血清网膜素-1与前列腺癌的相关性研究

张力　梁朝朝　张礼刚　周骏　张开平　郝宗耀　邰胜　杨诚



·临床研究·

血清网膜素-1与前列腺癌的相关性研究

张力梁朝朝张礼刚周骏张开平郝宗耀邰胜杨诚

目的研究血清脂肪因子网膜素-1(omentin-1)与前列腺癌的相关性。方法2015年7月至2016年3月我科收治的前列腺癌患者44例作为肿瘤组，同期前列腺增生患者42例作为对照组，两组患者的年龄相匹配，均空腹经肘静脉采集血液， ELISA法测定血清omentin-1水平。 结果与对照组相比，肿瘤组患者omentin-1、PSA、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。各项参数的Spearman相关性分析显示omentin-1与HDL-C、PSA水平呈正相关(分别r=0.363，P=0.000 6；r=0.356，P=0.000 8)，与空腹血糖水平呈负相关(r=-0.230，P=0.033)。二项Logistic回归分析显示omentin-1水平的独立影响因素是肿瘤分组，即罹患前列腺癌是使患者血清omentin-1水平升高的一个独立影响因素(P=0.000 4)。 结论血清脂肪因子omentin-1水平在前列腺癌与前列腺增生患者间有显著差异，提示其可能与前列腺癌的发生发展相关。

前列腺癌；脂肪因子；网膜素-1；肿瘤标志物

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是男性常见的恶性肿瘤，目前，PCa在美国的发病率居所有恶性肿瘤的第一位，因罹患PCa而死亡的人数仅次于肺癌，居所有肿瘤死亡的第二位。美国癌症协会预计，2016年全美将有180 890例新发PCa病例， 占所有男性新增癌症病例(841 390例)的21%;同年预期有26 120例PCa相关死亡病例， 占所有新增癌症死亡病例(314 290例) 的8%[1]。我国PCa发病率虽低于西方国家，但因生活水平的提高及PCa筛查手段的普及，发病率与癌症检出率也逐年升高并呈显著的低龄化趋势[2-4]。这一现象与众多影响因素有关，其中高胆固醇、高甘油三酯等饮食习惯不容忽视[5]。目前已有大量报道证实肥胖可导致PCa发病率增高[6-8]。近年来，研究人员一直在努力探索肥胖增加PCa发病风险的机制，除了胰岛素抵抗/高胰岛素血症、胰岛素样生长因子水平异常、慢性低度炎症等病理生理机制外，脂肪组织分泌的脂肪因子在联系肥胖与PCa发病中的作用日益受到重视[9]。目前已有报道发现脂联素、瘦素等与PCa的发生有关[10]。国外关于网膜素-1(omentin-1)作为新的脂肪因子与PCa发生、发展相关联的研究，直到近期才有报道[11]，而国内未见报道。近期有研究表明，高加索人群中的PCa患者多伴有MED12基因的突变，然而在韩国PCa患者中却完全没有MED12的突变[12]。同时，关于某个特定的影响因素在PCa发病中的正性或负性调控作用，也常有不同的结论[8,13]。因此，人种差异可能会使某些关键基因、细胞因子等在PCa诊疗中发挥不尽相同的作用。本课题旨在研究中国人群中omentin-1与PCa的关系，为新型PCa标志物的筛选提供新的思路。

对象与方法

一、研究对象

选取2015年7月至2016年3月我院新确诊的PCa患者44例作为肿瘤组，同期前列腺增生患者42例作为对照组。入选标准: ①确诊PCa未行药物治疗；②既往无恶性肿瘤史；③无激素的应用，无激素水平异常或免疫性疾病；④无心脑血管疾病；⑤凝血功能正常；⑥无明显感染性疾病。该项研究得到我院医学伦理委员会的批准。所有检查均在参与者知情同意下进行。

二、临床一般参数检测

身高、体重、血压等由专门人员测量，体重指数(BMI)=体重/身高2(kg/m2)。所有患者入院后完善泌尿系B超检查，测算前列腺体积(ml)。

三、临床生化指标测定

所有研究对象均禁食12 h后于清晨抽取静脉血(肿瘤组患者于入院后次日采血)，采用酶化学法(日本岛津公司生产的CL-7300全自动生化分析仪)测定空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)等生化指标。

四、ELISA法检测血清omentin-1水平

采血时间与生化指标测定同时。抽取静脉血2 ml，置于生化促凝管中，每1 ml血液样品中加入60 μl抑肽酶，4 ℃，3 000 r/min，离心5 min，分离血清，置于-86 ℃冰箱中备用。血清稀释200倍后ELISA法测定omentin-1水平(ELISA试剂盒品牌：CUSABIO，货号：CSB-E09745h，产地：中国)，试剂盒检测的线性范围为1.56～100 pg/ml，组内及组间变异系数分别小于9.5%和10%。待测样品孔的吸光度值使用美国Biotek 公司的ELx 800酶标仪读取，检测波长为450 nm。

五、统计学方法

所有数据应用SPSS 19.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差表示，采用Kolmogorov-Smirnov检验是否满足正态分布，正态分布资料间比较采用t检验，不满足正态分布采用Mann-Whitney U非参数检验。应用Spearman相关分析以及二项Logistic回归分析方法，分析血浆omentin-1与其他变量之间的相关关系，检验水准P=0.05，即P<0.05被认为组间的差异在统计学上具有显著性。

结　　果

一、肿瘤组与对照组临床参数、生化指标的比较

与对照组相比，肿瘤组前列腺体积明显小于对照组，两组间差异具有统计学意义(P=0.044 1)，PSA、HDL-C水平明显高于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.01)，而两组患者的年龄、BMI、FBG、TCH、TG、CRE、BUN及LDL-C水平的差异在统计学上均无显著性(P>0.05)。肿瘤组的血清omentin-1水平显著高于对照组，组间的差异在统计学上具有显著性(P<0.000 1)。结果见表1。

表1　肿瘤组与对照组人群临床资料及生化指标的比较±s)

与对照组相比*P<0.05；△Mann-Whitney U检验

二、血清omentin-1与不同临床参数、生化指标间的相关性分析

Kolmogorov-Smirnov检验发现本研究中omentin-1数值不满足正态分布，故采用非参数Spearman相关性分析法探究各临床参数、生化指标与血清omentin-1水平的关联。统计结果显示，全组的omentin-1水平与HDL-C、PSA水平呈显著正相关(分别r=0.363，P=0.000 6；r=0.356，P=0.000 8)，与FBG呈显著负相关(r=-0.230，P=0.033)，肿瘤组中omentin-1水平仅与TG水平呈显著负相关(r=-0.424，P=0.004)，对照组中omentin-1水平仅与血CRE浓度呈显著正相关(r= 0.361，P=0.019)，其余指标与omentin-1水平均未见统计学意义上的显著相关(P>0.05)。结果见表2。

表2　血清omentin-1水平与不同临床参数、生化指标间的Spearman相关性分析

三、二项Logistic回归分析各生化指标对血清omentin-1水平的影响

依据Spearman相关性分析的结果及二项Logistic回归分析的统计学要求，我们将检验水准放宽到P=0.1，以免将可能对血清omentin-1水平产生影响的生化指标遗漏。以omentin-1中位数作为分组依据，二项Logistic回归分析结果显示，omentin-1水平仅受分组的显著影响(P=0.000 4)，即罹患PCa是使患者血清omentin-1水平升高的一个独立影响因素，其余参数对血清omentin-1水平的影响均不具有统计学意义(P>0.05)。结果见表3。

表3　二项Logistic回归分析各生化指标对omentin-1水平影响

讨　　论

随着人们生活方式及饮食习惯的调整，PCa及肥胖的患病率正逐年升高[1-14]。目前关于肥胖与PCa之间的关系，报道并不一致。Porter等[13]报道BMI值高于29 kg/m2者罹患PCa的风险较低BMI人群会降低。而Rundle等[8]对6 692例行经尿道电切术患者的资料分析发现，肥胖者中前列腺上皮内瘤变的比例较高(OR=2.15)。Fowke等[15]和Allott等[16]的研究均报道肥胖与高级别PCa呈正相关，而与低级别PCa呈负相关，Renehan等[17]发现肥胖与PCa患病率呈线性正相关。Uyeturk等[11]认为BMI是PCa发病率增加的一个因素，而Baillargeonon等[18]报道BMI与PCa未见明显相关性。本研究中两组间BMI未见明显差异，即BMI可能并非PCa的独立影响因素，该结果与Baillargeonon等的研究报道结果类似。

本研究发现PCa患者的血清omentin-1水平高于年龄、体重等匹配的前列腺增生对照组，与Uyeturk等报道的土耳其人群中的结果一致。目前有报道发现血清omentin-1水平与BMI、腰臀比呈负相关，与血清脂联素和HDL-C水平呈正相关[19]。我们的前期研究结果显示肾癌患者血清中omentin-1水平与BMI呈负相关[20]，Assadi等[21]发现BMI与omentin-1并不存在显著相关性。而对本组资料的Spearman相关性分析显示，血清omentin-1水平与BMI未见明显相关，该结果与Assadi等报道的结果类似，同时全组omentin-1水平与HDL-C呈正相关，具有统计学意义(r=0.363，P=0.000 6)，与Chen等[22]的报道一致。另外Spearman相关性分析还发现血清omentin-1水平与PSA水平呈正相关，而PSA作为反映PCa发生、发展的一个重要指标，在一定程度上反映了omentin-1水平受PCa影响，二项Logistic回归分析进一步佐证了我们的观点。但在本实验中仅发现全组中omentin-1与HDL-C及PSA均具有正相关，在肿瘤组及对照组中虽然有正性相关趋势，但相关性不具有统计学意义(P>0.05)，此结果可能受样本量影响，有待于多中心大样本随机对照实验验证。本研究结果提示血清omentin-1与本组人群PCa发病可能存在密切联系，而且这种关联性独立于肥胖等影响因素之外，此发现有待扩大样本量来进一步证实。

目前对omentin-1参与PCa的信号通路的认识非常有限。研究发现omentin-1可增强人皮下以及网膜脂肪细胞丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt) 磷酸化活性[22]。另一篇报道证实omentin可通过Akt信号通路导致肿瘤血管生成[23]。已知Akt信号通路除了在调节包括增殖、凋亡、代谢在内的细胞基本功能上必不可少外，而且还涉及血管通透性、血管再生以及成熟过程。研究发现Akt信号通路的激活可提高肿瘤细胞增殖活性，抑制凋亡效应，上调血管内皮生长因子表达，诱导肿瘤血管形成，从而促进肿瘤的进展[24]。此外，内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)为已知的Akt下游作用靶点，而研究已发现eNOS在癌症发病中发挥重要作用，因此普遍认为Akt-eNOS信号通路在肿瘤的发生、发展上起着关键作用，磷酸肌醇-3激酶(PI3K)可激活Akt-eNOS，从而构成PI3K-Akt-eNOS级联信号通路，研究已证实该信号通路在启动原癌基因Ras诱导的肿瘤生长以及维持过程中必不可少。以上研究证据提示PI3K/Akt-eNOS级联信号通路可能涉及omentin-1导致PCa的发病过程，此观点有待体外实验以及动物实验来证实。另外，最近发表的一些研究表明omentin-1可能参与不同部位肿瘤的发病。Mogal 等[25]发现omentin-1可通过抑制转录因子Nkx3.1活性抑制PCa的发生，敲除omentin-1基因可促进PCa细胞的增殖。另一项研究也发现，omentin-1可通过调节沉默信号调控因子(Sirt1)依赖的p53去酰化作用，促进肝癌细胞的凋亡[26]。Fazeli等[27]发现结直肠癌患者中omentin-1水平明显高于正常人群，Uyeturk等[11]在土耳其的PCa患者中得到了类似的结果。

综上所述，本研究发现PCa患者血清omentin-1水平较对照人群显著升高，血清omentin-1水平与PCa发病存在显著相关性，并独立于肥胖等影响因素之外。但由于本研究样本量较小，且是一个单中心的横断面研究，因此，需大样本多中心的前瞻性研究来佐证本结论，为评估omentin-1是否可以进一步开发为新型的PCa诊断标志物提供更加确切的证据。

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(本文编辑：徐汉玲)

The relationship between serum levels of omentin-1 and prostate cancer

ZHANGLi,LIANGChao-zhao,ZHANGLi-gang,ZHOUJun,ZHANGKai-ping,HAOZong-yao,TAISheng,YANGCheng.DepartmentofUrology,theFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversityandInstituteofUrology,AnhuiMedicalUniversity,Hefei230022,China

Correspondingauthor：LIANGChao-zhao,E-mail:liang_chaozhao@163.com

ObjectiveTo evaluate the correlation between serum adipocytokine omentin-1 levels and prostate cancer (PCa). MethodsForty-four patients who had been histopathologically diagnosed with PCa at department of Urology, the first affiliated hospital of Anhui Medical University were included as experimental group, while forty-two controls with benign prostatic hyperplasia (BPH) were enrolled in the study from July 2015 to March 2016. Among them, age was matched in two paired groups. Venous blood was obtained from all patients and healthy people in a fasting state. The omentin-1 levels were determined via utilizing enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) in the paired groups.ResultsAs a result, the levels of serum omentin-1, prostate specific antigen (PSA) and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) were higher compared with the control group, with statistically significant differences (P<0.05). Using the non-parametric Spearman’s rank correlation analysis, we found that serum omentin-1 levels were positively correlated with HDL-C, PSA (r=0.363,P=0.000 6；r=0.356,P=0.000 8). Meanwhile, negative association was found between serum omentin-1 levels and fasting blood glucose (FBG) (r=-0.230,P=0.033). Additionally, binary logistic regression analysis indicated that the serum omentin-1 levels might be the independently influential factor for PCa. ConclusionsSerum circulating levels of adipocytokine omentin-1 were significantly different in PCa group and BPH group, suggesting the tight association between omentin-1 and PCa initiation or progression.

Prostate cancer;Adipocytokine;Omentin-1;Tumor biomarker

国家自然科学基金资助项目(81401518、81370856)；卫计委国家临床重点专科建设项目(2012)；安徽省自然科学基金资助项目(1408085QH180)；安徽医科大学“青年拔尖人才后备人选”资助项目；安徽医科大学第一附属医院国家自然科学基金青年基金培育计划资助项目(2013KJ14)

230022 合肥，安徽医科大学第一附属医院泌尿外科 安徽医科大学泌尿外科研究所

梁朝朝，E-mail:liang_chaozhao@163.com

10.3870/j.issn.1674-4624.2016.03.006

2016-04-30)