抗黄颡鱼“红头病”功能性蛋粉的制备及其应用

柳昭君,郭培红,2,徐　乐,付监贵,肖兰莹,宋学宏

(1.苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州　215123;2.昆山贝瑞康生物科技有限公司,江苏昆山　215345)



抗黄颡鱼“红头病”功能性蛋粉的制备及其应用

柳昭君1,郭培红1,2,徐乐1,付监贵1,肖兰莹1,宋学宏1

(1.苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州215123;2.昆山贝瑞康生物科技有限公司,江苏昆山215345)

1　材料与方法

1.1试验材料

试验用黄颡鱼购自苏州吴江某养殖场,规格(35±5)g,于3 %的食盐水中浸洗5 min后放入苏州大学养殖试验室玻璃钢水族箱中暂养,暂养期间投喂普通黄颡鱼商品饲料,待用。

1.2试验方法

将制备好的菌悬液按体积比例添加0.5 %的甲醛,放入水浴振荡器中,28 ℃振荡48 h灭活[9]。取0.1 mL灭活菌苗接种到绵羊鲜血胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)平板上,28 ℃恒温培养48 h,观察平板上是否有病原菌生长,以确定菌苗中是否含有未灭活完全的病原菌。将确定灭活的菌液6 000 r/min离心30 min,用灭菌PBS冲洗2次,血球计数板计数,调节菌浓度为1×109CFU/mL,于-20 ℃下冻存备用。

1.2.3蛋鸡免疫

选择生物安全隔离条件好、饲养管理科学规范、鸡群健康的吴江市某鸡场,500羽具有高免疫应答能力的正在产蛋的无特定病原体携带的健康产蛋鸡(海兰蛋鸡,112日龄)作为试验鸡群,饲养管理按照海兰蛋鸡产蛋期饲养管理要求进行。蛋鸡首次免疫采用弗氏完全佐剂苗(弗氏佐剂购自Sigma公司),此后免疫采用弗氏不完全佐剂苗,灭活菌苗与佐剂1∶1混合,鸡胸肌与颈部皮下注射免疫,剂量为0.9 mL/只[10]。同样剂量和方法免疫三次,第一次与第二次间隔7 d,第二次与第三次间隔20 d。第一次接种后从第20 d开始抽检鸡蛋中抗体滴度。

1.2.5功能性蛋粉中IgY效价测定

1.2.6功能性蛋粉对黄颡鱼“红头病”的预防试验

免疫保护率=(对照组死亡率-试验组死亡率)/对照组死亡率×100%

1.2.7 功能性蛋粉对感染“红头病”黄颡鱼的治疗试验

2　结果

表1　　爱德华氏菌对黄颡鱼的致病力Tab.1　The pathogenicity of E.ictaluri on P.fulvidraco

2.1功能性蛋粉中IgY效价

2.2功能性蛋粉对黄颡鱼“红头病”的预防效果

给健康黄颡鱼进行攻毒1 d后,试验泼洒组、口服组分别共有5尾和12尾注射部位出现红肿症状,3 d后分别共有8尾和18尾出现鳍条基部、鳃盖和下颌充血,5 d后病鱼头顶皮下发红死亡;对照泼洒组和口服组在3 d内均出现明显症状,7 d后对照泼洒组共55尾死亡,对照口服组共58尾死亡。功能性蛋粉对黄颡鱼“红头病”的预防结果见表3。上述试验结果表明,经本法所制备的功能性蛋粉泼洒或投喂的试验组黄颡鱼能产生显著抵抗“红头病”的能力,免疫保护率分别达到85.5%和70.0%,而对照组的发病率则接近100%。

表2　抗体效价检测时的OD值Tab.2　The OD value of antibody titer test

表3　含抗　爱德华氏菌IgY的功能性蛋粉 对黄颡鱼“红头病”的预防结果Tab.3　The prevention results of the functional egg powder that containing specific IgY against E.ictaluri on red-head disease in P.fulvidraco

2.3 功能性蛋粉对感染“红头病”的黄颡鱼的治疗效果

感染病原菌并开始治疗1 d后,试验泼洒组、口服组分别死亡5尾和9尾,2 d后又分别死亡8尾,3 d后试验泼洒组死亡6尾,试验口服组死亡10尾,4 d后试验泼洒组停止死亡,试验口服组死亡5尾,5 d 后试验口服组死亡3尾,6 d停止死亡;而对照组每天均有死亡。14 d后功能性蛋粉对感染“红头病”的黄颡鱼的治疗情况如表4。试验结果表明,本法制备的特异性免疫蛋粉对感染“红头病”的黄颡鱼有很好的治愈效果,其中泼洒组治愈率达到67.2%,投喂组达到40.7%,而对照组感染“红头病”的黄颡鱼病情基本没有得到任何改善。

表4 　含抗　爱德华氏菌IgY的功能性蛋粉对 黄颡鱼“红头病”的治疗情况Tab.4　The treatment results of the functional egg powder that containing specific IgY against E.ictaluri on red-head disease in P.fulvidraco

3　讨论

1893年Klemperer发现母鸡血清中的抗体可以通过卵向幼雏转移抗体。此后,国内外对各种抗原(细菌、病毒、蛋白质)在蛋鸡产生抗体的机制,以及特异性卵黄抗体在动物疾病感染防治中的作用进行了大量研究[11-16]。与接种灭活菌苗、弱化的疫苗或类毒素宿主所获得的主动免疫相比,卵黄抗体(IgY)属于被动免疫,使宿主肌体直接获得抗体,增强特异性免疫能力。其特点是效应快,不需经过潜伏期,一经输入,立即可获得免疫力;同时,卵黄抗体性质稳定(可常温长期保存)、产量高、成本低,且具有动物种系发生学距离优势;其次,卵黄抗体因其以营养全面、特殊腥味的鸡蛋为载体,具有较强的诱食作用。因此,抗病原体的特异性卵黄抗体具有保持期长、无需提纯、制备与使用方法简单、效价高等优点,在水产动物疾病的防治中发挥重要的作用,具有较好的应用前景。本研究制备的抗黄颡鱼“红头病”的抗体效价达1∶5 120，制成粉剂后可全池泼洒或作为饲料添加剂或预混料直接投喂,克服了其他疫苗只能注射或浸泡才能有效的缺点,使用方便,大大降低了劳动强度,这为预防和治疗黄颡鱼“红头病”提供了一种简单有效的方法。

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(责任编辑：邓薇)

Preparation and application of the functional egg powder against the red-head disease in Chinese yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco)

LIU Zhao-jun1,GUO Pei-hong1,2,XU Le1,FU Jian-gui1,XIAO Lan-ying1,SONG Xue-hong1

(1.SchoolofBiologyandBasicMedicalSciences,SoochowUniversity,Suzhou215123,Jiangsu,China;2.KunshanBestcareBio-TechCo.,Ltd,Kunshan215345,Jiangsu,China)

To evaluate the prevention and healing effects of functional egg powder containingEdwardsiellaictaluri-specific IgY on red-head disease in Chinese yellow catfish (Pelteobagrusfulvidraco),the inactivatedE.ictaluri(The type culture collection number:CTCC NO:M2012024) was used to immunize laying hens,and then the functional egg powder was prepared by film-coating and high-speed centrifugal spray drying techniques.After treatment with the functional egg powder by splashing and/or oral administration,the relative percent survival for the catfish was detected.The results showed that the antibody titer of the functional egg powder achieved 1∶5120.The relative survival rate of catfish was 85.5% or 70.0%,by re-challenge with pathogenicE.ictaluriat 2.0×107CFU/mL after splashing for 3 d with egg powder at 2 mg/L,or after oral administration for 14 d at 0.2% body weight,respectively.On the other hand,the relative survival rate of those artificially-infected withE.ictaluriwas 67.2% or 40.7%,after splashing for 5 d,or after oral administration for 14 d.This observation proved the prevention and healing effects of the functional egg powder on red-head disease in Chinese yellow catfish.

functional egg powder;specific IgY;Edwardsiellaictaluri;Chinese yellow catfish (Pelteobagrusfulvidraco);immune protection

2015-11-12；

2016-03-28

昆山市农业科技计划项目(KN1204)；江苏省科技支撑计划项目(BE2013344)

柳昭君(1990-),女,硕士研究生,专业方向为水生生物健康养殖。E-mail:876191046@qq.com

宋学宏。 E-mail:songxh@suda.edu.cn

S963.73

A

1000-6907-(2016)05-0070-05