缩小侦查范围，侦查员对周围城中村内67户不同父系的男性个体进行采血筛查，并进行Y-STR的检验，得到罗某义的Y-STR分型结果与现场检材一致。经查，罗某义的堂弟罗某洪有重大作案嫌疑。嫌疑人到案后对其血样进行采集，经比对，罗某洪的常染色体STR分型及Y-STR分型与现场检材一致。至此，本案成功告破。

人牙釉质蛋白基因（Amelogenin基因）检测是法医DNA性别鉴定的主要依据［1］，然而人牙釉质蛋白基因突变或缺失的个体，常规的检测手段往往容易造成性别误判，甚至误导侦查方向。通常情况下AMEL基因的分型是性别鉴定的有效手段，然而近年来AMEL基因缺失的案例在国内外已有报道。陈爱萍等［2］研究表明中国人群AMEL基因的突变率为0.045%，且男性的AMEL基因突变率较女性高。AMEL基因的突变可以发生在X染色体或Y染色体，导致相应的AMEL X或Y产物丢失。Shewale等［3］曾报道在7 000例男性个体中检出3例AMEL X扩增产物缺失。Steinlechner等［4］在3万名无关男性个体中检出6例AMEL Y缺失的个体，国内也有AMEL Y伴单个Y-STR基因座基因缺失的报道［5］。在实际检案中，AMEL X缺失不至于影响性别的判断，而AMEL Y缺失的个体往往容易造成性别的误判，甚至误导侦查方向。在检验这类个案时，通过检测Y-STR有助于对AMEL Y缺失个体的性别判断。

Y-STR位于Y染色体非重组区，为男性个体所特有的遗传标记，与X染色体不发生重组，符合单倍体连锁遗传，父传子、子传孙，在排除突变的前提下，同一父系男性个体的Y-STR分型相同。因此，在家系排查中有着重要的价值。本案中，男性嫌疑人及其堂弟的AMEL Y基因发生了丢失，且Y-STR检测结果中DYS456、DYS576和DYS570三个遗传标记未检出分型，反映出嫌疑人的重要父系特征，因此在本案中最大限度地缩小了侦查范围，为侦查提供有效线索的同时，节约了办案经费和时间。

本案的检测过程中除上述丢失的等位基因外，其余峰型良好，可以排除DNA模板质量及扩增非特异性引起的丢失。而重新设计PCR引物后仍无法扩增出目标片段，表明本案中家系的AMEL Y和DYS456、DYS570、DYS576基因座丢失不是由于引物结合部位的点突变导致的。因此，考虑本案中的家系在Yp11.2发生了大片段的丢失。在NCBI参考序列中检索相关基因座的物理位置后不难发现，丢失片段的范围涵盖了Y染色体短臂末端非重组区的起始部分，即从DYS456上游至DYS458上游引物结合部位附近的最少3.5Mb，其结果可以通过DNA测序的方法直接证实。

本案中的检材经 Y-filer Plus试剂盒检测DYS458基因座分型为23，而Y-filer试剂盒未检出分型，这可能是由于两种试剂盒在该基因座的引物设计存在细微差别，后者的引物结合部位存在点突变或位于上述缺失的片段内，导致序列特异性引物无法同模板DNA结合，进而导致Y-filer试剂盒DYS458基因座扩增失败，出现无效等位基因。由于AB公司这两种试剂盒的引物设计未对外公开，这一机制有待进一步研究。

综上，当试验结果的性别判定与案情相悖或前后矛盾时，应当考虑Amelogenin基因丢失的可能，这种结果与引物结合部位稀有性突变或性染色体上大片段的丢失有关，应当重新设计引物进行检验，检测X-STR、Y-STR亦有助于性别的判定。

［1］Balbuena，P García-Vázquez.A Rapid and Quantitative DNA Sex Test:Fluorescence-Based PCR Analysis of X-Y Homologous Gene Amelogenin［J］.BioTechniques，1993，（15）：637-641.

［2］陈爱萍，陈勇，王会品，等，中国人群Amelogenin基因的突变频率和突变类型，中华医学遗传学杂志，2007（6）:615-619.

［3］Shewale J G，Richey S L，Sinha S K.Anomalous Amplification of the Amelogenin Locus Typed by AmpFLSTR［R］Profiler Plus［TM］Amplification Kit［EB/OL］.（2000-10-01）［2015-08-01］.http://go.galegroup.com/ps/anonymous？id=GALE| A137921528.

［4］Steinlechner M，Berger B，Niederstatter H，et al.Rare Failures in the Amelogenin Sex Test，Int legal Med，2002，（116）：117-120.

［5］陶晓岚，聂笑联.家系性男性Y-Amelogenin及DYS458基因同时缺失1例［EB/OL］.（2011-03-29）［2011-03-29］.http: //www.legalmed.org/web/paper/73.htm.

（本文编辑：李成涛）

DF795.4

Bdoi:10.3969/j.issn.1671-2072.2016.05.017

1671-2072-（2016）05-0099-02

2015-09-10

刘薇（1989—），女，法医师，主要从事法医DNA检验鉴定工作。E-mail:695152589@qq.com。