口腔念珠菌病、单纯疱疹性口炎与HIV患者相关性的研究

刘 静

（泸州市人民医院口腔科，泸州 646000）

口腔念珠菌病、单纯疱疹性口炎与HIV患者相关性的研究

刘 静

（泸州市人民医院口腔科，泸州 646000）

目的：探讨口腔念珠菌病、单纯疱疹性口炎与HIV患者免疫状况的关系。方法：选取2013年1月～2015年12月血清HIV-1感染阳性者126例，其中合并口腔念珠菌病患者67例，合并单纯疱疹性口炎患者29例，无口腔念珠菌病/单纯疱疹性口炎患者30例，检测患者外周血CD4+T淋巴细胞计数、IL-4、IL-17（A/F）、IFN-γ等。结果：合并口腔念珠菌病HIV患者CD4+T细胞计数和IL-17（A/F）分别为76（199.00）mm3和19.08（14.15）pg/ mL，低于其他患者，而病毒载量为160772（401525.00）VLcopies/mL，高于其他患者，差异比较有统计学意义；合并单纯疱疹性口炎HIV患者与无口腔念珠菌病/单纯疱疹性口炎HIV患者外周血相关检测因子比较差异无统计学意义；Logistic回归模型显示HIV患者口腔念珠菌病发生与IL-17（A/F）有关，IL-17（A/F）为罹患口腔念珠菌的保护因素。结论：合并口腔念珠菌病HIV患者CD4+T细胞计数和IL-17（A/F）水平低，病毒载量高，其中IL（A/F）发挥重要作用；合并单纯疱疹性口炎HIV患者暂未查见有意义指标。

口腔念珠菌病；单纯疱疹性口炎；HIV；CD4+T细胞计数；IL-17（A/F）

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）是近年来社会危害较大、临床预后不佳以及传染性较强的疾病，毒品、不洁性行为以及医源性感染等高危因素，均可促进艾滋病在普通人群中的传播。艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）通过对于人体免疫系统CD4+T淋巴细胞的损伤，导致细胞免疫宫内不全，多数感染者可因为严重的肺部感染、颅内感染以及多器官功能衰竭综合症的发生而死亡［1，2］。

AIDS的感染不仅导致机体本身生理功能的退化和损伤，同时可增加细菌、真菌或者病毒的入侵和感染几率，口腔念珠菌病是念珠菌属感染所引起的口腔黏膜疾病，由于AIDS对于CD4+T淋巴细胞的影响，导致菌群失调或免疫力降低，而使内脏、皮肤、黏膜被真菌感染者日益增多［3，4］，而疱疹性口炎是一种由单纯疱疹病毒所致的口腔黏膜感染性疾病，近年来在AIDS人群中同样具有上升的趋势，同时具有合并感染征象的AIDS患者的临床预后较差，病死率较高［5］，如何提高临床诊治的成功率是一线皮肤性病科医师共同关注的课题。本次研究重在探讨具有合并感染的AIDS患者体内的相关细胞因子以及病毒载量的变化，进而进一步揭示合并感染患者疾病发生发展的机制，为后续临床研究提供理论参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月～2015年12月本辖区疾病预防控制中心艾滋病门诊确诊为血清HIV-1感染阳性者，纳入标准：（1）年龄＞18周岁；（2）CD4+T淋巴细胞计数＜350个/mm3；（3）尚未接受HAART药物治疗；（4）合并有口腔念珠菌病或单纯疱疹性口炎，或无口腔念珠菌病和单纯疱疹性口炎患者；（5）患者或患者知情同意并签署同意书。排除标准：（1）入选前两周服用过抗真菌、细菌、病毒类药物；（2）入选前两周使用过抗真菌类，广谱抗菌类漱口水；（3）18岁以下患者、孕妇、哺乳期患者。本次研究共纳入HIV患者126例，其中合并口腔念珠菌病患者67例，合并单纯疱疹性口炎患者29例，无无口腔念珠菌病/单纯疱疹性口炎患者30例。

1.2 检测方法 病毒载量检测：采用荧光讯号测计仪（Q340，德国拜耳公司）和相应试剂检测（bDNA法），采肘静脉血，2mL血样在室温下静置30分钟后，4000 r/min离心10分钟分离血清，将血清置于Eppendorf管中，-80℃超低温冰箱保存，避免反复冻融。

CD4+T细胞计数检测：采集患者清晨空腹血5mL，置于肝素钠抗凝管中，采用流式细胞仪单标法进行CD4+T细胞的检测。相关标记操作于5 mL抗凝管中进行，100UL全血与CD4-FITC抗体室温反应25min，采用红细胞裂解液optiLYse C 溶血素溶解红细胞，PBS液体洗涤三遍，每次5分钟，生理盐水重新悬浮细胞，上机检测。（FACS calibur流式细胞仪购自美国BD公司）。

IL-4、IL-17（A/F）、IFN-r等细胞因子的检测：ELISA法检测血清相关因子水平的表达 采肘静脉血2mL血样在室温下静置30分钟后，4000r/min离心10分钟分离血清，4℃保存待测，以标准品稀释液将标准品复溶，静置15min后混匀，背比稀释为7个浓度，取出板条，除了对照孔外每个孔加入不同浓度的标准品，剂量为100 μL/孔，采用封板盖封住，室温反应120min，使用PBS液体洗涤三次，除了空白对照孔，每孔加入检测液（100 μL），室温孵育一小时，PBS洗涤三次，加入底物（50 μL/孔），避光孵育25min，加入终止液5min后测定450nm处吸光度。 IL-4、IL-17（A/F）、IFN-r抗体购自abcum公司，配套试剂购自罗氏检测公司，严格按照说明书的要求进行操作。

1.3 统计学处理 数据处理分析采用SPSS19.0，符合正态分布计量资料采用均数±标准差表示，不符合正态分布计量资料采用中位数（四分位间距）M（QS）表示，组间比较使用方差分析或Mann-Whitney U检验，计数资料比较使用χ2检验，多因素分析采用Logistic回归分析。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况 合并口腔念珠菌病HIV患者、合并单纯疱疹性口炎HIV患者和无口腔念珠菌病/单纯疱疹性口炎HIV患者年龄、性别及感染时间比较差异无统计学意义，见表1。

表1 研究对象一般情况比较

2.2 外周血相关检测因子比较 合并口腔念珠菌病HIV患者CD4+T细胞计数和IL-17分别为76（199.00）mm3和19.08（14.15）pg/mL，低于其他患者，而病毒载量为160772（401525.00）VLcopies/mL，高于其他患者，差异比较有统计学意义（P＜0.05）；合并单纯疱疹性口炎HIV患者与无口腔念珠菌病/单纯疱疹性口炎HIV患者外周血相关检测因子比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 外周血相关检测因子比较M（QS）

2.3 多因素分析 应用Logistic回归模型，采用前进LR法，分析口腔念珠菌病发生与HIV患者外周血相关检测因子的关系，结果显示HIV患者口腔念珠菌病发生与IL-17（A/F）有关（OR=0.006），IL-17（A/F）为罹患口腔念珠菌的保护因素。见表3。

表3 HIV患者口腔念珠菌病多因素相关分析

3 讨论

HIV通过破坏人体的T淋巴细胞，进而阻断细胞免疫和体液免疫过程，导致免疫系统瘫痪，致使各种疾病在人体内蔓延，最终导致艾滋病。由于HIV的变异极其迅速，难以生产特异性疫苗，至今无有效治疗方法，对人类健康造成极大威胁。另外，更为重要的是，AIDS以及HIV病毒本身对于机体的慢性免疫细胞特别是淋巴细胞的损伤，可导致下游浆细胞分泌抗体宫内不足、抗原提呈细胞提呈作用明显减弱等，从而影响机体全身的免疫、代谢以及器官功能［6，7］。HIV病毒具有RNA基因组、酶（逆转录酶、整合酶、蛋白酶）以及其他来自宿主细胞的成分，在通过逆转录病毒外壳包涵体（人类T4淋巴细胞白血病病毒活性成分）的逆转录表达中，可进一步整合机体正常体细胞以及低分化细胞的基因组，进而增强对于全身性免疫功能的损伤。CD4+T淋巴细胞免疫功能的不足可促进包括真菌以及细菌的感染几率的增加［8］，人体第二道保护屏障作用减弱，菌血症的发生率可上升5%-10%［9，10］。

口腔念珠菌、单纯疱疹病毒合并感染AIDS患者后，可进一步增强HIV病毒gag基因编码结构蛋白的浓度和量，导致病毒的整合效能明显上升，组织损伤和免疫屏障的功能衰退更为明显。相关研究证实，合并单纯疱疹病毒感染的HIV感染患者，其五年内病死率可上升15%，同时疾病进展率上升了5%左右［11，12］，严重的颅内感染或者肺部感染的几率同样明显增加，预后不良。对于合并感染AIDS患者的相关发病机制的研究将为抑制AIDS病情的进展、改善预后提供理论参考，本次研究的创新性在于首次探讨了IL-17的下调以及相关细胞因子的改变对于AIDS患者合并感染单纯疱疹病毒或者念珠菌的影响。

本次研究发现，各组患者的年龄、性别以及感染时间均无显著差异，在提示各组患者基础性临床资料不存在临床资料纳入偏移的同时，表明单纯疱疹病毒或者念珠菌病患者的感染可能主要与易感人群的体质或者机体免疫能力相关。CD4-T淋巴细胞是人体免疫系统中一种重要的免疫细胞一简称为CD4细胞，由于HIV的攻击对象正是人体的CD4细胞，因此CD4记数能够直接反映人体免疫功能，本次研究中念珠菌病患者的血清中CD4+T淋巴细胞计数仅为76（199.00）mm3，提示HIV感染者的免疫系统受到了严重损害。IL-17细胞因子是介导细胞免疫应答和体液免疫应答的关键性调节因子，IL-17的下降往往提示抗原提呈功能细胞APC的表面抗原的提呈作用不足，免疫应答能力欠缺，本次研究中IL-17较无合并感染组HIV患者下降了50%以上。

Wandeler G等［13-15］学者分析了67例AIDS患者合并念珠菌感染的相关糖皮质激素治疗后的血清学指标，认为合并念珠菌感染的AIDS患者的血清IL-17可下降30%以上，并认为IL-17每下降5pg/mL，合并念珠菌感染的AIDS患者的病死率可上升5%～7%，临床预后较差。另外，合并念珠菌感染组的病毒载量复制较快，病毒负荷较高，可达160772（401525.00）copies/mL。念珠菌感染组的相关病毒载量的增加可能与念珠菌释放的内毒素能减弱网织内皮系统的功能、促进轻炎症反应、减少抗体形成有关，但相关机制仍然需要进一步探讨。但笔者并未发现合并单纯疱疹病毒感染对于AIDS患者病情的影响，考虑单纯疱疹病毒的感染和损伤主要局限于黏膜和皮肤，对于机体的淋巴细胞免疫功能的影响较小。

综上所述，合并口腔念珠菌病HIV患者CD4+T细胞计数和IL-17（A/F）水平低，病毒载量高，其中IL（A/F）可能对于疾病的发生发展具有重要作用，但合并单纯疱疹性口炎HIV患者并无相关表现。

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Oral candidiasis， herpes simplex stomatitis and HIV patients correlation study

Liu Jing
（Luzhou People’s Hospital， Luzhou 646000， China）

Objective To investigate oral candidiasis， herpes simplex stomatitis and HIV patients immune status correlation. Methods Selected from January 2013 to December 2015， 126 patients with serum HIV-1 infection positive， wherein the combined oral candidiasis in patients with 67 cases， combined herpes simplex stomatitis 29 patients， without oral candidiasis/herpes simplex stomatitis 30 patients， detected peripheral blood CD4+T lymphocyte count， IL-4， IL-17（A/F）， IFN-γ etc. Results Combined oral candidiasis HIV patients CD4+T cell count and IL-17（A/F）were 76（199.00）mm3and 19.08（14.15）pg/ ml， lower than other patients， viral load was 160772（401525.00）VLcopies/ml， higher than other patients， the difference was statistically significant； combined herpes simplex stomatitis HIV patients and without oral candidiasis/herpes simplex stomatitis HIV patients peripheral blood related factors difference had no statistically significant； Logistic regression model showed that HIV patients with oral candidiasis and IL-17（A/F）related）， IL-17（A/F）protection factors of oral candidiasis. Conclusion The combined oral candidiasis HIV patients CD4+T cell count and IL-17（A/F）low level， high viral load， whereas IL（A/F）play an important role； The combined herpes simplex stomatitis HIV patients yet found meaningful indicators.

oral candidiasis； herpes simplex stomatitis； HIV； CD4+T cell count； IL-17（A/F）

R512.91

A

1673-016X（2016）04-0062-04

2016-03-04

刘静，E-mail：2893648540@qq.com