BRAF基因与结直肠癌预后的关系

叶　薇，陈智伟，林海凤，陈玉琳，肖　芳，卓立飞，林　晶

莆田学院附属医院病理科，福建莆田　351100

BRAF基因与结直肠癌预后的关系

叶薇，陈智伟，林海凤，陈玉琳，肖芳，卓立飞，林晶

莆田学院附属医院病理科，福建莆田351100

目的 探讨BRAF基因对结直肠癌预后的影响。方法 整群收集2011年1月—2013年1月期间在莆田学院附属医院确诊结直肠癌并行结直肠癌根治术的患者153例，其中BRAF基因突变阳性的患者18例（实验组），BRAF基因突变阴性患者135例（对照组），所有患者均具有完整的随访资料。回顾性分析两组的随访资料，总结BRAF基因突变的突变类型，并分析BRAF基因突变阳性对患者预后的影响。结果 在该研究中，发现BRAF基因突变型18例（11.8%），其中位于V600E突变15例，占所有突变患者83.3%；位于exon11上的甘氨酸环的突变为3例，占所有突变患者14.3%，未见其他位点突变。 BRAF基因突变多见于近端结肠，而远端结肠及直肠较少见，二者的差异具有统计学意义（P＜0.05）。BRAF基因在肿瘤分化程度、病理浸润深度、淋巴结转移等方面的差异具有统计学意义（P＜0.05）。平均随访时间为1～60个月，生存时间为3～60个月，平均生存时间为（35.2±21.5）个月。生存分析实验组的平均生存时间为（19.7±16.8）个月，术后1、2、3、4、5年总生存率分别为61.1%、27.8%、22.2%、5.6%、5.6%。Log-rank检验显示两组间总生存率的差异有统计学意义（P=0.001）。结论 结直肠癌患者癌组织BRAF基因突变率与患者生存率成负相关，提示患者预后不良。

结直肠癌；BRAF基因突变；生存率；预后

［Abstract］Objective To explore the mutated BRAF gene's influence on the prognosis of colorectal cancer.Methods Group collected in January 2011—January 2013 in putian college affiliated hospital diagnosis of colorectal cancer in parallel，153 cases of patients with colorectal cancer radical，18 patients with the mutated BRAF gene mutation positive（experimental group），mutated BRAF gene mutation negative patients，135 cases（control group），all patients were with complete follow-up data.Two groups of follow-up data were retrospectively analyzed，summarizes the mutated BRAF gene mutation types of mutations，and analyze the mutated BRAF gene mutation positive impact on the prognosis of patients.Results This study，we found the BRAF gene mutation type in 18 cases（11.8%），which is located in the V600E mutation in 15 cases（such as in Figure 2），accounted for all of the mutations were 83.3%；in exon11 glycine loop mutations in 3 cases，accounted for all of the mutations were 14.3%.No other site mutation.BRAF gene mutations were more common in the proximal colon，while the distal colon and rectum were rare，and the differences between the two were statistically significant（P＜0.05）.BRAF gene in tumor differentiation，depth of invasion，lymph node metastasis and other aspects of the difference is statistically significant（P＜0.05）.Mean follow-up time was 1～60 months，the survival time was 3～60 months，the average survival time was（35.2±21.5）months.Survival analysis of the experimental group average survival time was（19.7±16.8）months，1 years，2 years，3 years，4 years，5 years，the overall survival rate was 61.1%，27.8%，22.2%，5.6%，5.6%.Log-rank test showed that there was a significant difference in the overall survival rate between the two groups（P=0.001）.Conclusion Patients with colorectal cancer patients with carcinoma tissue BRAF gene mutation rate and survival rate into negative correlation，the patient prognosis.

［Key words］Colorectal cancer；The mutated BRAF gene mutation；The survival rate；Prognosis

在人类肿瘤中BRAF基因主要见于恶性黑色素瘤、乳头状甲状腺癌、结直肠癌。作为鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1的家族成员，BRAF基因位于7q34，长约190kb，可编码一个783个氨基酸组成的BRAF蛋白，该蛋白与KRAS蛋白同为Ras-Raf-MEK-ERK信号通路中上游重要调节因子，调控 “畸形隐窝灶-增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌”途径［1］。现阶段对KRAS基因对患者预后的研究已经较为明确，即KRAS基因突变对患者预后没有影响。而BRAF基因对结直肠癌患者预后是否有影响仍较少有报道。该文拟对收集2011年1月—2013年1月期间在莆田学院附属医院确诊结直肠癌并行结直肠癌根治术的患者153例，这些BRAF基因与患者预后进行探讨，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

整群收集在莆田学院附属医院确诊结直肠癌并行结直肠癌根治术的患者153例，其中39例行腹腔镜辅助下R0根治术，102例行传统开放性R0根治术。所有病例均经术后病理确认（图1），肿瘤分期采用AJCC分期标准。所有病人的临床病理资料见表1。

图1　153例患者病例研究

1.2统计方法

数据采用SPSS 19.0统计软件包进行统计分析。符合正态分布的计量资料以表示，组间采用独立样本t检验比较分析；非正态分布的计量资料以中位数（范围）［M（R）］表示，组间分析比较方法采用独立样本非参数检验（秩和检验）。计数资料以［n（%）］表示，组间分析采用χ2检验进行比较。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1 BRAF基因突变率及突变类型分析

在该研究中，发现BRAF基因突变型18例（11.8%），其中位于V600E突变15例（如图2），占所有突变患者83.3%；位于exon11上的甘氨酸环的突变为3例，占所有突变患者14.3%，未见其他位点突变。见表2。

表1　所有病人临床病理资料［n（%）］

图2　V600E突变

表2　BRAF基因突变类型

2.2 BRAF基因突变与结直肠癌临床病理特征的关系

BRAF基因突变率与患者年龄、性别、TNM分期等临床病理特征均差异无统计学意义（P＞0.05）。BRAF基因突变多见于近端结肠，而远端结肠及直肠较少见，二者的差异具有统计学意义（P＜0.05）。BRAF基因在肿瘤分化程度、病理浸润深度、淋巴结转移等方面的差异具有统计学意义（P＜0.05）。具体见表3。

表3　BRAF基因突变与临床病理资料的关系

2.3 BRAF基因突变率与结直肠癌患者预后的关系

随访信息随访于2016年1月30日完成，随访1～60个月，生存时间为3～60个月，平均生存时间为（35.2± 21.5）个月。153例患者中11例健在，19例带瘤生存，124例死亡，未见失访病例。肿瘤复发14例，均为局部复发，复发率为9.1%。109例发生肿瘤转移，其中肝转移78例，肺转移 9例，肝肺同时转移 12例，其他部位转移10例。125例死亡病例中，肿瘤相关死亡病例106例。

生存分析实验组的平均生存时间为（19.7±16.8）个月，术后1、2、3、4、5年总生存率分别为61.1%、27.8%、22.2%、5.6%、5.6%。对照组的平均生存时间为（37.3± 21.3）个月，术后1、2、3、4、5年总生存率分别为85.2%、 74.8%、56.3%、44.4%、18.5%。Log-rank检验显示两组间总生存率的差异有统计学意义（P=0.001）。具体见图3。

图3　两组患者生存时间比较

3　讨论

结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一，随着人民生活水平及饮食结构的改善，结直肠癌的发病率及死亡率逐年上升。应敏刚等［2］研究发现福建省结直肠癌发病率及死亡率均居于所有癌症第5位。结直肠癌的发病是由环境及遗传因素等多因素、多基因相互作用的结果，其主要的发生机制包括：染色体不稳定（chromosome instability，CIN）途径、微卫星不稳定（microsatellite instability，MSI）途径、CpG岛甲基化表型（CpG island methylator phenotype，CIMP）途径、以及“畸形隐窝灶-增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌”途径，而BRAF基因作为Ras-Raf-MEK-ERK信号通路中上游重要调节因子在锯齿状途径中起到了关键的作用［3］。其次研究显示，KRAS基因的突变状态与结直肠癌患者接受抗EGFR治疗的效率密切相关，只有野生型KRAS患者才能从抗EGFR的治疗中获益，但是仍有一部分野生型患者对抗EGFR治疗无效，所有仍需寻找KARS之外的疗效预测指标提高预后预测的准确性。BRAF基因作为EGFR下游信号传导通路的重要分子，其基因状态将影响信号通路的传导，近年来在结直肠癌的靶向治疗上已成为了新的研究热点。由此可见研究BRAF基因与患者预后的关系将有助于为CRC的治疗提供新的思路及参考。

该研究中，从结直肠癌组织检测得到的结果是BRAF基因的突变率是11.8%，其中的主要突变位点是V600E位点（83.3%）。国内学者高静等对915例结直肠癌患者进行BRAF基因分析，发现其BRAF突变的发生率为4.4%（40/915），突变类型以V600E常见，且BRAF基因多数发生在肿瘤分化程度低和右半结肠（P＜0.05）。可能是样本大小不同或检测方法的差异，Zlobec等［4］相关研究结果显示BRAF基因的突变率在4%～13%，与该研究相符。其次该研究BRAF基因突变多见于近端结肠，而远端结肠及直肠较少见。BRAF基因突变型在肿瘤低分化、病理浸润深度程度深、淋巴结转移多的患者中比较常见，具有差异有统计学意义。而在年龄、性别、TNM分期等临床病理特征上均无显著相关性。伍洁［5］对166例结直肠癌患者癌组织进行BRAF基因分析显示在肿瘤分化、病理浸润深度、淋巴结转移方面存在与该研究相似的结果。朱晓丽等人［6］的研究结果显示BRAF基因突变最长发生于V600E位点，结肠癌的BRAF基因突变率高于直肠癌，右半结肠癌高于左半结肠癌，与该研究结果大致相符；同时该项研究表明BRAF基因突变与患者的性别相关，且女性的发病率高于男性患者。曹祥龙等［7］提出BRAF基因突变更常见于老年患者，而该研究未见此结果。对于该研究与该研究不符的情况考虑是样本的选择、样本的大小及检测方法的差异造成的。BRAF基因突变型与野生型二者的患者术后生存率的差异有统计学意义（P＜0.05），随着生存时间的延长，突变型患者的生存率显著下降，但是在5年生存率上差异无统计学意义（P＞0.05），这可能患者死亡病例增多，样本缩小有关。Ogino S等［8］也表示携带BRAF基因突变的结直肠癌患者的预后较差。而造成BRAF基因突变型患者生存率下降的可能原因是BRAF基因在结直肠癌的“畸形隐窝灶-增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌”途径过程中扮演着催化者的角色，其突变导致了MAPK通路的激活，协助细胞内信号的传递，促进癌细胞增值、永生化，限制了癌细胞的分化，增加了癌细胞的侵袭性生长有关［9］。

综上所述，结直肠癌的发病是受到复杂的网络系统调控，是一个多基因、多途径的的过程。随着BRAF基因突变预后不良的预测性相关研究的深入，出于对目前基因检测方法及靶向药物昂贵等现状的考虑，我们呼吁结直肠癌患者在选择治疗方案前先进行相关基因的检测了解肿瘤的复发转移风险，同时做好药敏实验，有助于更加准确的用药，降低治疗成本，提高治疗疗效，实现个体化资料。

［1］Chan TL，Zhao W，Leung SY，et al.braf and kras mutations in colorectal hyperplastic polyps and serrated adenomas［J］. Cancer Res，2003，63（16）：4878-4881.

［2］应敏刚.2014年福建省恶性肿瘤报告［M］.福州：福建科学技术出版社，2014：92-105.

［3］陈慧.结直肠癌发生机制研究进展［J］.胃肠病学，2013，18（3）：188-190.

［4］Zlobec I，Bihl MP，Schwarb，H et al.clinicopathological and protein characterization of braf-and k-ras-mutated colorectal cancer and implications for prognosis［J］.Int J Cancer，2010，127（2）：367-380.

［5］伍洁.结直肠腺癌BRAF基因突变对临床治疗和预后的意义［J］.中外医疗，2015（21）：55-56.

［6］朱晓丽，蔡旭，张玲，等.中国结直肠癌患者中KRAS与BRAF基因突变特征及其临床病理相关性［J］.中华病理学杂志，2012，41（9）：584-589.

［7］曹祥龙，汪欣.结直肠癌KRAS和BRAF基因突变的实验研究与临床意义［J］.中国医刊，2013，48（7）：23-26.

［8］Ogino S，Nosho K，Kirkner GJ，et al.cpg island methylator phenotype，microsatellite instability，braf mutation and clinical outcome in colon cancer［J］.Gut，2009，58（1）：90-96.

［9］Lee S，Cho NY，Choi M，et al.clinicopathological features of cpg island methylator phenotype-positive colorectal cancer and its adverse prognosis in relation to kras/braf mutation［J］. Pathol Int，2008，58（2）：104-113.

Mutated BRAF Gene Relationship with the Prognosis of Colorectal Cancer

YE Wei，CHEN Zhi-wei，LIN Hai-feng，CHEN Yu-lin，XIAO Fang，ZHUO Li-fei，LIN Ding
Affiliated Hospital of PutianUniversity，Department of Pathology，Putian，Fujian Province，351100 China

R735

A

1674-0742（2016）08（c）－0023-04

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.24.023

2016-05-25）

叶薇（1981.6-），女，江西上饶人，硕士研究生，主治医师，研究方向：肠道肿瘤。

陈智伟（1979.11-），男，福建莆田人，本科，副主任医师，研究方向：肿瘤病理诊断，E-mail：drchenzw@sohu.com。