后腹腔镜下肾部分切除术联合过继免疫疗法应用于肾癌的疗效分析

郑 航，李长建，李 军，靳全恒，窦启锋

（新乡医学院第三附属医院，新乡 453003）

后腹腔镜下肾部分切除术联合过继免疫疗法应用于肾癌的疗效分析

郑 航，李长建，李 军，靳全恒，窦启锋

（新乡医学院第三附属医院，新乡 453003）

目的：探讨后腹腔镜下肾部分切除术联合过继免疫疗法应用于肾癌的疗效。方法：选取我院收治的90例后腹腔镜肾部分切除术后病理确诊为肾透明细胞癌患者，将其随机分为观察组和对照组，观察组接受术后常规治疗联合过继免疫治疗，对照组术后接受常规治疗联合细胞因子治疗，比较两组治疗前后的免疫指标、临床指标变化。结果：治疗前两组患者的白细胞、转氨酶、尿素氮以及肌酐水平比较无明显差异，治疗后对照组的白细胞较治疗前明显升高，转氨酶明显下降，且与观察组比较有明显差异。治疗前两组患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+、NK指标比较无明显差异，治疗后观察组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK与治疗前相比均明显升高，与对照组相比有明显差异。结论：腹腔镜肾部分切除术后采用过继免疫疗法治疗能够有效提高治疗效果，增强机体免疫功能，且不良反应较小，值得推广应用。

腹腔镜；肾部分切除；过继免疫

肾癌是泌尿系统中常见的第二大肿瘤性疾病，20%的患者在初诊时已发现转移，30%患者术后出现转移，且其发病率在不断上升，肾癌属于免疫原性较强的肿瘤，免疫治疗仍是手术后的重要辅助治疗手段［1］，经过大量研究证实，干扰素以及白介素-2应用于转移性肾癌治疗可以取得较好的效果，但是两者的有效率均较低，患者的生存率也未见延长［2］，对于预防肾癌术后复发缺乏有效的方法，也成为了临床上的一大难题，本研究就腹腔镜肾部分切除术后采用过继免疫疗法进行辅助治疗的效果作如下研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院于2011年1月～2014年12月间收治的90例肾癌患者，所有患者均经过术后病理确诊，将其随机分为观察组以及对照组，每组45例，其中观察组接受术后常规治疗联合过继免疫治疗，对照组术后接受常规治疗联合细胞因子治疗，观察组中男24例，女21例，年龄41～82岁，平均年龄61.2±4.3岁，对照组中男26例，女19例，年龄39～81岁，平均年龄63.4±2.5岁，治疗前血常规、肝肾功能以及心电图检测结果均真成功，所有患者均无急慢性炎症反应，无自身免疫性疾病，无其他原发性肿瘤疾病，无出现营养不良或恶病质情况。

1.2 手术方法 手术采取全麻方式，患者取健侧卧位，将腰桥垫高；常规消毒铺巾，全部采用经腹膜后手术路径，游离腹膜后脂肪，以腰大肌为标志寻找肾动脉，先予以游离后暂不阻断。切开肾周筋膜，依据术前影像学检查探查肿瘤位置，充分清理肿瘤周边脂肪囊之脂肪，游离肾脏（保留肿块的周围脂肪），检查有无多发肿瘤病灶；冰盐水浸泡肾周，采用动脉血管钳将肾动脉阻断，距肉眼所见的肿瘤边界0.5 cm以上将肿瘤切除，若术中有可疑的切缘则予送术中冰冻病理检查；创面不做特殊处理，以用4-0可吸收线缝合集合系统进行缝合及肾脏创面；1-0可吸收线对创面全层进行连续缝合；解除肾动脉阻断，观察创面有无活动性出血，腹膜后放置1根硅胶引流管［3］。

1.3 免疫治疗方法

1.3.1 常规治疗方法 手术后不进行任何治疗，只给予与CIK细胞输注的类似安慰剂治疗。

1.3.2 CIK细胞制备 采集肿瘤患者的抗凝全血100mL，将其置于EDTA抗凝管中，加入淋巴细胞分离液以制备单个核细胞（PBMC），采用RPMI-1640悬浮后种于培养瓶中，置于37℃、5%二氧化碳培养箱中培育3h，弃去悬浮细胞收集外周血单核细胞，用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基悬浮1×106/mL细胞于培养瓶中，加入粒细胞刺激因子1000U/mL、IL-4 500U/mL，将其置于37℃、5%二氧化碳培养箱中，在饱和湿度条件下培育4d后予以换液，再次加入TNF-ɑ 100ng/mL后继续培养3d，收集悬浮细胞即得到成熟的DC细胞，在第11d收集所需的CIK细胞。

1.4 过继免疫疗法 对照组采取常规治疗方法，观察组采用过继免疫方法，包括注射4次DC，2次静脉输注CIK以及观察相关临床指标。采集细胞的当天设定为第0d，于第7d开始进行治疗，其治疗途径以及剂量为：将1Ml DC分别注射于6点皮下位置，分别为双侧锁骨下、腋下以及双侧腹股沟区，隔日1次，共注射4次［4］，每次剂量为5×106；第3次进行DC注射的同时开始静脉回输CIK细胞，隔日1次，共静脉滴注2 次，分别在第7d、第11d以及第20d抽取外周血2mL用于细胞免疫分析。

1.5 观察指标及标准 与治疗前以及治疗后4周抽取外周血采用流式细胞技术检测T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+细胞）以及NK细胞的变化，比较治疗前后两组患者白细胞、肌酐、转氨酶、尿素氮水平。

1.6 统计学方法 使用SPSS17.0软件包对本次实验数据进行处理，计量资料用mean±SD表示，采用t检验，计数采用χ2检验，用P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后外周血象以及肝肾功能变化比较 治疗前两组患者的白细胞、转氨酶、尿素氮以及肌酐水平比较无明显差异，治疗后对照组的白细胞较治疗前明显升高，转氨酶明显下降，且与观察组比较有明显差异，P＜0.05。

2.2 两组治疗前后的外周血T淋巴细胞以及NK细胞变化比较 治疗前两组患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK指标比较无明显差异，治疗后观察组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK与治疗前相比均明显升高，与对照组相比有明显差异，P＜0.05，见表2。

表1 两组治疗前后外周血象以及肝肾功能变化比较

表2 两组治疗前后的外周血T淋巴细胞以及NK细胞变化比较

3 讨论

肾细胞癌是起源于肾实质泌尿小管上皮系统的常见恶性肿瘤，是肾脏最常见的恶性疾病之一，尽管随着影像学技术的不断发展，越来越多的肾癌在早期被发现，但是仍有约25%的患者在确诊时已出现转移［6］，对于局部肾癌患者，目前仍以积极的手术治疗为主，但是对于进展期肾癌因其特殊的病理特性，手术治疗受到了一定的局限，对于有进展倾向以及晚期肾癌患者，放化疗均不敏感，而免疫治疗则能够取得一定的效果［7］。

本研究的结果发现，观察组在治疗后细胞免疫学指标较治疗前有明显提升，提示常规治疗联合免疫治疗量后患者的外周血淋巴细胞亚群指标显著上升，免疫功能明显增强，对照组给予常规治疗后免疫指标无明显变化，说明观察组采用术后过继免疫疗法能够在提升患者免疫水平方面起到良好的效果。

DC是一类具有典型树突状形态、细胞膜表面高表达MHC-II类分子，能够激活初始T细胞的细胞，是目前已知的抗原提呈能力最强的细胞，其能够分泌多种细胞因子直接影响B淋巴细胞的增殖活性，激活体液免疫应答，在抗肿瘤过程中发挥重要作用，其作用机制主要有［8-10］：①吞噬凋亡细胞，激活CD4+、CD8+T淋巴细胞，活化CD8+T淋巴细胞微肿瘤特异性杀伤细胞，释放穿孔素、端粒酶等物质引起靶细胞坏死；激活CD4+T淋巴细胞后通过诱导体液免疫释放一系列的抗体或细胞引起直接杀伤肿瘤细胞。②直接抑制肿瘤细胞增殖；③通过分泌细胞因子增强NK、巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的功能。

CIK细胞属于由多种细胞因子所有到的非特异性杀伤细胞，能够参数大量的细胞因子如IL-4、IFN等，从而实现了对肿瘤细胞的抑制或杀伤作用，CIK细胞能够促使Fas基因以及其配体Fasl的合成，从而诱导肿瘤细胞的凋亡，同时因CIK细胞即包含了 T淋巴细胞强大的杀伤活性，同时也具有NK细胞杀伤时的非主要组织相容性复合体限制性，所以其对于包括肾癌在内的多种肿瘤细胞系均表现出强大的杀伤作用［11］，同时CIK对于正常骨髓的细胞毒性作用较小，在不损伤机体免疫系统功能前提下杀伤肿瘤细胞。本次研究结果发现观察组治疗后CR+PR的比例明显高于对照组，这是由于联合培养的DC以及CIK细胞所产生的细胞群体比原代DC以及CIK细胞的增殖活性都要更强，不仅提高了CIK的细胞毒性作用，也提高了DC的功能［12］。

同时本次研究结果发现观察组治疗前后的白细胞、转氨酶、尿素氮以及肌酐水平比较均无明显差异，提示过继免疫治疗后未出现明显的毒副作用，相比于传统的放化疗安全性更高。

综上所述，腹腔镜肾部分切除术后采用过继免疫疗法治疗能够有效提高治疗效果，且不良反应较小，该研究也为免疫治疗在肾癌中的作用提供了一定的临床依据，但是对于且确切的疗效以及CIK的抗肿瘤作用机制还需更大样本量的进一步研究。

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Analysis the effect of Laparoscopic partial nephrectomy combined with adoptive immunotherapy therapy for treatment of kidney cancer

Zheng Hang， Li Chang-jian， Li Jun， Jin Quan-heng， Dou Qi-feng
（The Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University， Xinxiang 453003， China）

Objective To study the effect of Laparoscopic partial nephrectomy combined with adoptive immunotherapy therapy for treatment of kidney cancer. Methods Chose 90 cases of renal clear cell carcinoma patients in our hospital， randomly divided them into observation group and control group， observation group received conventional treatment combined with postoperative adoptive immunotherapy， control group received routine postoperative combined with cytokines therapy， compare the change of immune indexes， clinical indicators before and after treatment in two groups. Results White blood cells， transaminase，urea nitrogen and creatinine level had no significant difference between two groups before treatment， white blood cells significantly increased and the aminotransferase decreased obviously in the control group after treatment， and have obvious differences compared with the observation group. CD3 +， CD4 +， CD8 +， CD4 + / CD8 + and NK index had no significant difference between two groups before treatment， CD3 +， CD4 +， CD4 + / CD8 + and NK in the observation group after treatment were significantly higher compared with before treatment， have obvious differences compared with control group. Conclusion Laparoscopic partial nephrectomy combine adoptive immunity therapy can effectively improve the effect of treatment， enhance the body’s immune function， and has less adverse reactions， is worthy of popularization and application.

laparoscopic； renal resection； adoptive immunity

R737.11

A

1673-016X（2016）04-0095-04

2016-04-13

郑航，E-mail：2810941950@qq.com